Штамм н 5вт-103

 

Еавз Советсяих

Социалистичвских

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 060278(21) 2576038/30-15 с присоединением заявки Мо (23) Приоритет

Опубликовано 25.09.79 Бюллетень No 35

Дата опубликования описания 28.0979 о» 686707 (51)М. Кл.

А 01 М Я/00

I осударствеииый комитет

СССР по делам изобретеии и и открытий (53) УДК 63е576.8 (088.8) (72) Авторы ияоб етеиия а.и.козлоз, г.C.ñìîëèíà, и.г.конан ни-т.С.Конотантинона з

{71) ЗаяВИтЕЛь Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов (54) ШТАММ BACILLUS THURINGIEHSIS UAR. QALLERIAE

Н5ВТ-103

Изобретение относится к сельскОхозяйственной микробиологии и пред ставляет собой новый штамм Bac. tbvringiensis, используемый для производства знтобактерина, применяемого для уничтожения насекомых-вредителей °

Известно, что одним из средств для уничтожения насекомых-вредителей является бактериальный препарат энто-10 бактерин, производство которого осуществляется,при. помощи штаммов

Bac. tHvringiensis var galleriae (1) .

В настоящее время микробиологической промышленностью для наработки энтобактери на используют интродуктив -15 ные Штампы Вас. thurimgiensis 5-го серо гипа, выделяемые из погибших гусениц насекомых-вредителей (2).

Однако эти штамлы, являясь дикими фагпродуцирующими культурами Вас.

thur1луелМа „не выдерживают больших объемов производственных ферментеров и бракуются нз-за лизиса при первых комиссионных проверках.

Целью изобретения является штамм

Bac. tIsuringiensis var. galleriae

Н5ВТ-103, отвечающий всем необходимым .требованиям, предъявляем м к производственным штаммам-продуцентам энтобактерина, т.е. в условиях глубинного культивирования он не продуцирует вирулентный фаг и позволяет получать продукцию более высокого качества.

Полученный штамм Bac.thuringiensis yea.

gaIIeriae Н5ВТ-103 имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики.

Морфологические признаки. Величина клеток в экспоненциальной фазе развития на обычном агаре типа СПА равна 4,0-6,0 х 2,0-2,5 мкм. Преобладающая форма палочковидная. В условиях глубинного культивирования на жидких питательных средах клетки малоподвижные, встречаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамположительны. В период перехода иэ экспоненциальной фазы в стационарную образуют овальные споры размером в 1,8-2,2 мкм и белковые, в виде луковице этомоцидные кристаллы величиной 2,2 х 2,5 мкм. По Н-ан-. тигену штамм Н5ВТ-103 относится к

5-му,серотипу, 5а-5б.

Физиологические признаки. Органическая среда для поддерживающей селекции и размножения — сухой питатель686707 ный агар типа СПА. Колонии в В -форме, выпуклые с ризоидными краями.

Диаметр колоний пятисуточной культуры достигают до 0,6-,09 см. Пигмент не образует.

Питательный бульон. Всюду помутне- 5 иие значительное, осадок нитевидный или вуаль на четвертые-шестые сутки.

Молоко лакмусовое. Пептонизация и подщелачивание сверху (24-48 ч), затем подкисление и редукция молока, коагуляция на третьи-четвертые сутки, перЕваривание слабое на шестыевосьмые сутки.

Картофель ломтиками. Культура сухая желтая.

Агар с желатиной. Зона гидролиза 2-3 мм.

Агар-казеин. Просветление частичное.

Агар-крахмал, Зона гидролиза

5-6 мм. 20

Дрожжеполисахаридная регламентная питательная среда, используемая для производства энтомопатогенных бактериальных препаратов. Интенсивный рост наблюдается к 12-14 часам культивирования при 28-ЗООС. Спорообразование и высыпание завершается к 36-42 час роста. Титр жизнеспособных, спор в культуральной жидкости к концу культивирования на обедненной 30

ДПС (2Ъ БВК+13 муки) достигает

2,5-3,0 млрд/мл.

Отношение к источникам углерода. усваивает беэ выделения газа глю-. козу, целлобиозу, мальтозу, глицернн Я оксалаты. Не усваивает сахарозу, маннозу, арабинозу, лактозу, инулин . маннит, сорбит, дульцит, ацетаты, цитраты.

Отношение к фагам. Собственные фаги не продуцирует. Устойчив к вирулентным фагам типа FD-2 и Fi-13

Проявляет антагонизм н Вас, thur и уе йз 4, 1, З-серотипам.

Для получения штамма Í5ÂÒ-103

45 использовали принцип рекомбинации генов, т, е. перераспределение детерминант генома клеток в ряду клеточных по(олений родительской популяции. В качестве фактора, индуцирующего это перераспределейие, испольэовали разницу температур минус 10 и плюс 90 С. В качестве исходной культуры, из которой,был получен штамм HSBT-103, использовали конверсионный вариант 1-го серотипа HlBT-2, находящийся на.хранении во ВНИИбакпрепарат.

В таблице представлены данные продуктивности штамма 85ВТ-103 в сравнении с данными продуктивности штам- 69 мов 69/6-прототип и штамма Н1ВТ-2родитель ° Как видно из таблицы, штамм

Н5ВТ-103 отличается от родители принадлежностью к серотипу и в связи с этим является продуцентом другого эн-,Я томопатогенного препарата. Кроме того, штамм Н5ВТ-103 в сравнении со штаммом» прототипом продуцирует на обедненной

ДПС вдвое больше споро-кристаллического комплекса, что позволит значительно снизить расход сырья на производство энтобактерина, а в связи с этим и снизить его себестоимость.

Штамм Н5ВТ-103 является фагнепродуцирующей культурой. и превосходит штамм-прототип по своей вирулентности более чем в б раз.

Формула изобретения штамм Bacillus 1Ъи? ъифе238ье

Уо г, д х,11е . хе Н5ВТ -103,используется для изготовления энтомопатогенного препарата энтобактерина. Получен из Вас.

Ииг1|уепз1| первого серотипа 8lBT-2 путем рекомбинации генов при воздействии температурой минус 10©С и плюс

90 С. Хранится в коллекции ВНИИбакпрепарат.

Морфологические признаки. Величина клеток в экспоненциальной фазе развития на обычном агаре типа CIIA оавна 4,0-6,0 к 2,0-2,5мкм.ПреобпадМощая форма палочковидная. В условиях глубинного культивирования на жидких питательных средах клетки малоподвижные. Встречаются в виде коротких и длинных цепей. Перитрихи грамполо жительны. В период перехода из экспоненциальной фазы в стационарную образуют овальные споры размером в 1,82,2 мкм и белковые в виде .луковиц энтомоцидные кристаллы величиной

2,2-2,5 мкм. По Н-антигену штамм

НБВТ-103 относится к 5-ому серотипу

5а-5б. Физиологические признаки. органи-ческая среда для.поддерживающей селекции и размножения — сухой питательный агар типа СПА. Колонии в Й -форме выпуклые с ризоидными краями. Диаметр колоний 5-ти суточной культуры достигает до 0,6-0,9 см. Пигмент не образует.

Питательный бульон. Помутнение значительное, осадок нитевидный или вуаль на четвертые-шестые сутки.

Молоко лакмусовое. Пептонизация, подшелачивание сверху 24-48 ч, затем подкисление и редукция молока коагуляция на третьи-четвертые сутки,. переваривание слабое на шестые-восьмые сутки. Картофель ломтиками.

Культура сухая, желтая, Агар с желатиной. Эона гидролиза 3-2 мм.

Агар-казеин. Просветление частичное, Агар-крахмал. Зона гидролиза

5-6 м .

Дрожжеполисахаридная регламентная питательная среда, используемая для

686707

Сравнительная характеристика продуктивности штамма Н5ВТ-103 и штаммов Н1ВТ-2 родитель и 69/б (прототип) Н5ВТ-103 У

2,5-3,0

Устойчив

0,08

Не продуцирует

Луковица

3;0-4,0 Ромб

Н1ВТ 2 родитель

Не продуцирует около 0

Устойчив к F9-11

Луковица

1,2-1,8

69/6 прототип

0,5

Чувствителен

Составитель М.Мирзаев

Рецактор,Н HHH

Заказ 5579/4 Тираж 755 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,ц.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãîðîä, ул.Проектная,4 производства энтомопатогенных бактериальных препаратов ° Интенсивный рост наблюдается к 12-14 час культивирования при 28-30 С. Спорообразование и высыпание завершается к -6-42

Час роста. Титр жизнеспособных сПор в в культурной жидкости к концу культивирования на обедненной ДПС (2% БВК+1% муки) достигает 2,.5-3,0 млрд/мл.

Отношение к источникам углерода.

Усваивает без выделения газа глюкозу, с

Рд не

ДП

ВК и) Ис т очи и ки информации, принятые во внимание при экспертизе

1. ллешина O.A. и др. Биологический метод борьбы с вредителями и болезнями сельскохозяйственных растений. М.: "Знание", 1975, с. 33-37. целлобиоэу, мальтозу, глицерин, дксалаты. Не усваивает сахарозу,маннозу арабинозу, лактоэу,инулин,маннит, сорбит, дульцит, ацетаты, цитраР ты.

5 Отношение к фагам. Собственные фаги не продуцирует. Устойчив к вирулентным фагам типа FD-2 и F1-13.

Проявляется антагонизм к Вас. (huvi qienSis l,3 и 4-серотипам.

2. Човерда М.Г. и Симонова Л.A.

Выделение разных вариантов бацилл ,40 .группы Турин иенсис из одного и того же насекомого. Использование микроорганизмов в животноводстве и для зашиты растений, Л., 1968, с.123-126.