Способ получения иммуностимулирующего агента

 

Оll ИСАНИЕ „,592333

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Сокзз Советских

Сощиалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено22.12.72 (21)1886347/28-13 (51) М Кл

2 (23) Приоритет - (32) 24. 12.71

А 61 К 35/66

Гасударственный комитат

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (31) 7 146520 (33) Франция (43) Опубликовано 05.02.78,Бюллетень № 5 (53) УДК 615.373..3 (088.8) (45) Дата опубликования описания lZ.Oi.7 8 (72) Автор изобретения

Иностранец

Робер Фов (франция) Иностранная фирма

"Энститю Пастор" (франция) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИИ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕГО

АГЕНТА

Изобретение относится к медицине, в частности к получению лекарственных препаратов.

Известен способ получения иммуностимулирующего агента путем обработки различных микроорганизмов смесью хлороформа и метанола или другими органическими растворителями с последующим высушиванием и получением водной суспензии (1) .

Недостатком известного способа является высокая токсичность и низкая активность препарата.

С целью снижения токсичности и повышения активности препарата по предлагаемому способу суспензяю микроорганизмов обрабатывают смесью хлороформа и метанола в соотношении 1:1, полученные жидкие фракции разделяют, затем смесь растворителей выпаривают, полученный осадок растворяют в хлороформе и из раствора осаждают целевой продукт физиологическим раствором.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят суспензия, включающую следующие микроорганизмы: Vibrio cholera, Listeria

monocytogenes, Salmonella typhimurium, Escherichia co1i, Corynebactcrium parvum u

Mycobacterium tuberculosus, в смеси хлороформа и этанола, взятых в равных объемах. Полученную суспензию гомогенизируют путем измельчения, затем последовательно отделяют от полученного раствора нерастворенные твердые вещества н подвергают последние испарению в частичном вакууме при температуре порядка

40 С до образования твердого осадка, который растворяют в хлороформе, причем нерастворившуюся часть этого осадка отбрасывают, а оставшийся светлый хлороформный раствор, содержащий в растворенном виде иммуностимулирующий агент, сливают с водным физиолоiÎ гическим раствором. Через смесь хлороформного раствора и водного физиологического раствора барботируют инертный газ до полного удаления из этой смеси хлороформа. Затем в среде водной фракции твердый продукт, содержащий иммуностимулирующий агент, ранее растворенный в хлороформе, но не растворимый в воде, гомогенизируют до получения водной суспензии. После этого суспензия готова для инъекций.

Полученную суспензию можно лиофилизировать, при этом получают желтоватый гигроскопичный порошок, который может быть растворен в хлороформе.

Целесообразно, чтобы объемы раствора хлороформа и водного инъекционного раствора при смешивании имели такие значения, при ко592333

Формула изобретения

Составитель Г. Смирнова

Техред О. Луговая Корректор Е. Папп

Тираж 702 Подписное

Редактор Л. Волкова

Заказ 221/1

U,Í И И ПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и огкрытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4i5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 торых полученная водная суспензия содержала около 105--275 мкг сухого вещества/мг.

/Уример. Для получения иммуностимулирующего агента используют клегки, полученные из культур: селезеночные клетки мыши, зараженной 1.15|ег1а monocytogenes, Salmonella yphirnurium Escherichia col i к 12, Corynebacterium parvum, Vibrio cholera.

K одному объему обрабатываемых клеток добавляют десять объемов смеси равных количеств хлороформа и метанола. Полученную смесь гомогенизируют в дробилке 2 ч при 4 С и центрифугируют при 3500 G 20 мин. Раствор помещают в емкость и подвергают испарению в вакууме при 40 С. Затем емкость наполняют хлороформом и подвергают содержимое вращению со скоростью 40 об/мин в течение 30 мин.

По истечении этого времени раствор хлороформа фильтруют на Ватманской бумаге № 3.

Фильтрат, содержащий иммуностимулирующий агент, хранят при 4 С в стеклянном флаконе.

Для получения водорастворимого препарата, в пробирку вводят определенный объем полученного хлороформного раствора и равный объем апирогенного 8%-ного раствора хлористого натрия.

Через полученный раствор барботируют инертный газ, например, азот или смесь, состоящую из 95% воздуха и 5% углекислого газа.

Барботаж ведут до полного удаления хлороформа. Иммуностимулирующий агент из хлороформнсго раствора переходит в суспечзию в водной фазе. Эту суспензию затем гомогенизируют до размера частиц суспензии 20 мкм.

Полученная суспензия имеет опаловый от5 лив.

1. Способ получения иммуностимулирующего агента путем обработки суспензии микроор1о ганизмов смесью хлороформа и метанола с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью снижения токсичности и повышения активности препарата, суспензию микроорганизмов обрабатывают смесью хлОроформа и метанола в соотношении

1:1, полученные жидкие фракции разделяют, затем смесь растворителей выпаривают, полученный осадок растворяют в хлороформе йз раствора осаждают целевой продукт физиологическим раствором.

2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что обработке подвергают суспензию, включающую следующие микроорганизмы: Vibrio

cholera, Listeria monocytogenes, Salmonella

typhimurium, Escherichia col i, Согупе0ас1ег1um parvum u Mycobacterium tuberculosus. 5 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

l. К бот Е. и Майер М. Экспериментальная иммунохимия. 1968, с. 549.