Адсорбент гепарина крови

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Сеез Советсимх

Сецнаанстпчасктех

РЕСНУбЛМа (iii 655284 (6l ) Дополнительный к патенту(22) Заявлено 010374 (2!) 1899401/23-05

2011162/28-13 (23) Приоритет 200373 (32) 21. 03. 72. (5l) М. Кл.

A 61 К 31/74

Государрстаеииый комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (3! ) 22152-A/72 (33) Италия

Опубликовано 300379.Бюллетень РЙ 12

Лата опубликования опнсання 3003.79. (53) УДК 612 ..014. . 462 ° 9: 615. .361.36 (088.8) Иностранцы

Мария Антониетта Марчисио, Паоло Феррути, и Фердинандо Пануссо (Италия) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма Замбон С.п.А (Италия) (73) Заявитель (54) АДСОРБЕНТ ГЕПАРИНА КРОВИ

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается получения сорбированных препаратов.

Полимеры, содержащие мономерные звенья иэ группы бис-акрилпиперази- 5 нов и алифатических бис-акриламидов общей формулы

1 — - -(2j -н - о — "н !Нъ т л Ъ 1

Вт Rt известны в качестве химических соединений fl).

Целью изобретения является расширение арсенала адсорбентов гепарина.

Эта цель достигается применением полимеров, содержащих мономерные звенья иэ,группы бис-акрилпиперазинов и алифатических бис-акриламидов об- З1 щей формулы

CH =CH-CO-!!-(СН ) -й-CP-С!!=С)-! г г п гъ

3. г где n=l-б, R<, Вг-одинаковые или различные, и означают водород или С1-С -алкилу из группы, состоящей из первичных или вторичных диаминов общей формулы

НН вЂ” (СНа)а -> R з Rt R1

:где n=l-б, В1, R> HR> — водород или C;C+(-astкил при условии, что только один иэ них является водородом и В -CH>

Вг отличается другими мономерными звеньями из группы, состоящей из пиперазиновых моно-, дикарбоновых кислот и алифатических аминокислот о6щей формулы

H N — СНг-(R)„ — СООН, где п=0 или 1, R - -линейный или разветвленный алифатический радикал С -Сь иэ группы, состоящей из аллиламиновых и алифатических, насыщенных аминосоединений, содержащих 2-12 атомов углерода и две первичные аминогруппы, или иэ группы, состоящей из винилпирролидона, N-акриломорфолина и акриламида, в качестве адсорбента гепарина крови.

Полимеры могут быть получены в виде линейных сополимеров, растворимых в биологических жидкостях, или в твердой форме, имеющих поперечные связи, или сополимеров, нерастворимых в биологических жидкостях. б 55284

Линейные водорастворимые сополимеры получают путем растворения хотя бы одного мономера из группы, состоящей из бис-акриламидон, одного мономера иэ группы, состоящей из первичных и вторичных аминов и мономера

Из группы, состоящей из карбоксиль- 5 алых аминокислот, в воде или гидроксилиронанном иротонном растворителе, например, в спирте. Мономерная смесь полимеризуется при температуре от 10 до 50 С в течение времени от 3-4 ч )0 до нескольких дней — 3-5 суток, Для этого к полученному раствору линейного сополимера добавляют хотя бы один гидрофильный виниловый или винилидоновый мономер, и дают ему возможность )5 образовать поперечные снязи под действием условий радикальной полимеризации н присутствии подходящих катализаторов, например перекисей или азосоединений. 20

Виниловый или винилидоновый мономер избирается, предпочтительно, из группы, содержащей винилпирролидон„

N-акриломорфолин или акриламид.

На практике предлагаемый адсорбентц применяют следующим образом.

Биологические среды (рН=3-10) с подлежащими контролированию или захватыванию полианионами контактируют с уланлинающей или комплексоооб- З0 разующей средой, активным началом которой является макромолекулярная цепь, н течение промежутка времени достаточного для того, чтобы поли(айяд-амин) „ образующий основное начало комплек- 35 образующей среды, вступил но взаимодействие с подлежащими захвату полианионами (предпочтительно 1-600 с) .

Захватывающий агент в виде твердого вещества, нерастворимого B биологичес-40 ких жидкОстях и Обладающего нысОкОраэвитой поверхностью, вводят в тесный контакт с биологической жидкостью, содержащей полианион, н частности гепарин. Захватывающий агент в форме 45 раствора смешинают с биологической жидкостью, содержащей нейтрализуемый полианион, без отделения образующегося комплекса от этой жидкости.

Адсорбент применяется с помощью 50 устройства с контуром течения биологической жидкости, в котором находится подлежащий контролированию или захвату полианион.В этом контуре предусматривается эона тесного контак- 55 тиронания биологической среды и комплексообразующего или захватывающего агента, находящегося в твердой фазе и обладающего высокоразвитой понерхнос. тью.В предпочтительной форме реализа" ции устройства контактная зона представляет собой трубчатый элемент, через который течет биологическая жидкость. Трубчатый элемент заполняется тонкоизмельченным комплексообразующим агентом, который удерживается в труб-ба чатом элементе соответственно перфорированнымиыми удержи нающи ми пере городками .

Контакт может быть обеспечен твердыми элемент ами, выполи ен ными в виде твердых опор с большой, по сравнению с объемом, поверхностью, покрытых пленкой из комплексообразующего или захватывающего агента, или твердыми элементами, образованными из смеси комплексообразующего агента и инертного, в условиях применения, твердого нещестна.

Предлагаемые полимеры обладают способностью вступать во взаимодейстние с антикоагулирующими веществами кислотного характера в биологической с;реде, и при этом не возникают вредные побочные явления, присущие веществам, применяемым в настоящее время. В линейной форме, будучи использованы в растворах, они нейтрализуют антикоагулирующую способность гепарина, растворенного в воде или биологических жидкостях. Вместе с тем сами они не обладают свойственными протамину или полибрену антикоагулирующими снойствами, не влияют на факторы коагуляции и не создают связанного с применением избыточных доз риска.

Полимеры, предлагаемые по данному изобретению, обладающие поперечными связями или находящиеся в водонерастворимой форме, способны селективно адсорбиронать гепарин, содержащийся н водном растворе или биологических жидкостях, например, гемолимфе, крови и т.п.

Они отличаются исключительной селективной способностью адсорбирования из биологических жидкостей только кислых полисахаридов или мукополисахаридон и не адсорбируют другие макромолекулярные или не макромолекулярные вещества. Они не обладают гемолитическими свойствами, не влияют на пластинки и другие компоненты крови, достаточно стойки во времени, обладают высокой адсорбционной способностью. Так, например, в водных. растворах гепарина они адсорбируют, в подходящих условиях, превышающее собственный вес весовое количество кислых полисахаридов.

Полимеры особенно пригодны в виде гранул диаметром от 0,01 до 15 мм для создания молекулярных фильтров, способных удержать проходящие через них гепарин или другие кислые муко° полисахариды. Применение подобных фильтров предстанляет собой новый способ удаления присутствующего в крови гепарина без модифициронания

его состава, причем посторонних веществ не вводится, другие компоненты не экстрагируются и ни в какой. мере не меняются биологические и функциональные свойства крови. Такие

6552 фильтры могут быть применены, например, для удаления гепарина иэ консервированной с ним в сосудах крови, для химических, биологических и иных целей с полным или частичным восстановЗтением характеристик способности к коагуляции. 5

Эти фильтры могут .быть использованы в контуре аппарата, предназначенного для циркуляции биологической жидкости вне тела человека, например в аппарате сердце-легкие, аппаратах 10 частичного перепуска, диалиэа вне почек, устройствах для очистки крови вне тела, в устройствах для уменьшения содержания вынуждено исполь- . зуемых гепарина или других антикоагу- )5 лянтов; а также s артериальном или венозном контуре крови, имеющем или не имеющем вспомогательный насос, с целью уменьшения содержания гепарина эндогенного или экзогенного проис- 20 хождения.

Предлагаемые для применения адсорбенты, будучи нерастворимыми в воде или биологических жидкостях, раздельно или в смеси с другими макромолекулярными веществами, пригодными для образования конструктивного материала медицинского назначения, становятся в свою очередь после полного насыщения гепарином излишне антитромбогенными. Они образую с гепарином комплексные соединения, отличающиеся стойкостью в течение длительного промежутка времени, даже при колеблющейся в широком диапазоне величине рН или в физиологической среде. Они особенно пригодны для производства антитромбогенных объектов для замены систем, основанных на хлористом бенэалконе, так как они не гемолитичны и значительно более стойки во времени и под механической нагрузкой.

Таким образом создается возможность применения предлагаемого адсор.бента, либо в отдельности, либо в сме-45 си с другими веществами,для изготовления искусственных органов, которые должны соприкасаться с кровью, например, насосов или клапанов для цирк;.— ляции крови, сосудистых или сердечных катетров и протезов ° Реактивность функциональных групп не создает, в токсикологическом аспекте, агрессивного воздействия на клеточные мембраны, Приведенные ниже примеры иллюстрируют получение полимеров, предлагаемых в качестве адсорбентов гепарииа.

Пример 1. 7,76 r 1,4-бис-акрилилпиперазина, 14 мл 1 M раствора асимм-N,N-диметилендиамина и 1,05г глицина помещают в пробирку с притертой пробкой и боковым краником. Воздух выгоняют из пробирки путем пропускания через боковой краник сильной струи азота. Под током азота пробирку 65

84 6 энергично встряхиьают до тех пор, 11<>ка смесь не становится roMoreHHc>A, и добавляют 6 мл 1 М водного раствора этилендиамина. Смесь размешивают, пробирку отключают от атмосферы азота и выдерживают в течение 4-х суток.

Затем содержимое извлекают, промывают водой и измельчают до требуемого размера частиц, повторно промывают ацетоном спиртом и простым эфиром и вы/ о сушивают в вакууме 0,1 мм при 40 С.

Получают 10,5 г полимера, обозначенного B2R-73 и имеющего формулу (1):

С222

СН вЂ” СК -СО -М М вЂ” СΠ— СН вЂ” СН

2 2 )12 СЕ2 Х

-М1

С )12

3,3/Юя — -М

С)12 — С112- 1 (Ж) 3,3/Ю Я вЂ” N CK — Сн -М

2 2

3/36я

Пример 2, Повторяют методику примера 1. 7,76 г (4 сантимоля)

1,4-бис-акрилилпиперазина (полученного известным .образом из акрилилхлорида и пипераэина) и 28 мл 1 М раствора асимм-N,N-диметилендиамина помещают в пробирку, и смесь размешивают в токе азота. По окончании растворения добавляют 6 мл 1 М раствора этилендиамина, и процесс продолжают аналогично примеру 1 ° Получают 10,6 r полимера, обозначаемого B1R-73 и имеющего формулу (2)„.

СН2 СК2

СН, — СН,-СО-М

Г

¹ СΠ— CK — CK

С122 СН2

-М1

Ka >(K3)2 (,о

Пример 3. Повторяют пример

1, но 1,05 г глицина заменяют 2,436г

2,3-транс-пиперазиндикарбоновой кислоты. Получают 11 г продукта, обозначаемого B3R-73 и имеющего формулу (3): — -N — СН вЂ” СН -N

2 2 я

3(tel,й2- й2

СК2- СК2 — СО-М М вЂ” СО - СН вЂ” СН2—

/ 2 2 СК2

СООК COOK

Г

- ы— -К М

1 /

СН2- СК2- С 13) а 3 ФО Щ2 — 1 4,%/ля

-ЪГ-CK — CE -М

3(/211 Я

655284

) 1 1

C1(2

1 соон

Снг СН2 1а Снз)г з,а(юк

-> СКг СК СК г СНг СК2 ! г 2 СН г - СКг, — СИ вЂ” сн — со -м /

»1 -СО- сн — СН

С»кг 2 а(ю».

20 к Пример 7. Повторяют пример 1, заменив. 14 мл 1 М водного раствора асимм-N,N-диметилендиамина таким же количеством 1 М водного раствора симмI

25 Ы,М -диметилэтилендиамина с .использованием таких же количеств других реагентов. Получают 10 5 r продукта, обозначаемого B4R-73 и имеющего формулу (7):

1 снг сна ЖЖ1г г/ю»

СОоК (ю, >- CHa Сна

1 СКа Спг

CH -СН.,-СО- н а а

12- Со- Сн,— ск-—

СНа- СНг к

Пример 5. Повторяют пример 1, но вместо 7,76 r 1,4-бис-акрилилпиперрзина применяют 8,96 г N,Nдиэтил-N N -диакрилилэтилендиамина с использованием аналогичных количеств других реагентов. Получают 11,5 r продукта, обозначаемого B2R-73 и имеющего формулу (5): г(ю»

Снг СНг СО аг СНа СКг — В-СО 1 а СН2

1 1 сдц СУа

-М1

СКа

Снг- СК;12(сИДг s,ü(oõ

-м-сн,— сн -з

1 г 2 Сна сн -ск — со-м

М вЂ” C0-СН -СŠ— М— а

112 Сна СК,— Сна —.8(СНа) 2

П р и м ». р 9, Повторяют преды- 1 М раствора асимм-N,N-диметилэтилендущий опыт, н с использованием 7,76г диамина и 1,5 глицина. Получают

1,4-бис-акрилялпиперавина и 20 мл 65 твердый продукт, растворимый в воде, Пример 4, Повторяют пример

1, но с использованием вместе с таким же количеством .1.,4-бис-акрилилпиперазина 12 мл l М раствора асимм-N,N-диметилэтилендиамина, 0,9 r глицина и 7 мл 1 М раствора этилендиамина. Получают продукт с таким же выходом. Аналогичным образом, используя 7,76 r 1,4-бис-акрилилпиперазина, 10 мл 1 М раствора асимм-N,N-.диметилэтилендиамина, 0,75 г глицина и 10 мл. 1 М этилендиамина, получают продукт, обозначенный B2R-55. При использовании 7,76 r 1,4-бис-акрилилпиперазина, 8 мл. 1 М асимм-NgN-диме" тилэтилендиамина, 0,6 мг глицина и

12 мл 1 М,этилендиамина получают продукт, обозначенный B2R-46 и имеющий формулу (4):

Пример 6, Пример 1 повторяют, заменив б мл 1 М водного раство» ра этилендиамина 6 мл 1 М водного раствора гексаметилендиамина. Полученный продукт, обозначаемый B2ER-73, имеет формулу (6):

5 снг- СК2

Снг — СКг — СО -14 м-со-ск,— ск, СКг — CK2

6 СК2 СЕа м си а снг

CK

1 ск а(ю а Ъ

Пример 8. Поступая в точном соответствии с примером 1, 7,76 г

1,4-бис-акрилилпиперазина обрабатывают, 20 мл 2 N раствора водного асиммN,N-диметилэтилендиамина, Состав выдерживают трое суток при комнатной температуре, упаривают при 40 C и давлении 1 мм рт.ст,, остаток тщательно промывают ацетоном, а каучукоподобный остаток высушивают при 40 С и давлении 0,11 мм рт.ст. Получают

20 г линейного полимера,.растворимого в воде, обозначенного BlR с собственной вязкостью в этаноле равной при 30оС 0,25 дл/г и имеющего формулу (8):

655284

10 обозначенный B2R с собственной вязкостью в воде при 30 С=0,23 дл/г и имеющий формулу (9):

Г

СК2

СН вЂ” СК вЂ” СО -М

2 2, М-СΠ— СНг -CK2c r си г — -М- -Мl 1

CKг- Снг-Я(СН2)г (2 (2

О ОН-,/„

Пример 10. Повторяют предыдущий опыт, с заменой 1,5 г глицина 3,48 r транс-2,3-пиперазиндикарбоновой кислоты и с использованием аналогичных количеств других реагентов. Полученный продукт, обозначенный ВЗВ, имеет собственную вязкость в воде при 30 С 0,35 дл/г и формулу (10):

СК2- СН2 б сн — сн — со-м

2 8-СΠ— CH -СК— г г

СН,- CE

СООН COOK

I ск — ы

% 3

l юг — снг — - Я—

I сн, -сиг-и(э.,) Ilг л (г к

Пример 11. Опыт проводят аналогично примеру 1, используя 7,76 г (4 сантимоля) 1,4-бис-акрилилпипера- 35 зина, 16 мл 1 М раствора асимм-И,N-диметилэтилендиамина (1,6 сантимолей), 1,201 r глицина (1, 6 сантимолей) и 8 мл 1 N раствора аллиламина (0,8 сантимолей) . Смесь помещают 40 в пробирку и встряхивают в атмосфере азота. После 24-часовой выдержки при комнатной температуре добавляют

11 г N-винилпирролидона и 0,150 г азодиизобутиронитрила, встряхивают в атмосфере азота, помещают еще на

24 ч в термостат с температурой 60 С.

Затем продукт вынимают, измельчают, основательно промывают водой, спиртом и простым эфиром, высушивают при

60 С и давлении 0,001 мм рт.ст. Получают 18 г имеющего поперечные связи полимера, аналогичным образом готовят и другие линейные полиамидамины путем сополимеризации с другими виниловыми мономерами,. например, акрилонитрилом, акриламидом, метилметакрилат м или метилакрилатом.

Применяя на второй стадии полимериэации, наряду с виниловыми или ви- 60 нилиденовыми мономерами., другие двухфункциональные мономеры, например, метилен-бис-акриламйд, или иные количества 1,4-бис-акрилилпиперазина,. получают продукты с повьиаенным уров- 65 нем поперечных связей. Такой же результат получают при повышении на первой стадии образования относительногп содержания аллиламинов в сравнении с содержанием других аминовых мономеров.

Добавляя взамен этилендиамина или других первичных диаминов аллиламины и осуществляя описанную выше последовательность операций, можно получить полимеры с одинаковым уровнем поперечных связей, имеющих аналогичную с описанной в предыдущих приме рах часть полиамидаминов.

Приводимые ниже примеры иллюстрируют применение предлагаемых полимеров, Пример 12 ° 64 мг полимера

82R -73 со средним диаметром гранулы 0,2-1,0 мм помещают в поливинилхлоридный цилиндр емкостью б мл, диаметром 1 см и длиной б см. Р днище цилиндра находится перфорированный диск, на котором для предотвращения потери полимера положен слой впитывающей бумаги. Водный раствор 0,025 М

CaCI<, содержащий верональяы)2.-6 фер с р3 7,4, с 10 мг/мл гепарина перколируют со скоростью 0,5-1,0мл/мин, Содержание гепарина определяют ниже фильтра путем испытания на коагулирование, в ходе которого нормальная цитрированная плазма коагулируется добавкой СаСХ2 (вРемя рекальцификации) или тромбина (тромбиновое время). Определяют время, необходимое для образования первого волоска фибрина, при температуре 37 С. Это время зависит от наличного количества гепарина. Затем содержание гепарина оценивают путем сопоставления полученных величин с известным содержанием гепарина в таких же экспериментальных условиях. Оказалось, что.полимер способен захватить от 80 до 100% перколированного гепарина. Захват имеет место даже после пропуска гепарина, весящего столько же, сколько весят образующие фильтр гранулы.

Пример 13. Опыт, описанный ,в примере 12, повторяют, но пропускают более концентрированный раствор гепарина - от 10 мг/мл до 10" мг/мл.

Захват гепарина протекает, аналогично предыдущему случаю. Захватывается не менее 80% гепарина. Фильтр теряет способность захвата гепарина только после пропуска количества гепарина равного по весу синтетическому полимеру

B2R-73. Эксперимент проводится при комнатной температуре и при 37 С причем изменения способности поглощения гепарина полимером, обладающйм поперечными связями, в зависимости от температуры не обнаружено.

Пример 14. 64 мг полимера

B2R-73, полученного в примере 1, перерабатывают путем помола в жидкой фазе в очень тонкие гранулы,при помощи

655284 ний факторов коагулировання, а именно:

P.Т. — протромбиновое время, P,Т,Т. — парциальное тромбопластичное время, Т,Т, - тромбиновое время подсчет пластинок;

3) спектрофотометрическое определение гемоглобина.

Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии изменений как в отношении содержания фибриногена в плазме по числу пластинок, так и в отношении остальных 12 факторов влияния, сопутствующих процессу коагулирования. Булевые значения гемоглобина свидетельствуют о том, что фильтр не вызывает гемолиза крови.

Пример 21. 400 мг полимера

B2R-73, B3R-73 и BlR-73 с примерно одинаковым размером диаметров частиц0,1-1,0 мм — помещают .в сосуд для образования фильтра, как в примере

12. Через него перколируют 4 мл сыворотки, Определяют содержание про теина в отфильтрованной сыворотке и производят количественный и качественный анализы. Состав определяют электрофорезной сепарацией различных протеинов сыворотки. Оказалось, что фильтр не задерживает ни одной фракции протеинов сыворотки (ace, с6, -альбумины и g -глобулины), Фильтрование крови не задерживает макромолекулярных белковых компонентов, обычно присутствующих в сыворотке.

Пример 22. Повторяют пример

21, но через фильтр перколируют суспенэию красных кровяных телец челоека в физиологическом растворе. Чисо красных телец в фильтрате на единицу объема определяют в камере Бурке, Сопоставление с результатами подсчета для исходной суспензии показывает, что после фильтрования число красных телец не изменяется. Корпускулярную часть выделяют иэ того же фильтрата центрифугированием, и содержанием гемоглобина всплывшей части определяют спектрофотометрическим путем. Получают нулевые значения, что свидетельствует о том, что фильтр не создает гемолитических явлений в отношении красных кровяных телец.

II p и м е р 23. Через систему, аналогичную описанной в примере 20, перколируют цельную кровь. Содержание гепарина 10 мг на 1 мл цитриро" ванной крови. Кровь перколирует под собственной тяжестью через фильтр со скоростью 2 мл/мин и 4 мп/мин.

Иэ отобранных образцов крови путем центрифугирования выделяют плазму.

Остаточное содержание гепарина в плазме определяют по тромбиновому времени различных фракций плазмы в сопоставлении с тромбиновым временем для эталонной плазмы, содержащей известные количества гепарина. Фильтр эатефлонового вращающегося пестика в стеклянной ступке. Процесс затем проводят аналогично примеру 1, но фильтрование осуществляют в вакууме при помощи водяного насоса (20 мм рт.ст.) с целью форсирования пропуска антикоагулирующего раствора через фильтр. 5

В этом случае способность поглощения гепарина всегца составляет около 100% и сохраняется даже после пропуска количества гепарина, примерно равного весу полимера (как при ком- )О натной температуре, так и при 37 С).

Пример 15. Повторяют опыт по примеру 14, но с использованием большей концентрации гепарина (or

10 до 10 мг/см ). Способность погло-15 щения гепарина оказалась такой же, как в примере 14.

Пример 16. Повторяют опыты примеров 14 и 15, но с использованием в качестве антикоагуляторов не гепа20 рина, а кислых полисахаридов (сульфонат декстрана. BDH, Р.М. 500 000).

Результаты аналогичны результатам, полученным для растворов гепарина.

i p e p 17. Указанные в при- 25 мерах 2-7 полимеры испытывают в условиях аналогичных описанным в примерах 12-16..Оказалось, что в одинаковых условиях результаты практически идентичны тем, которые были получены 3() для полимера B2R-73 °

Пример 18. Повторяют испытания, описанные в примерах 12-16, как для полимера из примера 1, так и для полимеров из примеров 2-7, но с использованием раствора гепарина не.в воде, а в плазме человека. Фильтры, устроенные описанным выше образом, улавливают гепарин из растворов в плаз-. ме практически так же эффективно, как 40 и из водных растворов.

Пример 19. Повторяют пример 18, но через фильтры пропускают чистую человеческую плазму, проверяя ее коагулирующую способность до и после пропуска через фильтры. Яика-

45 ких изменений коагулирующей способности плазмы после пропуска через фильтры не отмечено..

Пример 20. Поливинилхлоридный цйлиндр емкостью около 20 см> (длиной 10 см) наполняют 4 г гранул

B2R-64 (размер частиц 0,1-1,0 мм).

Гра улы удерживают в цилиндре введенным в него фильтром в форме пальца перчатки. Этот фильтр соединяют флебоклиэисной трубкой с флаконом, наполненным 500 см цитрированной крови человека, Кровь пропускают под действием силы тяжести через фильтр, Плазму отделяют от отфильтрованной 60 крови путем центрифугирования. С плазмой проводят с%едующие операциию

1) доэирование фибриногена; 2) проведение- известных в клинической практике тестов на коагулирование, 5 имеющих целью установление отклоне655284

13 хватывает от 98 до 1003 гепарина, растворенного в плазме. Захватывающая способность зависит от количести размера частиц имеющего поперечные связи полимера, а также от времени контактирования крови с гранулами фильтра.

Пример 24. Гранулированный

B2R-64 (раэмер частиц от 0,1 до

1,0 мм) помещают в физиологический раствор,в котором в качестве буфера используют натриевый веронал с рН 7,4 (О (физиологический уровень p8). Для образца одного и того же гранулята с одинаковым объемом (1 мл) инкубируют с 5 мл водного раствора (10мг/мл) гепарина. Температура инкубации 37 С. )5

О

Второй образец выдерживают при комнатной температуре. Интенсивность инкубации при комнатной температуре и при 37 С одинакова.

Пример 25.У собаки берут об- Ю разцы крови для определения основных коагуляционных параметров. Животному дают наркоз,внутривенно вводя нембутал (25 мг/кг), и затем сразу в циркулирующую кровь животного вводят 3 мг/кг 25 гепарина. Через 8 мин у животного берут еще образец венозной крови, чтобы определить степень уменьшения коагуляционной способности крови, вызванную препаратом. Далее изолирую-. и 30 надлежащим образом хирургически подготавливают артерию и бедренную вену.

В них вводят канюли и подсоединяют к внешнему контуру следующим образом: артериальную канюлю соединяют с труб- 35 кой А из силастика диаметром 3 мм, длиной около 40 см, второй конец этой трубки подключают к вводу фильтра (состоящего иэ цилиндрического сосуда с двумя отверстиями на его кон- 40 цах емкостью 30 см и стенками иэ нетоксичного поливинилхлорида), в котором находится около 2 см гранулированного В2к-64,удерживаемого пластмассовой сеткой, выполненной иэ такого же материала, что и фильтры для вливаний; выпускной конец фильтра подключают ко второй трубке Б (такого же типа, как А), дальний конец этой трубки подключают к венозной канюле, возвращающей кровь в сосуды собаки. Для обеспечения нужного контролируемого уровня циркулирования крови к трубке подключают ротационный насос Де-Бакей. В трубки А и Б вставляют тройники из силиконовой 55 пластмассы, облегчающие отбор образцов крови в процессе исследования.

Полученные данные для одного и того же животного до и после опыта показывают, что пропуск и рецирку- 60 лирование крови в описанной системе обеспечивают ускоренный возврат к нормальной коагуляционной способности крови, вызванный захватом части гепарина фильтром.

Захват гепарина зависит, при равной концентрации гепарина в крови и равном весе использованного в фильтре полимерного материала, от размеров фильтра, величины контактной поверхности между полимером и кровью, продолжительности контакта крови и полимера с учетом создаваемого насосом расхода потока и, следовательно, от скорости пропуска его через фильтр.

Значение этих параметров можно полностью оценить путем анализа образцов крови, взятых одновременнов в процессе эксперимента, выше и ниже фильтра.

Пример 26. Повторяют опыт па примеру 25, но вместо гранулированного адсорбента Â2R-64, в качестве материала фильтра используют адсорбенты Â1R-73, 83R-73, 82R-73, B4R-73, 82FR-73, и B2ER-73, способ получения которых описан в примерах 2-7, Результаты оказались практически идентичными, Пример 27. Удаление гепарина молекулярным фильтром, введенным в выпускную трубку выведенного из тела контура.

Для опытов используют животное (собаку) средней величины, у которого уремию создают путем бинефрактомии, выполненной за трое суток до эксперимента. Применяют аппарат для осуществления диалиэа крови вне тела, соединяющий бедренную артерию с бедренной веной. Гепарин вводят во впускную линию устройства путем синхронизированного вливания по 20 капель в 1 мин раствора 150 мг в 500 см при интенсивности расхода потока во внешнем контуре 200 смэ/мин. При таком методе кровь может течь в контуре беэ возникновения явлений коагулирования. Отбирая кровь вдоль контура, можно убедиться в достаточной длительности времени коагулирования, Фильтр изготовлен из полимера ти= па B2R-64 и вставлен в выпускную трубку устройства, а перед ням или за ним монтируют насос Де-Бакей. При такой установке обеспечивается удаление гепарика и возврат к основным покаэатеЛям коагулирования. При необходимости производят частичное удаление гепарина путем повышения интенсивности циркулирования (т.е. скорости насоса), параллельного включения фильтра в выпускную линию устройства и уменьшения количества молекулярного активного материала в фильтре или его размеров.

Пример 28. Целлюлозную решетку с ячейками 2 1 см и нитью диаметром 0,5 мм пропитывают водным раствором смеси мономеров, которые при полимеризации, описанной в примере 6, образуют препарат B2R-64, и суспендируют в закрытой камере в атмосфере, насыщенной влагой, для предотвраще655284 16

И из группы, состоящей из первичных е- . или вторичных диаминов общей формулы ния испарения раствора, которым проп таны нити.ПроцесС полимеризации прот кает на нитях, поэтому по окончании реакции они оказываются плотно покрытыми,полимером B2R-64, образуя решетчатый фильтр. Этот фильтр испытывают в таких же условиях, как предыдущие фильтры и при этом, наряду со специфическим удалением гепарина,обнаружен возникающий после насыщения гепарином антитромбогенный поверхностный эффект.

Применение полимеров, содержащих мономерные звенья из группы бис-акрйлпиперазинов и алифатических бисакриламидов, в качестве адсорбента гепарина позволяет улучшить качество крови за счет удаления балластных примесей.

Формула изобретения

Применение полимеров, содержащих мономерные звенья иэ группы бис-акрилпиперазинов и алифатических бисакриламидов общей формулы

МК-(СН,jл.-1 Вз

В Вg где п=1-6

R — одинаковые или различные и означают водород или С -С -алкил;

Составитель С. Малютина

Редактор Н. Хубларова Техред Э.Чужик Корректор Е.Папп

Заказ 1421/12 Тираж 671 Подписное цНИИПИ Государственно ч> комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, F-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

СК «сн со %- (СК2)л-м-ео-Сасне. к, 5 где n=l-б, й1, Rq и R - водород, или С1-С6-алкил при условии, что только один из них является водородом и R1 =- СН,, 10 Rp отличается другими монополярными звеньями из группы, состоящей из пипераэиновых моно-, дикарбоновых кислот и алифатических аминокислот общей формулы

15 Н И-СНг- (R)n СООН где n= О или 1, R - -линейный или разветвленный алифатический радикал С,-С, иэ группы, состоящей из аллиламиновых и алифатических, насыщенных аминосоединений, содержащих 2-12 атомов углерода и две первичные аминогруппы, или из группы, состоящей из винилпирролидона, й-акриломорфолина и акриламида, в качестве адсорбента гепарина крови.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США 9 2759913, кл.21089,9, 1956.