Способ получения 7l-or -эстрадиолов

 

Взамен ранее изданного

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

<>677666 ф с с. (61) Дополнительный к патенту2 l 79 (.06/ (22) Заявлено 270%76 (2f) 2404897/23-0 (53)М Кп 3

С 07 J 11/00//

A 61 К 31/565 (23) Приоритет 101075 (32) 14.10. 74

Р2449327.4

08.08.75 (31) Р2535997. 1 (33) Государственный комитет

СССР но делам изобретений н открытий

Опубликовано 30.1181,Бюллетень М44

Дата опубликования описания 30.11.81 (53) УДК 547.689 ° 8. .07 (088.8) ° З дИностранцы Е 076

Карл Петцольд, Ханс-Йорг Видиц, Клаус Презевовски (ФРГ),Юкишиге Нишино (Япония), Рудольф Вихерт и Хенри Лаурент у, ),,:-; г .: ) (ФРГ) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Иностранная фирма

AZc1

ФРГ

{54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 7 -OR -ЭСТРАДИОЛОВ

6М

--C =-Сн

0 5

--С=CH

Изобретение относится к способу получения новых фармакологически активных 7-замещеьных эстрадиолов общей формулы Х

15 где R водород, С -C4-ацил, С -С.--алкильная циклоI пентильная или тетрагидропиранильная группа; 20

R и R — одинаковые или различные водород, С -С1— ацильная или тетрагидропиранильная группа.

Цель изобретения — расширение ас- 25 сортимента стероидных соединений, обладающих биологической активностью.

Цель достигается предлагаемым способом, заключающимся в том, что 174этинилэстрадиол общей формулы . где Rg имеет указанное значение, ферментируют грибковой культурой семейства absidia orchidis aspergillus

1uchuensis, Rhizopus nigricans, pe1licu1aria FiIamentosa, КЫ zopus

oryzal, Rhizopus kazanensis, hhizopus

cohuG, Rhizopus stolonifer или diplo—

dia natalensis в концентрации 50500 мг субстрата ча 1 л питательной среды при 25 -35 C и в зависимости от необходимого значения R К2 „ p в конечном продукте этерифицируют одну или несколько гидрокснльных групп до простых эфиров, предпочтительно., с помощью циклопентилгалогенида в присутствии основания или днгидрапираном и/или до сложных эфиров с помощью, предпочтительно, ангид677666 ридов или хлорангидридов кислот в присутствии катализаторов, целевые

ПрбдуктМ "вселяют и очищают известными методами.

Пример 1. Микробиологическое

7 g-гидроксилирование.

Колбу Эрленмейера емкостью 2 л, содержащую 500 мл стерилизованного в течение 30 мин при 120 С в автоо " клаве питательного раствора содержащего, Ъ: глюкоза 3; Corn steep 1;

NaNOg 0,2; КН2РО 0,1; К НР04 0,2, NgSOg 0,05; FeS0g 0,002, и КС1 0,05, засевают лиофильной культурой Diplo

dia natalensis (ATCC 9055) и встря хивают 72 ч при 30 С на ротационном о аппарате для встряхивания. Этой пред- 15 варительной культурой затем засевают ферментер емкостью 20 л, который заполнен 15 л стерилизованной при

12 1 С и давлении 1, 1 атм, Среды того же состава, что и предварительная культура.

При добавке силикона SH в качестве противовспенивателя герминируют при 29 С, при аэрации 10 л/мин, давлении 0,7 атм и перемешивании

220 об/мин в течение 24 ч 1 л,бульона культуры при стерильных условиях переносят в 14 л стерилизованной как и выше питательной среды такого же состава и выращивают при таких же условиях. Спустя 12 ч добавляют стерильно профильтрованный раствор из

3 г этинилэстрадиола в 100 мп дйметилсульфоксида.

За протеканием превращения следят

: "путем анализа с помощью тонкослойной 35 хроматографии метилизобутилкетоновых экстрактов проб ферментера. После полного превращения (45 ч времени контактирования) содержимое ферментера двукратно перемешивают с мети- g0 лизобутилкетоном, беря каждый раз rio

10 л, и экстракт выпаривают в вакууме при температуре бани 50 С.

Остаток для удаления противовспенивателя растворяют в метаноле. Си". ",ликоновое масло отделяют в делительной воронке, затем раствор фильтруют через складчатый фильтр и снова выпаривают досуха. Остающийся сырой: продукт теперь растворяют в хлористом метилене и для очистки хромато50 граграфируют через колонку с силикагелем с помощью градиента растворителей метиленхлорид/ацетон. После кристаллизации из уксусного эфира чистый 17с -этинил-1,3,5/10/-эстра- 55 триен-3,7с, 17(--триол белого цве та плавится при 234-235 С (разложение) . C2oH240> (мол вес 312,4) .

Пример 2. 500 мг 17<-этинил-l, 3, 5/10/-эстратриен-3, 7, щ0

17 pr -триола растворяют в 10 мл пири дина, добавляют 0,5 ьЫ ацеФайТЙу(рйда и перемешивают в течение 20 мин при охлаЖдении льдом. Затем раствор примешивают в 100 мл охлажденной 8Ъ-ной

4 серной кислоты и выпавший осадок про-. мывают до нейтральной реакции. После высушивания перекристаллизуют из смеси эфир/гексан и получают чистый

3-ацетокси-17 g-этинил-1,3,5/10/" эстратриен-7 с(, 17 -диол с т.пл,133135 С, 17 g -этинил-1,3,5/10/-scTpaтриен-3,7 с(, 17 р-триола с т.пл.230232оС.

Пример 3. Раствор 1 00 мг

17ф -этинил-1,3,5/10/-эстратриен3, 7d, 17 -триола в 5 мл уксусного эфира при комнатной температуре смешивают последовательно с 1 мп уксусного ангидрида и 1 каплей хлорной кислоты (70Ъ-ной) . Спустя 3 мин добавляют 1 каплю пиридина, промывают насыщенным раствором хлористого натрия, высушивают и выпаривают. Получают 78 мг 3,7 с --, 17 -триацетокси17 Ц.-этинил-1,3,5-/10/-эстратриена в виде аморфного вещества.УФ-спектр (метанол): 6:g >-9760; F2<<-541;

Е2И-715; 8 274-696.

Пример 4. К раствору 150 мг

17 (-этинил-1,3,5/10/-эстратриен3,7, 17 -триола в 3 мл пиридина добавляют 1 мл уксусного ангидрида и оставляют на 16 ч при комнатной температуре. Композицию при добавке циклогексана или СС14 выпаривают досуха. Остаток растворяют в уксусном эфире и промывают водой. После высушивания и выпаривания получают

120 мл сырого продукта, который очищают с помощью тонкослойной хроматографии . Получают 110 мг 3,7oL-диацетокси-17 О(-этинил-1,3,5/10/-эстратриен-17 -ола, т.пл. 165-166 С.

Пример 5. 200 мг 17 о .-этинил-1, 3,5/10/-эстратриен-3,7

17) -триола растворяют в 3 мл метанола и 1 мл циклопентилбромида при нагревании, затем-добавляют 200 мг карбоната калия,и кипятят "в течение

12 ч в атмосфере азота. После этого смесь вносят в уксуснокислую ледяную воду и экстрагируют хлористым метиленом. Органическую фазу промывают до нейтральной реакции, сушат и выпаривают. Сырой продукт (150 мг) очищают с помощью тонкослойной .хроматографии, получают 100 мг 17,К— этинил-3-циклопент илойси-1,3,5/10/эстратриен-7о, 17 Р -диола. Т.пл.126128 С. I

Пример б. Раствор 350 мг 1Иэтинил-З-циклопентилокси-1,3,5/10/эстратриен-7с(., 17p -диола в 5 мл уксусного эфира смешивают с 1 мл уксусного ангидрида и 1 каплей хЛорной кислоты (70Ъ-ной) и перемешивают

3 мин при комнатной температуре. Затем добавляют 0,5 мл пиридина, пройывают насыщенным раствором хлористого натрия, высушивают и выпаривают.

Получают 310 мг 7oL, 17Р -диацетокси17%-этинил-3-циклопентилокси-1,3, 6,77666

55

5/10/-эстратриена в виде аморфного вещества. УФ-спектр (метанол):

E>zz =9060; гуг=8730; 6274=1460

j z8>=1920; 6286=1 770.

П Р и м е р 7. 500 мл 17 -этинил-.

1, 3, 5/10/-эстратриен-3, 7 ol, 1 7 Р 5 триола растворяют в 10 мл пиридина, добавляют 1 мл ангидрида масляной кислоты и перемешивают 60 мин при комнатной температуре. Затем раствор примешивают в 100 мл охлажден- )0 ной 8%-ной серной кислоты и выпавший осадок промывают до нейтральной реакции. После высушивания перекристаллизуют из смеси эфир/гексан и получают чистый 3-бутилокси-17A — этинил-1,3,5/10/-эстратриен-7о, 15

17р -диол с т.пл. 130 — 131 С.

П ð è ì å ð 8. 500 ìã 17< .-этинил-1,3,5/10/-эстратриен-3,7о(., 17 Р --триола растворяют в 10 мп пиридина, добавляют 3 мл масляного ангидрида и перемешивают 72 ч при комнатной температуре. Затем Раствор примешивают в 100 мл охлажденной съ о 84-ной серной кислоты и выпавший осадок промывают до нейтральной реакции. Для дальнейшей очистки продукт хроматографируют через колонну с силикагелем и перекристаллизуют из смеси эфир/гексан. Чистый 3,7о -дибутирилокси-17о --этинил-1,3,5/10/- 30 эстратриен-17 -ол плавится при

132,5-133 С.

Пример 9. К раствору из

450 мг 3-ацетокси-17 о =этинил-l, 3,5/10/-эстратриен-7 о -, 17 P-диола в 30 мл абсолютного бензола при комнатной температуре добавляют 7 мл триэтиламина и при интенсивном перемешивании 1,4 мл хлорангидрида изопропилсульфокислоты и перемешивают 40

48 ч при комнатной темпераТуре. Затем смесь выливают на лед и экстрагируют вещество эфиром. Эфирную фазу промывают, высушивают и выпари- вают и сыРой продукт очищают с по- 45 мощью градиентной хроматографии., Получают 250 мг 17 О(-этинил-3-ацетокси-7 -изопропилсульфонилокси-l, 3,5/10/-эстратриен-17 Р -ола.

Пример 10. РаствоР 350 мг

17 1--этинил-1,3,5/10/-эстратриен3,7, 17 - триола в 35 мл абсолютно го бензола смешивают с 5 мл триэтиламина при комнатной температуре, при интенсивном перемешивании, и с

2 мл хлорангидрида изопропилсульфоксилоты. Оставляют перемешиваться при комнатной температуре в течение

38 ч, затем выливают на лед и экстрагируют эфиром. Эфирную фазу промывают водбй, высушивают и выпарива- 60 ют. Сырой продукт очищают с помощью градиентной хроматографии, получают 125 мг 17о --этинил-3,7а -бисизопропилсульфонилокси-1,3,5/10/эстратриен-17 Р -ола.

Пример 11. а) Раствор 350 мг

3,7 ol -диацетокси-17 .-этинил-1,3, 5/10/-эстратриен-17р -ола в 20 мл абсолютного бензола смешивают с

20 мг п/толуолсульфокислоты и 1 мл дигидропирана. Перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, разбавляют эфиром, промывают до нейтральной реакции раствором бикарбоната натрий и водой и выпаривают.

Получают 300 мг 3,7 -диацетокси17оС--этинил-17Р -тетрагидропиранилокси-1,3,5/10/- эстратриена. б) 250 мг 3,7 -диацетокси-17а -этинил-17р -тетрагидропиранилокси1,3,5/10/-эстратриена растворяют в

10 мл метанола, добавляют раствор

200 мг карбоната калия в 2 мл воды и кипятят в атмосфере азота 1,5 ч.

Затем смесь выливают в ледяную воду и органическое вещество экстрагируют эфиром. После промывки водой, вы-. сушивания и выпаривания получают

180 мг 17 oL-этинил-17 )) -тетрагидропиранилокси-1,3,5/10/-эстратриен3,7 Ы -этинил. в) К раствору из 230 мг 17 Е-эти-. нил-17 р -тетрагидропиранилокси-l, 3,5/10/-эстратриен-3,7 cL-диола в

5 мл пиридина при охлаждении льдом и в атмосфере азота добавляют 0,5 мп метансульфокислоты и перемешивают в течение 38 ч примерно при 4 С в атмосфере азота. Затем все выливают в ледяную воду, отфильтровывают осадок и растворяют его в. хлористом метилене. После промывки водой, высушивания и выпаривания получают 200 мг

17 этинил-3,7Ы. бис-мезилокси-17 тетрагидропиранилокси-l,3,5/10/эстратриена в виде сырого продукта, который без последующей очистки применяется далее.

Пример 12. Раствор 200 мг

17о/.-этинил-3,7 †бис-мезилокси-17 тетрагидропиранилокси-1,3,5/10/эстратриена в 5 мл метанола смешивают с 500 мг щавелевой кислоты, растворенными в 2 мл воды„ и кипятят

1/2 ч. Затем смесь вносят в ледяную воду и органическое вещество эстрагируют хлористым метиленом. После промывки водой, высушивания и выпаривания получают 17о -этинил-3,7с -бисмезилокси-1,3,5/10/-эстратриен-17,9— ол.

Пример 13. 3 r этинилэстрадиод инкубируют аналогично примеру 1

absidia orchides /ATCC8990/

aspergilIus luchu- /C)38/

ensis

Rhizopus nigricans /ATCC 62260/

Ре111cularia Ы1атпеп-"

tosa /ATCC/13289/

Phizopus oryzal /ATCC4858/

Rhizopus kazanensis /ATCC 8998/

Rhizopus cohuQ /ATCC 8998/ или

Rhizopus stoloniber /ATCC 10404/

677666

--t =СН

Rf0

Составитель И. Федосеева

Техред А.йч Корректор Г. Решетник

Редактор Л. Письман

Тираж 400 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 106 32/1

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

После 45 ч времени контактирования содержимое ферментера дважды обрнбатывают по 10 л метилизобутилкетона и экстракт упаривают в вакууме на водяной бане при ее температуре

50 С.

Остаток очищают аналогично приме ру 1 и перекристаллизовывают.

Получают 17oL-этинил- 1,3,5/10/ эстратриен-3,7 17 Р -триола, который идентичен полученному в примере

1 продукту.

Формула изобретения

1. Способ получения 7 -ORz. эстрадиолов общей формулы I

Е где R — водород, С -C у.алкил, С 4-С -ацильная, циклопентильная или тетрагкдропиранильная группа1

R — R — одинаковые или различ2 3 ные водород С -С4— ацильная или тетрагидропиранильная группа, отличающийся тем, что, .,17а -этинилэстрадиол общей форму- 30 лы II где R имеет указанные значения, фер ментируют грибковой культурой рода

absidia orchidis aspergillus luchuensis, Rhizopus niqricans, pellicularia Filamentoza,Rhizopus oryzal, Rhizopus kazanensis, Rhizopus cohuu, Rhizopus stolonifer или diplodia natalensis в концентрации 50-500 мг субстрата на 1 л питательной среды. при 25-35 С и,в зависимости от необхоР димого значения R,R,è R9 в конечном продукте этерифицируют одну или несколько гидроксильных групп до простых эфиров или до сложных эфиров с последующим выделением целевых продуктов.

2. Способ по и. 1, о т л и ч а юшийся тем, что для получения простых эфиров используют циклопентилгалогенид в присутствии основания или дигидропиран в присутствии кислоты.

3 . Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что для получения сложных эфиров используют ангидриды или хлорангидриды, в присутствии катализаторов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент ClQA 9 3318928, кл. 260-397.5, опублик. 09.05.67.

2. Патент США 9 3642992, кл. 4242 38, . опублик 15 . 02. 72.

Приоритеты по приказам:

14.10.74 при В2и R >- С -С -ацилостаток карбоновой кислоты.

М 4

08.08.75 при R a R3 — С -С -ацил1 4. остаток сульфокислоты.