(адамантоил)-семикарбазид или 1-(1-адамантоил)- тиосемикарбазид,проявляющие ингибирующую активность против вирусов гриппа,осповакцины и венесуэльского энцефаломиелита лошадей

Авторы патента:

C07C337/06 - Производные тиоугольных кислот, содержащие функциональные группы, отнесенные к группам C07C333/00 или C07C335/00, в которых по меньшей мере один атом азота из этих функциональных групп связан с другим атомом азота, не входящим в нитро- или нитрозогруппы

C07C281/06 - Производные угольной кислоты, содержащие функциональные группы, отнесенные к группам C07C269/00-C07C279/00, в которых по меньшей мере один атом азота этих функциональных групп связан с другим атомом азота, не входящим в нитро- или нитрозогруппы

A61P31/16 - против гриппа или риновирусов

A61K31/175 - Лекарственные препараты, содержащие органические активные ингредиенты

рте,, йн ., и;" .(° тД, "

О П Н" Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскии

Социалистичвсяик

Республик

<щ6.77298 (6f) Дополнительное к авт. свнд- ву(51)hA, Иа

С 07 С 133/ОЩ А 61 K 31/27 (22) Заявйейо 140777 (Щ 2507144/23-04 с прнсоедниейием Зая®ки 34о вЂ” .

Государственный комитет

СССР : no делам ннзобретеннй н открытий (23) Приоритет

Опубликовано 070981.бюллетень тй 33 (53) УДК 547.497.."

1.0 ф(088.8)

Дата опублнковання описания 070981

Л.В.Денисова, N.ß.Øàøèõèíà, R.é. Âîðåêî, - О.Т.Андреева, В.Й,ВотякоВ, Э.A.Èçåðãèíà и Г.И.Даниленко

/ (7 2) Авторы изобретения

Белорусский ордена Трудового Красного Знамени научноисследовательский институт эпидемиологии и микробиологии и Институторгаиической химин АЯ Украинской CCP (7Ф) Заявйтелй +3

S,О- ОС вЂ” НИ МН-СО-ОВ q

Осуществление способа показано на

25 следующих примерах:

Пример 1. 1-,(1 .-адамантоил) R семикарбаэид (1g.

Смесь 10 г адамантан-1-карбоновой

s качестве ангибитора вирусов гриппа кислоты и 30 мл хлористого тионила (23 или адамантиловые эфиры н вЂ” окиси 30 кипятят 1 ч, отгоняют избыток тиони-. 7 (54) 1- (1 -АДАИАНТОИЛ) -СЕИИКАРБАЗИД ИЛИ

1- (1 -АДАЯАИТОИЛ) -ТИОСЕМИКАРБАЗИД, ПРОЯВЛЯЕВ(ИЕ

ИНГИБЯИЧбЩУФ АКТИВНОСТЬ ПРОТИВ ВИРУСОВ ГРИППА, ОСПОВАКЦИЙЫ И ВЕНЕСУЭЛЬСКОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА

ЛОШАДЕЙ

1 Изобретение относится к йовММ за-- - изоникотиновой кислоты (31, s которые мещенным адамаитана, в частйости, - ингибируют вирусы Вэл.

1-(1 -адамантоил)»семикарбазйду йли - Целью изобретения являются выявле1-(1-адамантоил)-тиосемйкарбазиду, - з ние новых Соедииений с ингибирующей проявлявщим ингибирующую амтивность противовирусной активностью. против вирусов -гриппа, осповакцины и Поставленная цель достигается ноВенесуэльского энцефаломйелита,ясла- выми 1-(1.-адамантоил) семикарбазидей (ВЭЛ). дом и 1-(1 -адамантоил)-тиосемикарбаИзвестны различные соединения, © эндом формулы проявляющие протнвовирусную активность.

Так,. 1,2,3,4-тетраоксо-1,2,3,4-те-, Ощ Н щ трагидронафталин;дигидрат (аксолин), . (( обладает выраженной вирулицидной )С активностью invitro в отношейии виру" са гриппа $1) . где Х вЂ” кислород или сера, проявляю-.

Известны также производные адаман-- щне ингибируйщую активность против тана, содержащие карбаматы с общей вируса гриппа, осповакцины и ВЭЛ. формулой . .. Получение--укаэанных соединений осЖ ковано на известном методе хлорангидрндизации кислоты с последующей обработкой тио-или семикарбазидом.

6 77298 ла в вакууме при темйературе бани 50 вЂ” 60 С, прибавляют трижды по 10 оп безводного бензола и отгоняют его в тех же условиях. Полученный хлорангидрид адамантан-1-карбоновой кислоты бе дальнейшей очистки растворяют в 50 мл безводного пиридина и приливают.при перемешивании к суспензии

6,2 r.õëoðãèäðàòà семикарбазида в

29 мл пиридина за 2 ч при комнатной температуре, перемещают еще 24 ч, а затем оставляют на ночь. Раствор с

;осадком фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме, а остаток кристаллизуют из изопропанола. Выход 1- 1 вЂ .ада-. иантоил)-семикарбазида (1) 3,7 . (28,6Ъ):,. т. пл. 204 вЂ” 205 C (o разл.) .15

Найдено, Ъ: М 17,44, 17,80„

С 60у84, 60 91 Н 7,88, 8.00. °

С„1 Н,9 М О .

Вычислено Ъ: N 17,72, С 60,76,,. Н 8. 02....: . щ

Пример 2. 1-(11 -адамантоил) тиосемикарбазид (П).

10 г адамантан-1-карбоиовой кислоты превращают в хлорангидрид как в .примере 1. Раствор хлорангидрида в 2

50 мл:безводного пиридина приливают за 2 ч при размешивании при комнатной температуре. к суспензи 8,2 г хлоргндрата тиосемикарбазида в 200 мЛ пиридина. Размешивают еще 2 ч и затем оставляют на ночь. Раствор с осадком фильтруют, фильтрат упаривают и остаток кристаллизуют из ацетона. Выход целевого продукта (П) . 4,6 r (32,5Ъ), т. пл. 213 вЂ” 214 C:.

Найдено,Ъ: М 16,16, 16,49; 12,61

12, .90. с,(2 Нj9йзоь

Вычислено, Ъ" .М 16,16, М 12,65.

Экспериментальное изучение йротивовйрусйой активйости производных 40 аДамантана (1) и (П):производилось .С вирусами : осповакцины (дермовакци.на производства БелНИИЭМ), Венесуэльского энцефаломиелита лошадей (аттенуированный штамм ВЭЛ-2.30), гриийаштамм А (Гонконг) 68. Использовались следующйе дозы вирусов: 0,001 БОЕ/кл.4ля оспбвакцины и ВЭЛ, 1-10 ИД ()/0,2 мл для гриппа. Вирусы ВЭЛ и осповакцины культивировали на клетках куриных фибробластов (КФ) первичной трипсинизации..Грипп на кусочках хорионал-" лантоисной оболоки (ХАО)куринйх эмбрйанов. В качестве ростовой и под держивающей среды для тканевых культур использовали 5Ъ гемогидролизата: с добавленвем 10Ъ бычьей сыворотки (или без нее) и хлоридную среду с добавлением глюкозы, желатины, при- готовленную по" Faskas I4hi te (1958) . Ьйрусы культивировали в йрисутствии Я

:испытуемЫх соединений, содержащихся

: а.пи тательной среде в концентрациях, . Йетоксичных для культур ткани, а .;контрольные образцы вЂ” без соединений. .Антивирусное действие соединений оце4 вали по снижению инфекционного титра репродуцированного вируса (для ВЭЛ и осповакцины) и по подавлению. образования вирусного гемагглютинина (для вируса гриппа) в присутствии соединения, по сравнению с контролем (без соединения). Существеннйм считали снижение титра на 0,75 lg и бопее и подавление вирусного гемагглютинина на 75Ъ и более.

Характеристика противовирусного действия известнйх и предлагаемых соединений представлена в табл. 1 и 2.

Как видйо из табл. 1 оба новых ингибитора оказались малотоксичными, их максимально перейосимая концентрация 800 мкг/мл. Как видно из табл.2, соединение (1) имеет химиотерапевтический индекс 8 при испытании с обоими вирусами, снижая в концентрациях

800 вЂ” 100 мкг/мл ийфекционный титр вируса вакцины на .3,43 .- 0,91 1g

БОБ/мл.:и вируса.:ВЭЛ вЂ” на 6,32

1, 68 1q ЗОЕ/мл. Соединение (fl) в концентрациях 800 вЂ” 200 мкг/мл снижает инфекционный титр вируса ВЭЛ на 1,87 вЂ” 0,91 19 БОБ/мл, его химиотерайевтический индекс равен .4, В табл. 3 представлены результаты подавления размножения вируса гриппа А (Гонконг) 68 в культуре ткани хорионаллантоисных оболочек куриных эмбрионов под действием различных концентраций 1.-.(1 - адамантоил)-тиосеми-. ! карбаэида и ремантадина гидрохлорида, известного противовирусного соедине.ния . (4(.

В исследовательных концентрациях

1-(адамантоил-1)-тиосемикарбазид

1 полностью подавляет размножение виру-. са гриппа в культуре ткани ХАО куриных эмбрионбв. Величина химиотерапев- тического индекса превышает 8. В то же время., ремзнтадин гидрохлорид, яв-.. ляясь более токсичным веществом, o6ecпечивает полное йодавлейие:репродук-. ции вируса только в двух субтоксичес- . ких концентрациях и обладает химиотерапевтическим Индексом менее 8. Таким образом 1-(адамантоил-1 )-тиосемикарбазид обладает более выраженным противовирусным эффектом в отношении вируса .гриппа в культуре ткани по cpasнению с известным противогрипозным препаратом ремантадином.

По включению меченых предшественников в кислотонерастворимую фракцию клеток. изучено действие соединенйя (1) йа вирусиндуцированный синтез дезоксирибонуклеиновой кислоты .(днк) в клетках КФ, нйфицированных вирусом вакцины. Установлено, что при множес -. твенности.ийицирования 0,1 БОЕ/мл синтез ДНК снижается на 52Ъ, при множественности инфицирования 0,001

БОЕ/мл - на .77Ъ по сравнению с инфицированными клетками,не обработаннымИ соединеияямй..

Таблица1

«В ° ь «««« ° «а «в «» «Ь ь «

Соед)инение .

Концентрации,мкг/мл

«Ь ««4»4 «В»!»«« » «& &

866

О- 4 О " -: " О ю. максимально испытуемая переноСимая

&&» ° ° «ьа»» «& ° «а» «е«» ° ь «» «е» t

800

100 се&«»«&«а «4 ь !« ° еь& ее&«в& ««&а»е»««««е ае а

400.

1606

СЙ2-. О-de О :: - .. 100

& «ав &««ь«&«в &» && & ее» ь 4«& && «& && « е вь «& вь ав «ь«в &» ° ««ь&« ° ««е« ° ь е& &

200. 800

-C0- Н@Н-й- Н .

100

960: : ..:: 800

200

° е& ° «««& е««44»«а в&ввь«&& м% 4«О&«ь ь й» «в&& &» е &м ъ е «&«&«

СО-ВНЕ -СЗ. iH<, еЬ В «&&& В» Ь«44&4&«44«4+&44&&4!В& «& &» «» «&4&«&» «»Е

Таблица!2

««ь«&аее& о&а»ее»« "««4»4» 4 «ь&&&« ° &ав««

Сйижение- тйтра:., :Химиеотерапезтйчеекий юируюа:ВЭл.„ : мндекс, f g SOB/

° ю еь» Ä «« « && ь ° «ь&«««& &«44&

5,.97

5,97 .;::., ::". .":: .: В

3,08

1,18

««» 4» ь «» ь«&а &««&! э& ав»ве е»« °

7,95

7, 95: . :: ::::: 16

О:,38

& « ° «Ьь 4«Ь & && ° Ь а Ф ° I

Снижение титраа, . Мимйотераепевтическйй

1дБОЙ/мл," .::. индекс

° а &а ° «Ь&««& &&ва&&«&& & && ° « осповакцина : (OB) ВЭЛ .. ::. .::, 08 .. ВЭЛ.

4»It «е е ° ° «ае««ь «ь& & |!» «

3.,43 .б ЭЙ

3,43 2./74

2,53 2,5 7 . ::. -; а . . 8

0,91 .. 0,86 .

4 «&&&«ЬФ «Ь&«&Ь! +&& & « °

О . 1,М

О . : 1у04," . ",: О ; : . : 4

Ь &»Ь««4«&&в»«&t«&«» а «ва «» . б .:: . 677298 „6

I для соединения (П) на @ойе актино- рйрус э ВЭЛ. Соединение (П) не ОказМ- мицина д иэучено.действие .на оийтев . sano ингибирувцего действия на пинт@э вирусспецифических рибонуклеийовых . клеточной РНК, подавляняцее зирусиндуцикислоты в клетках КФ, инфицированных рованнйй синтеэ рНК на 84 5ф, . с б 772У8

1„

Таблица 3, Химиотерапевтический индекс оличество про ирок за аженных вирусом

Соединение

Иследованные концен трации, мкг/мл

Количество пробирок с вирусной гемагглютинацией абсолют- Ъ 1 1; ное чис- .5„ ло

1-(1 Ада- . 1000 мантоил)- 500 тиосеми- 250 карбазид 125

Ремантадин гидрохло- . рид

125

О, О

9 75, ООф13, Об б 50,00 14,90

12 10 О

7,5 Контроль вируса