Способ получения производных пироглутамил- -гистидил-3- алкилпролинамида

 

:Щ б

Оп ИСАЙЕ

Союз Советскик

Социалистических

Рвспубпик (11) 619 101

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенгу (22) Заявлено 05.03.76 (21) 2331353/23-04 (23) Приоритет - (32) 08.03.75 (31) 10 144/75 (33) Вели кобритани я (43) Опубликовано 050878. Бюллетень № 29 (4S) Дата опубликования описания 050778

2 (51) М. Кл.

С 07 С 103/52

С 07 D 403/14//

//А 61 К 31/415

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изобретений и открытий (53) ЯК 547,964.4. .07 (088. 8) Иностранцы

Барри Арнольд Морган и Дерек Джон Шафер (Великобритания) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма Рекитт знд Колман Продактс Лимитед (Великобритания) (71) Заявитель (5 4 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИ Я ПРОИЗВОДНЫХ

f --ПИРОГЛУТАМИЛ- L --ГИСТИДИЛ-3-АЛКИЛПРОЛИНАМИДА

С О-ЗН.— СН- СО- Y

10

15 в

Вт

С 0(т, а 4 нж

СОУР зу 4

1

Изобретение относится к способу получения новых производных L -пироглутамил- L -гистидил-3-алкилпролинамида, которые могут найти применение в медицине.

Известны способы Получения Пептидов путем конденсации аминокислот и пептидных фрагментов карбодиимидным или азидным способом (1) .

Целью изобретения является синтез новых биологически активных производных гистидина.

Поставленная цель достигается способом получения производных с(-пНроглутамил- ь †.гистидил-3-алкилпролинамида бщей формулы 1

С0-МН- СН- СО-М

З где  — водород, метил;

Я вЂ” ал кил (С, ); к — водород, метил; водород, алкил (С ), ци4-6

4 клоалкил (Са ) 1

11 — водород, метил, 2 заключающийся в том, что соединение общей формулы jJ

R где  — водород, бензилоксикарбонил1 имеет указанные выше значенияя;

Y — гидроксил или азогруппа,. конденсируют с соединением общей формулы ф

4 где Ц вЂ” К вЂ” как указано выше, карбодиимидным или азидным методом с последующим, в случае если В - бензилоксикарбонил, гидрированием полученного продукта.

Предпочтительным вариантом способа, в случае когда Y — гидроксил, явля6)9)О) ется проведение конденсации соединений формулы L и формулы Й карбодиимидным методом в присутствии оксибензотриазола.

Пример 1. (-Пироглутамил4 -гистидил-транс-3-метил- L -пролинамид. 5

М "трет-Бутоксикарбонил-транс-3-метил- L -пролин, Смесь триэтиламина (3 5 мл) и трет-бутил-2,4,5-трихлорфенилкарбоната (3,5 г) добавляют к раствору транс- 10

-3-метил- Ь. -пролина (1,25 r) в трет-бутаноле (12 мл) и воде (8 мл) .

Смесь нагревают 2 ч при 60 С, упаривают, остаток растноряют в 1 н. растворе бикарбоната натрия (50 мл), )5 раствор промывают эфиром. Добавив избыток твердой лимонной кислоты, продукт экстрагируют этилацетатом, объединенные экстракты сушат над сульфатом натрия и упаринают. Получают 1,6 г сырого кристаллического продукта, после перекристаллизации которого из смеси этилацетата и петролейного эфира (40-60 C) получают

1,33 r целевого продукта, т.пл. 146150 С (cL)2о - -60,1о (с - 1,0; хлороФорм) .

М -трет -Бутоксикарбонил-транс-3-метил- ), -пролинамид

М -Метилморфолин (6,0 мл) добавляют к раствору Й -трет-бутоксикарбонил-транс-3-метил- L -пролина (1 1г) о в .тетрагидрофуране (50 мл) при -20 С, Затем rfo каплям вводят свежеперегнанный изобутилоный эфир хлормураньиной кислоты (0,8 r) . Смесь перемешивают

10 мин при -20 С. После добанлени.я концентрированного раствора аммиака (5 мл) реакционную смесь перемешивают

2 ч, упаривают, остаток растворяют и этилацетате (100 мл). Раствор проми- 40 вают 10%-ным водным раствором бикарбоната натрия и рассолом, сушат над сульфатом натрия. Растноритель отгоняют, остаток перекристаллизовывают из смеси этилацетата и петро- 45 лейного эфира (40-60 C) получают целевой продукт (0,91 г), т ° пл. 100101 С; (с(1 = -797 (с 10; хлороФорм) .

Гидрохлорид транс-3-метил- ), -пролинамида

Раствбр хлористого водорода н диоксане (7 5 н.> 5 мл) добавляют к раствору Ь -трет«бутоксикарбонил-транс-3-метил- L -пролинамида (О 65 г) в

I 55 диоксане (10 мл) . Кристаллический продукт через 2 ч отфильтронынают и перекристаллизовынают из смеси этанола и эфира. Выход 0,47 г; т.пл.

235-237 С1(d.3 ° -14,8 (с = 1,0; вода) .

) -Пироглутамил- Ь -гистидил-транс-3-метил- Ь -пролинамид

Ёидрохлорид транс-3-метил- L --пролинамида (0,50 r) в диметилформамиде (ДМ@д) (5 мл) добавляют к раствору . азида Ь -пироглутаьил- 4 -гистидина, 65 приготовленного из гидразина и дипел тида (0,9 г) н ДМФА (15 мл) при -20 С туда же вводят триэтиламин (0,45 мл), !

Смесь выдержи вают при комн ат ной т емпературе 12 ч, фильтруют, упаривают, остаток растворяют в 1%-ном водном растворе пиридина и пропускают через колонку, заполненную Сефадексом

Я-25 (50 r смолы во влажном состоянии; диаметр 2 см) и.уравновешенную

1%-ным водным раствором пиридина.

Элюирование проводят градиентным методом 5Ъ-ным водным раствором пиридина через сферический смеситель емкостью 1 л, наполненный 1%-ным водным раствором пиридина. Фракции, содержащие лродукт (контроль по величине (d-3> и данным TCX), объединяют, упаривают, остаток обрабатывают эфиром. Получают 0,7 г продукта (моногидрата) в виде аморфного твердого вещества, (4-j > -46,7 (с = 1,0; вода);

R g (3 В) О ° 48; т. пл. 145-148 С.

Найдено,%: С 52,5; Н 7,0; К 21,3.

Вычислено,%: С 51,8; Н 6,7, N 21, 3.

II р и м е р 2. L -Пироглутамил-гистидил-транс-3-этил- д -пролинамид.

Диэтиловый эфир бензилоксикарбониламиномалононой кислоты (11,5 r, 38 мл) растворяют в безводном этаноле (50 мл), к раствору добавляют натрий (150 мг) в безводном этаноле (10 мл) . При перемешивании в смесь по каплям вводят пент-2-енал (3,2 г, 38 мл) и перемешивают 1 ч. Добавляют раствор уксусной кислоты (0,29 мл) и этаноле (1 мл) . Реакционную массу подвергают гидрогенолизу в течение 2 ч при атмосферном давлении, применяя палладий на угле (5%) в качестве катализатора. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток растворяют в хлороформе, раствор промывают рассолом, содержащим небольшое количество бикарбоната натрия, сушат над сульфатом натрия, упаривают

Остаток перегоняют при 15 мм рт.ст. и получают 4-этил-5,5-дикарбоэтокси-2"пирролин (5,65 r) в виде бесцветного масла, т.кип. 115-120 С/15 мм рт.ст., в ИК-спектре полосы 1715, 1610 см .

К смеси 1 М гидроокиси натрия (80 мл) и этанола (80 мл). добавляют пирролин (4,68 r. 19,5 мл), перемешивают 4 ч при 50 С, охлаждают, добавляют боргидрид натрия (1, О г) и перемешивают 10 ч при 25 С. Реакционную смесь аккуратно подкисляют разбанленной соляной кислотой до рН 4, концентрируют и концентрат помещают в колонку, заполненную смолой Дауэкс

50 А/ х8 (Н Форма, 10 мл) . Продукт

+ элюируют водным аммиаком (2М), элюат упаринают, получают транс-3-этил- )

-пролин (2, 1 г), т.пл. 208-209 С;

% (ЗВ) 0,43. При анализе аминокислот на анализаторе Джеола бАН (ко619101 лонка 50 см, буфер-цитрат натрия

0,2 н., рН 3,25, температура 57 C) обнаружен единственный пик (элюирование проводят в течение 117 мин). трет-Бутилоксикарбонил-транс-3 -этил- И -пролин получают из транс-3-этил- d -пролина (1,72 г) аналогично примеру 1 в виде масла. Выход (2, 82 г); R g (ЗА) 0,92. трет-Бутилоксикарбонил-транс-3-этнл- Н -пролинамид готовят из трет-бутилоксикарбонил-транс-3-этил- с) —

-пролина (3,5 r) как в примере 1. 10

После хроматографии на колонке с силикагелем получают трет-бутилоксикарбонил-транс-3-этил- с) -пролинамид (3,1 r) в виде кристаллов белого цвета, т.пл. 78-80 С.

Гидрохлорид транс-3-этил-Я -пролинамида получают из трет-бутилоксикарбонил-транс-3-этил- И -пролинамида (3,0 г), как в примере 1, в виде белых KpHcTcl1IJIoBi т.пл. 206-207оC1 20 (3А) 0,22; Ч (ЗВ) 0,72 °

Гидрохлорид транс-3-этил-И -пролинамида (0,5 г) растворяют в воде, раствор пропускают через колонку, заполненную смолой ДЕАЕ-Сефадекс (в

ОН -форме) . Фракции, содержащие продукт (контроль по данным ТСХ), объединяют, упаривают досуха и получают гидрат транс-3-этил-с1с -пролинамида г (0,45 г) в виде твердого вещества белого цвета, т.пл. 89,5-91оС; % (ЗА)

0,22; Rg (ЗВ) 0,72. транс-3-Этил- И -пролинамид (288мг, 2 мл), бутилкарбонил- " -пироглутамил-гистидин (822 г, 2 мл) и оксибензотриазол (550 мг, 4 мл) раство- 1 > ряют в ДИФА (6 мл) ° Раствор охлаждают до ОоС, добавляют к нему дициклогексилкарбодиимид (480 мг, 2,2 мл) и перемешивают 18 ч. Осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают. Полученное 40 масло растворяют в смеси тетрагидрофурана и воды (1:1,80 мл), к раствору добавляют палладий на угле (10Ъ, 60мг) и смесь гидрируют 4 ч при атмосферном давлении. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха. Полученную смолу распределяют между этилацетатом (50 мл) и водой (80 мл) . Водную фазу отделяют, упаривают досуха, .остаток растворяют в водном растворе, содержащем 1% уксусной кислоты и

0,05% пиридина. Раствор пропускают 50 через колонку с Сефадексом Ц 25 (в пиридиновой форме), которую уравновешивают водным раствором, содержащим 1% уксусной кислоты и 0,05% пиридина. Продукт элюируют градиентным методом, применяя водный раствор, со.держащий 1% уксусной кислоты и 1% пиридина, с помощью сферического смесителя емкостью 500 мл, наполненного водным раствором, содержащим 1% ук- О сусной кислоты и 0,05% пиридина. Фракции, содержащие продукт (контроль по данным ТСХ), объединяют, упаривают досуха, получают L -пироглутамил- L

-гистидил-транс-3-этил- д(— прели намял (205 мг) в виде твердого аморфнс го вещества белого: вета „т . пл . 1 56160оС; Я (ЗА) 0 27; Rz (38) 0 50

Аминокислотный анализ после кислстного гидролиза продукта показывает следующее: гистидин 0,95, глутаминовая кислота 0,99 и 3-этилпролин 1,06 °

II р и и е р 3. ). -ПироглутамилЬ вЂ” ги стидил- 3, 3-ди метил- д < - проли намид.

Раствор дизтилового эфира бензилч оксикарбониламиномалоновой кислоты (3, 09 r, 10 мл) в безводном этаноле (15 мл) добавляют к раствору этилата натрия (из 100 мг натрия) в этаноле (3 мл) . В полученную смесь вводят

3-метилбут-2-енал {840 мг, 10 мл) в этаноле (6 мл) и перемешивают 24 ч при 25 С. Затем добавляют уксусную кислоту (О 28 мл) и гидрируют 24 ч, используя в качестве катализатора палладий на угле (10% 500 мг). Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, применяя в качестве элюента смесь эфира и петроо лейного эфира (40-60 C) (1: 1), получают 2, 2-дикарбоэтокси-3, 3-диметилпирролидин (О, 9 г) .

Полученный продукт (850 мг) нагревают 4 ч с 5 И соляной кислотой {10 ) выпаривают, получают порошкообразное вещество белого цвета, кристаллизация которого из смеси метанола и эфира дает гидрохлорид 3, 3-диметил- d(- -пролина (451 мг) в виде кристаллов белого цвета, т. пл. 110-112 С. трет- Бутилок си к арбонил- 3, 3-диметил- d(-продин готовят из гидрохлорида 3, 3-диметил- Ю -пролина (1, 07 r), как в примере 1, Получают 1,45 r кристаллов белого цвета, т.пл. 107-109,5 С. трет-Бутилоксикарбонил-3, 3-диметил- И -пролинамид получают из трет-бутилоксикарбонил-3, 3-диметил- d —

-пролина (90п мг) аналогично примеру 1 в виде кристаллов белого цвета, т.пл. 115-117 С; выход 375 мг.

Гидрохлорид 3,3-диметил- d(-пролинамида получают из трет-бутилоксикарбонил-3,3-диметил-И -пролинамида (300 мг), как в примере 1, в виде кристаллов белого цвета, т.пл. 220-223 Ci выход 175 мг.

З,З-Диметил-М -пролинамид готовят из гидрохлорида (170 мг) подобно примеру 1. Выход твердоro продукта

135 мг; RZ (ЗА) 0,19; Wg (ЗВ) 0,70.

L -Пироглутамил- Ь -гистидил-3, 3-диметил- сЫ -пролинамид получают из 3, 3-диметил-дс -пролинамида (100Mr) как в примере 2. Получают 195 г белого порошка, т.пл. 180 С (размягчается при 135 С); %g (ЗВ) 0,65. Амино. кислотный анализ после кислотного гидролиза показывает следующее: гистидин 1,02, глутаминовая кислота 0,89, 619101 (, 3-диметилпролин 1,02. () =+5,9 (c = 1,0(ДМФА) .

Пример 4. Ь -Пироглутамил— — "(-метил-1-гистидил-транс-3-метила 2

L --пролинамид.

N -метил- 1 -гистидин (428 мг) г и нарбонат натрия (288 мг) в воде 5 (5 мл) с рН 8, 5 смешивают с N -оксисукцимидоэфиром бензилоксикарбонилд. -пироглутаминовой кислоты (933мг) в ди<>ксане (5 мл) и перемешивают 15ч при 22 С. Раствор упаринают, остаток )О хроматографируют на колонке с силикагелем (15x330 мм), применяя для .элюирования смесь изопропанол, -этилацетат-уксусная кислота-вода (3:1:1:1 по объему) . После упаривания соотнет- 15 ствующей фракции получают бензилоксикарбонил- Ь -пироглутамил- )(-мег тил- Ь -гистидин (615 Mr) в виде твердого вещества белого цвета, т.пл.

192 — 195" C; Rg (ÇA) 0,21; 11у (ЗВ) 069; З)

fd.) =-1I 3 (c = 1,0(ДМФА) .

-Пироглугамил- Nг -метил-гистидил-транс-3-метил-1-пролинамид готовят, как в примере 2, из бензилоксикарбонил- L -пироглутамил- Nг—

-метил- Ь -гистидина (207 мг) и транс-3-метил- Ь -пралинамида (77 мг) .

Получают гигроскопическое твердое вещество (90 мг) т.пл. 135-140 С; R (ЗВ) 0,60; (А) г = -23 9 (с = 1,0;

ДМФА)

Найдено,Ъ: C 55,0; Н 7,0; l4 21,2.

С„в Н г з (6 04

Вычислено,Ъ: С 55,4; H 6,7; N 21,5, Пример 5. Ь -Пироглутамил- 35

Ь -гистидил-транс-3-метил- Ь -пролинциклогексиламид трет-Бутилоксикарбонил-транс-3-метил- L -пролинциклогексиламид получают из трет-бутилоксикарбонил- 40

-транс-3-метил- Ь -пролина (1,15. г) и циклогексиламина (2,85 мл), как в примере 1, в виде твердого вещества белого цвета. Выход 1,3 r, т.пл. 130134 C; Rg (1F) 0,53. транс-3-Метил- 1- L -пролинциклогексиламид готовят из трет-бутилоксикарбонил-транс-3-метил- L -пролинциклогексиламида (900 мг) аналогично примеру 1. Получают твердое вещество белого цвета (410 мг), т.пл. 111-113 С, (2А) о,зз.

-Пироглутамил- L -гистидил-транс-3-метил- L -пролинциклогексил-. амид получают по методике примера 2 из бензилоксикарбонил- Ь -пироглута55 мил- 4 -гистидина (565 мг) и транс-3-метил- (-пролинциклогексиламида (300 мг) в виде твердого вещества белого цвета (272 мг), т.пл. 145150. C g (ЗА) О, 43; > y (3B) 0,78, 60

faLl = -14,9 (с 1,0; ДМФА); Rg (4A)

0,50.

Пример 6. L -Пироглутамил-гистидил-транс-3-метил- Ь -про1лиíreксиламид.

Указ ан ный продукт готов ят подобно примеру 5. Получают порошкообразный продукт белого цвет à, R (ЗВ) О, 82 .

Пример 7. L -Пироглутамил— гистидил- N -этил- " -npoaHHамид полУчают как н примере 5 11 (ЗА) 0,26; Ry (ЗВ) 0,49.

Пример 8. Ь -Пироглутамил-гистидил-3-изопропил- L --пролинамид получают аналогично примеру 2 . ((< (ÇA) 0,19; R (ЗВ) 0,75, Пример 9. .L -Пироглутамил-гистидил-3-метил- Й,((-диметил-пролинамид получают, как в примере 5. R g (ÇA) 0,27; Rg (3B)

0,75.

В приведенных примерах для ТСХ используют пластины, покрытые Кизельгелем 6(:2S< и системы растворителей:

1Е мет ан ол-хлороформ (1: 4 )

1F метанол-хлороформ (1: 9)

2А хлороформ-метанол-уксусная кислота (18:2:1)

ЗА хлороформ-метанол-уксусная кислота-вода (80:18:2:3)

ЗВ хлороформ-метанол-уксусная кислота-вода (30:20:4:6)

4А бутанол-этилацетат-уксусная кислота-вода (1:1:1:1)

6С бутанол-пиридин-уксусная кислота-вода (30:20:6:12)

7С этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода (120:20:6:11).

Формула изобретения

1. Способ получения производных (-пироглутамил- (-гистидил-3-алкил-пролинамида общей формулы где 11 — нодород, метил;

В(- алкил (С );

2 (- э

Н вЂ” водород, метил;

R — водород, алкил (C, ), цикл оал к ил (С );

R — водород, метил, о т л и ч а ю щ ((й с я тем, что соединение общей формулы где  — водород, бензилоксикарбонил;

6 19101

Составитель В.Волкова Редактор Т.Шарганова Техред Э.Чужик Корректор ll.яцемирская

Заказ 4121/1 Тираж 559 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобрЕтений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, г.Ужгород, ул.Проектная,4

R — водород, метил;

Ч вЂ” гидроксил или азогруппа, конденсируют с соединением формулы

HN О1

ggyR3g4

2 Э где В, Б, R и 9 -как указано выае,карбодиимидным или азидным методом, с последующим, в случае если

 — бенэилоксикарбонил, гидрированием полученного продукта.

2, Способ по и.1, о т л и ч а ющ и и с я тем, что, когда Y -гидроксил, конденсацию проводят карбодиимидным методом н присутствии оксибензотриазола.

Источники информации, рннятые во внимание при экспертизе:

1.Шредер К., Любке Р.,Пептиды, ч.l, М., Мир, l967 с.116.