Способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 12, 13эпокси -трихотеценов

 

Союз Советских

Социалистических

Реслублик

ОП ИСАНИ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДВТИЛЬСТВУ пц 660653 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 04.04.77 (21) 2473360/30-15 с присоединением заявки Ма— (23) Приоритет—

Опубликовано 05.05.79. Бюллетень Хе 17

Дата опубликования описания !ЯБЛОК (51) М Кл е

А 23 К 1/00//

О 01 N 33/02

Гасударственный камктет

СССР аа делам нзааретеннй н аткрвтнй (53) УЛК 576.8. .097 (088,8) (72) Авторы изобретения

А. Н. Котик, В. B. Рухляда и В. А. Труфанова

Украинский научно-исследовательский институт птицеводства и Украинский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии (71) Заявители (54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ В КОРМАХ МИКОТОКСИНОВ

ИЗ ГРУППЫ 12,13-ЭПОКСИ-Д 9-ТРИХОТЕЦЕНОВ

Изобретение относится к методам токсикологических исследований зернофуража и комбикормов.

Известен способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 13,13-эпокси- -трихотеценов путем получения фракций из экстракта исследуемого образца, очистку их колоночной хроматографией и качественное определение микотоксинов с помощью тонкослойной хроматографии (!1.

Недостатком известного способа является то, что он позволяет только качественное определение в пробе корма микотоксинов из группы !2,13-энокси- 1 -трихотеценов и не позволяет определить HY количество в исследуемом субстрате.

Целью изобретения является повышение точности определения количества микотокcHHoB Ha грх и Ihl 12,13-3IlolccH- K -TpIIYOT(цепов в пробе корма.

Г1 оста вле на я цель дости гается тем, что в способе обнаружения в кормах микотоксиНоВ из группы 12,13-эпокси-Д "-трихотеценов включающем нанесение исследуемой пробы 20 корма на пластинку с селикагелем и последующую ее хроматографию, после ее проведения ня пластинку наносят агаризированную питательнуlo среду для культвирова2 ния Candida psevdotãopicalis 44 и! . по характеру роста которой судят о количестве микотоксинов в корме.

Способ осуществляется следующим образом.

На пластинку с тонким закрепленным слоем силикагеля с нанесенным экстрактом испытуемой пробы корма после хроматографии наносят агаризированную питательную среду, поверхность которой засева.от суспензией клеток штамма дрожжей Candida. pseudotI opicalis 44 nk, чувствительного к микотоксинам из группы 12,13-эпокси-Л -три: отеценов. Пластинку выдерживактг 18—

20 ч при +28 С, после чего учитывают характер роста дрожжей. Зона подавления роста дрожжей с центром в точке, Rf которой равен Rf вещества свидетеля .(на каждую пластинку наносят 5 — 50 мкл растворов микотоксинов из группы 12, 13-эпокси-д - -трихотеценов в качестве контроля) свидетельствует о наличии в испытуемом образце корма микотоксинов из группы 12,13-эпокси-Ь"-трихотеценов. Количество каждого микотоксина (Х) в испытуемом образце корма определяютя по формуле

Х =

А H

Б Г

660653 где: А — наименьшее количество (в мкг) микотоксина из группы 12,13-эпокси-Ь 9-трихотеценов, которое вызывает образование зоны задержки роста дрожжей;

Б — вес испытуемой пробы корма;

 — объем экстракта испытуемой пробы, мкл;

à — наименьшее количество экстракта (в мкл), которое дает зону задержки роста дрожжей.

Пример. 50 r сухого измельченного испытуемого корма 3-кратно экстрагируют по

10 мин в смесителе 200 мл смеси хлороформа и ацетона 1:1. Экстракты сливают в одну посуду, выпаривают до объема 5 мл и наносят в количестве от 5 до 50 мкл на хроматографические пластинки.

15 а) В качестве контроля на каждую пластинку наносят 5 мкл раствора 4,15-диацетокси-8- (3-метилбутирилокси) -12,13-эпокситрихотецена-3-ол (микотоксина Т вЂ” 2) в ацетоне (0,1 мг/мл). Пластинки хроматографируют в системе этилацетат-толуол 3:1, вы2о сушивают, после чего на поверхность пластинок наносят агар Чапека с 20% пивного неохмеленного сусла, поверхность которого засевают суспензией клеток штамма Candida

pseudotrpicals 44 nk. Пластинки выдержи- 25 вают во влажной камере при +20 С, 18—

20 ч, после чего учитывают характер роста

44 пк. Наличие зоны подавления рост с центром в точке, которой равен Rf зоны, вызванной веществом — свидетелем, указывает на наличие в испытуемом образце корма микотоксина Т вЂ” 2. Количество микотоксина Т вЂ” 2 в испытуемом образце корма вычисляют по вышеприведенной формуле (А

0,2 мкг, Б =- 50 г, В = 5000 мкл, Г = 5 мкл):

Формула изобретения

b) В качестве контроля на каждую пластинку наносят 5 мкл раствора 3,4-дигидро- 40 кси-8- (3-метилбутирилокси) -12,13-эпокси15-ацетокси-Ь 9-трихотецена-3-ол (м икотоксина НТ вЂ” 2) в. ацетоне (0,1 мг/мл). Пластинки хроматографируют в системе этилацетатСоставитель А. Макаров

Техред О. Луговая Корректор А. Власенко

Тираж 568 Подписное

Редактор Н. Тимонина

Заказ 2323/3

ЦНИИ ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», r. Ужгород, ул. Проектная, 4 у О 2мкг 000 н 4, Хмкл толуол 3:1, высушивают, после чего на поверхность пластинок наносят агар Чапека с

20% пивного неохмеленного сусла, поверхность которого засевают суспензией клеток штамма Candida psewlotro icaiis 44 k. 1!ластинки выдерживают во влажной камере при +28 С !8 ч, после чего учитывают характер роста Candida psendotropicalis 44 nk.

Наличие зоны подавления роста Candida

pseudotropicalis 44 и! с центром в точке, Rt которой равен Rf зоны, вызванной веществом — свидетелем, свидетельствует о наличии в испытуемом образце корма микотоксина НТ вЂ” 2. Количество микотоксина HT — 2 в испытуемом образце вычисляют по вышеприведенной формуле (А = 0,35 мкг, Б

50 г, В = 500 мкг, Г= 20 мкл):

0 ЗХ м к г ° .5 0 00 л 1 75 кг/г

50r - 20 цкл

Способ прост и экономичен и позволяет определять микотоксины в концентрациях

0,6 — 1,0 мкг/г и выше

Точность метода 20%.

Способ обнаружения в кормах микотоксинов из группы 12,13-эпокси- 1 "-трихотеценов путем тонкослойной хроматографии, включающий нанесение экстракта исследуемой пробы корма на пластинку с силикагелем и последующую ее хроматографию, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения количества микотоксинов, после хроматографии на пластинку наносят агаризованную питательную среду для культивирования с помогцыо штамма

Candida pseudotropicalis 44 пк, по характеру роста которой судят о количестве микотоксинов в корме.

Источники информации, принятые во вни мание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР № 389446, кл. А 23 К 1/00, 1973.