Способ получения хлоргидрата гистидилпролинамида

 

ОП ИСАЙ ИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ .СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) б 0249 6 (б1) Дополнительное к авт. свид-ву

2 (51) М, Кл.

С 07 С 103/52 (22) Заявлено 2403.76 (21} 2336448/23-04 (23) Приоритет — (32) 24 -03. 75 (31) ФРС07с1/184969 (З ) ГДР (43) Опубликовано 150478 Бюллетень № 14 (45) Дата опубликования описания 0404,78

Государственный комитет

Совета Ииниотроа СССР

ll0 делам иэооретений и открытий (53) УДК

547 ° 964.4. ,07 (088. 8) (72) Авторы

Иностранцы

ИЗОбрЕтЕНИЯ Михаель Бинерт, Дьерди Келлер и Хартмут Нидрих (ГДР) Иностранное предприятие Академи дер Виссеншафтен дер ДДР

IS (ГДР) (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХЛОРГИДРАТА

Г ИС Т ИДИЛП РОЛИ НАМ ИДА

Изобретение относится к улучшенному способу получения хлоргидрата гистидилпролинамида — промежуточного продукта в синтезе биологически-активного соединения — тиреотропина. 5

Известен способ получения хлоргидрата гистидилпролинамида путем конденсации карбодиимидным способом пролинамида,с бутилоксикарбонилгистидином в среде органического растворителя при

0 С (11. Согласно известному способу необходима очистка защищенного дипептида на силикагеле, что приводит к значительной потере целевого продукта 15 (выход "58%). Наиболее близким к изобретению является способ, по которому на гистидин, имеющий две различные защиты (бутилоксикарбонильную и бензильную) пд амино- и иминофункциональ- ое) ным группам (2), конденсируют с пролинамидом при температуре О C с использованием карбодиимидного метода. Выход защищенного дипептида в этом случае составляет 92Ъ. 25

Недостатком этого способа состоит в том, что различные защитные группы отщепляют по очереди (бутилоксикарбонильную действием H Br в уксусной кислоте, бензилгидрированием), что свя- 30 зано с дополнительными операциями по очистке и с потерей выхода.

Цель изобретения — упрощение способа получения хлоргидрата гистидилпролинамида, повышение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что хлоргидрат пролинамида,конденсируют в органическом растворителе с активированным эфиром ди-трет-бутилоксикарбонилгистидина, процесс проводят при температуре 0-50"C.

Предпочтительно в качестве активированного эфира ди-трет-бутилоксикарбонилгистидина используют л -нитрофениловый эфир и процесс проводят при температуре 20 С.

Пример. а) Гистидилпролинамиддигидрохлорид..Н-гис-про- К)1 2НСЕ а

1,14 r (10 мМ) Н-проЯНэи 5 г (10,5 мМ) бок-гис (бок) -тт-нитрофенилового эфира (где бок-трет-бутилоксикарбонил) растворяют в 15 диметилформамида, перемешивают смесь в течение 72 ч при комнатной температуре, растворитель отгоняют при пониженном давлении (температур бани не выше 45 C).

Полученный сироп растворяют в

25 мл 2 н.раствора HCE в ледяной уксусной кислоте и перемешивают в течение .

602496

Формула изобретения а

Составитель В. Волкова.

Редактор Н. Потапова Техред А.Алатырев Корректор Н.яцемирская

Заказ 17бl/20 Тираж 559 Подписное

ILHHHIIH Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

70 мин при комнатной температуре. Раствор по каплям приливают к 150 мл сухого. эфира и оставляют на 3 ч. Эфирный слой отделяют декантацивй от выпавшего маслянистого осадка дипептидгидрохлорида и отбрасывают. Маслянистый осадок растирают с 50 мл эфира до получения твердого порошка. Эфир отделяют декантацией. Операцию повторяют трижды. Затем порошок растворя- 10 ют в 20 мл абсолютированного метанола и продукт высаживают 150. мл абсолютированного эфира. После многократного перетирания с эфиром, описанным выше способом получают твердое вещество, !5 которое сушат в течение 2 дней в вакууме над KOH. Выход : 2,89 г белого, сильно гигроскопического порошка (90% от теоретического вы1 ода в расчете на Н-про- ИН ) . Прн хроматографирова- 20 нии на G(0ц fo Р е Lava:бе, С&&к в системе м-бутанола, ледяной уксусной кислоты, воды и уксусного эфира (1:1:

:1:1 по объему) продукт дает одно пятно с Я 0,17. 25

Результаты определения хлора потенциометрическим титрованием 0,01н.АцC9:

Вычислено,%: 11,7 С1, Найдено,%: 11,3 С1 () g =-59,5 (С = 1, Н О) . в) Пироглютамилгистидилпролинамид, (пглю;гис-про- ИН, TRH)

К смеси 2,86 r (8,9 мМ) Н-гис-про-N g . НС(в 35 мл ДМФА, охлажденной до

0 С, добавляют 2, 5 мл (17, 8 мМ) триэтиламина и 3, б r (8, 5 мМ) пентахлорфенилового эфира пироглютаминовой кислоты. Перемешивают смесь в течение

72 ч, выпавший в осадок хлоргидрат тетраэтиламина отделяют фильтрованием.

Маточник упаривают при пониженном давлении при температуре 45оС..Сухой остаток растворяют в 5 мл смеси хлороформа и метанола в соотношении 2:1 и помещают раствор в хроматографическую колонку с силикагелем (60 х 3 см), 45 заполненную смесью хлороформа и метаног а в таком же соотношении. (Скорость элюирования 40 мл/ч; фракции собирают по 10 мл и исследуют с помощью тонкослойной хроматографии). Элю- 50 ирование начинают смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:1, затем это соотношение меняют на 1:2. Фракции„ содержащие. только, TRH, объединяют, растворитель отгоняют в вакууме, су- 55 хой остаток растворяют в 20 мл дистиллированной воды и подвергают сублимационной сушке. Фракции, содержащие примесь других продуктов вновь подвергают хроматографированию, Хроматографию в тонком слое проводят на силикагеле в системе Хлоро-. форм: метанол: аммиак (концент1 йро-" ванный водный раствор) (3:2,2:1 пообъему); Ку продукта 0,76.

Выход 2,4 г гигроксопичного порошка, 68% в расчете на дипептидгидрохлорид.Если расчет вести на суммарную

Формулу С16 Н МэО » ° 1,5 Н О (389,4), полученную по результатам анализа, то, общий выход в расчете на пролинамид составляет 63%.

Анализ:

Вычислено,%: С 49,30; Н 6,47; N 21,59

С в Н М О,, ° 1,5 HgO (389,4)

Найдено,%: С 49,81p H 6,32; N 21,27

Угол вращения (<) ee = — 47 (С = 1,95% Нас) (x) » = -62 (С = 1, Н О) 1. Способ получения хлоргидрата гистидилпролинамида путем конденсации пролинамида с защищенным по амино- и иминогруппам гистидином в органическом растворителе, с последующим"снятием защитных групп и выделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что в качестве защищенного гистидина используют активированный эфир ди-трет-бутилоксикарбонилгистидин, процесс проводят при 0-50 С.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а мшийся тем, что в качестве активированного эфира ди-трет-бутилоксикарбонилгистидина используют и -нитрофениловый эфир.

3. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что процесс проводят при 20 С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1

1. Патент CIA 9 3737422, кл. С 07 С 103/52, 1973.

2. S.K. Chang and о (er, "Synthesis

of PyrogEutarny t aistLdikprofinarnide and ипи s a.f. class Fragmentation " .J.Red. Cke. I

misery 1971, 14, 6, р 481.