Способ получения вещества, регулирующего водно-солевой обмен

 

.!

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (и) 602182 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 09.03.76(21) 2332927/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 15.04.78. Бюллетень №1 (45) Дата опубликования описаиие21.03.78

51) N Кл2

А 61 К 35/30

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам нзооретений м открытий (53) УДК 615.45:612..826.33.015.

22 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г. А. Вилков, Л. П. Сизякина, Э. С. Гульянц. и Л. И. Межова

Ростовский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, РЕГУЛИРУЮЩЕГО ВОДНО-СОЛЕВОЙ

ОБМЕН

Изобретение относится к области медицины, а именно эндокринологии, и может найти применение для лечения стеков при заболеваниях сердечно-сосудистой системы и почек н других осложнениях гиперальдостеро- 5 низма, в космонавтике для профилактики экслрессного оводнения организма, перед приземлением, а также для исследования механизмов взаимодействия минералокортикоидной функции надпочечников с нейроэндокрин- 10 ными центрами ее регуляции.

Известен способ получения вещества, регулирующего водно-солевой обмен, заключающийся в том, что исходную ткань- эпифиз гомогенизируют, полученным гомогена- 15 том иммунизируют животных и из сыворотки крови животных выделяют целевой продукт 11). Однако известный способ не обеспечивает высокой специфичности действия вещества. 20

Белью изобретения является повышение специфичности действия вещества.

Эта цель достигается тем, что в качестве исходной ткани используют субкомиссуральный орган, гомогенат которого перед имму- 25 низацией смешивают с адъювантом Фрейнда, а целевой продукт выделяют из сыворотки крови осаждением каприловой кислотой.

Способ осуществляют следующим образом.

Для приготовления вещества оерут 5 r субкомиссурального органа мозга (1 часть) животных, гомогенизируют с 5 мл (равным объемом) физиологического раствора, смешивают (до получения гомогенной массы - эмульсии) с 2 ч стимулятора Фрейнда. В состав последнего входят ланолин и вазелиновое масло в соотношении 1:2 и 20 мг/мл сухой

Вакцины ELQK", Полученную смесь(эмульсию и стимулятор Фрейнда) вводят в дозе О, 1 мл/кг в подушечки задних конечностей и внутрикож-, но в область спины собак равными объемами . Иммунизацию осуществляют трехкратно с интервалом.в одну неделю. Спустя 7 дней после окончания иммунизации с помощью реакции связывания комплекта определяют титр антител против субкомиссурального органа мозга и при его уровне не ниже 1:160 отбирают кровь иммунизированных животных в целях приготовления из нее сыворотки. Для усиления биологического дейс вия конечного

602 182 ностью.

Составитель С. Малютина

Редактор lI, Новожилова Техред А. Богдан Корректор А. Власенко

Заказ 1 6 90/3 Тираж 703 П одпис ное (((((!И!!(! Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал !!!!!! "!!атеит, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 продукта — выделенного вещества, регули j рую. лего водно-солевой обмен, из полученной сыворотки его концентрируют путем осаждения каприловой кислотой. Полученное вещест во пропускают через антимикробный фильтр и запаивают в ампулы. К 5 кг субкомисс уральцого органа мозга добавляют 5 мл физиологического раствора и 10 мл стимулятора

Фрейндв (3,3 мл ланолина, 6,7 мл вазелинового масла и 20 мгlмл сухой Вакцины, !О

БЦЖ). Полученную смесь тщательно гомогенизируют и вводят собаке весом 10 кг в дозе 0,1 мл/кг (всего 1 мл) внутрикожно в область спины, справа и слева. Спустя неделю проводят повторную иммунизацию !5 полученной смесью в дозе 0,1 мл/кг (всего

1 мл) внутрикожно в подушечки передних лап и в область спины в дозе,0,1 мл/кг (всего 1 лш). В течение всего периода опыта собаку содержат на стандартном рационе 20 вивария. Спустя 7 дней после завершения иммунизации проводят контрольное определение титра антител в сыворотке крови против субкомиссурального органа мозга реакцией связывания комплемента. При титре 1:160 производят кровопускание 250 мл крови посредством каиюли, введенной в соннук артерию. !!олученную кровь центрифугируют при комнатной температуре в течение 15 мин при 3000 об/мин. Количество сыворот- 30 ки в надсадочиым слое составляет 80 ли.

Затем к HO мл сыворотки добавляют 160 лш

0,1 М ацетатного буфера при р!! 4,8 и 16 лл каприловой кислоты. I lîëóчеиную смесь энергично встряхивают с пол1ошью шутел -аппа35 рата в течение 5 мин и вновь центрифугируют при 3000 o6/мин в течение 10 мин.

Надсадочную жидкость, содержащую искомое вещество, диализуют против дистиллированной воды при +5 С в течение 24 ч и концентрируют до l/10 первоначального объема сыворотки с помощью сефадексв. бвтем в целях стерилизации пропускают через антимикробный фильтр и запвиввют в ампуе лы. Вещество хранят при +5 С. Полученное вещество вводят. испытуемым животным, его биологическая активность высока.

Предлагаемый способ обеспечивает получение вещества, регулирующего водно-солевой обмен с высокой биологической вктивФормула изобретения

Способ получения вещества, регулирующего воднс солевой обмен, путем гомогенизации исходной ткани с последующей иммунизацией гомогенатом ткани животных и выделением целевого продукта из сыворотки крови, о т л и ч в ю шийся тем, что, с целью повышения специфичности действия . вещества, в качестве исходной ткани используют субкомиссуральный орган, гомогенат которого перед иммунизацией смешивают с адъювантом Фрейнда, а целевой продукт, выделяют пз сыворотки крови осаждением каприловой кислотой.

Источники информации, принятые во внилиние при экспертизе:

1. Берхпн Е. И., Хелимский А. М.

С роли эпифпза в рог уляцпи секреции альдостерона . 1971, с. 61-64.