Способ выделения неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей

 

О П И С А М- М Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик ">697522

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 03.05.78 (21)2613650/23-13 с присоединением заявки 1(ет— (23) Приоритет (51)М. Кл.

С 07 G 7/03

С 12 D 13/10

Гееудврстееннмй хватет

СССР ее делаы хзееретеней н открытей (53) УДК576.851 (088.8) Опубликовано 15.11.79. Бюллетень М 42

Дата опубликования описания 15.11.79 (72) Авторы изобретения

С. М. Аваева, А. Т. Мевх, E. А. Плаксина и В. А. Склянкина

Московский ордена Ленина и ордена Трудовою Красного Знамени государственный университет имени М, В. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НЕОРГАНИЧЕСКОЙ

ПИРОФОСФАТАЗЫ ИЗ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ

Изобретение относится к ферментной промышленности, а именно к способу выделения неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей.

Известен. способ выделения неооганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей, предусматривающий плазмолиз дрожжевых клеток в толуоле, экстракцию водой, фракционирование сульфатом аммония, обессоливание и фракционирование спиртом (1).

Выход фермента составляет 12%. активность

645 Е, Наиболее близким к предлагаемому является способ выделения неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей, предусматривающий плазмолиз дрожжевых клеток, фракционирование сульфатом аммония, обессоливание и хроматографирование на полисахаридном носителе (21.

Способ позволяет получить неорганическую фосфатазус активностью726-790 t, выход фермента составляет 24%.

Целью изобретения является повышение вы хода фермента, а также упрощение процесса выделения.

Цель достигается тем, что препарат, полученный после плазмолиза дрожжевых клеток в то5 луоле, экстракции белков водой, фракционирования сульфатом аммония и обессоливания, хроматографируют на полисахарндном носителе, содержащем в качестве боковой цепи алкиламин.

Использование такого носителя основано на cnef0 цифическом свойстве неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей — ее гидрофобности.

Для повышения удельной активности полученного фермента его подвергают дополнитель15 ной очистке гельфильтрацией на ультрагеле А с А 44.

Пример 1. 140 r пекарских дрожжей подвергают плазмолизу в толуоле в течение 4 ч при 40 — 45 С, прибавляют 100 мл воды и оставляют на ночь при 4 С. Водный слой отделяют и центрифугируют, К надосадочной жидкости прибавляют сульфат аммония до насыщения

0,5, центрифугируют, осадок отбрасывают, к

Составитель Т. Мелентьева

Техред Jl. Алферова

Редактор В. Трубченко

Корректор Ч Пожо

Заказ 6871j! 8 Тираж 5!3

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий !

13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ПП!! "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная. 4 ч t . ° е™ +. t - " i t

I

3 697522 надосадоч ой жидкости прибавляют сульфат аммония до насыщения 0,7. Полученный после центрифугирования осадок обессоливают диализом против 0,025 М трисового буфера, рН 7,2.

Обессоленный белок в 1000 мл трисового буфе- 5 ра рН 7,2 наносят на колонку с 60 мл гексаметилендиаминсефарозы (диаметр колонки 1,5 см).

Добавление к элюирующему буферу хлористого натрия приводит к десорбции фермента с колонки. Десорбированную неорганическую пиро- фосфатазу.подвергают гельфильтрации на колонке с ультрагелем А с А 44.

Удельная активность полученного препарата 710 Е, выход — 50 o.

Пример 2. Способ осуществляют согласно примеру 1, используя в качестве полисахаридного носителя ультрагеля А с А 44. Хроматографирование проводят в колонке диаметром 1 см с 8 мл ультрагеля в 1 мл 0,025 М трисового буфера, рН 7,2.

zo

Удельная активность полученного препарата

774 А, выход — 7(Y

Данный способ позволяет получить неорганическую пирофосфатазу из пекарских дрожжей

25 с высоким выходом и упростить процесс выделения фермента за счет уменьшения количества стадий.

Формула изобретения

Способ выделения неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей, предусматривающий плазмолиз дрожжевых клеток, фракционирование сульфатом аммония, обессоливание и хроматографирование на полисахаридном носителе, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента и упрощения процесса, хроматографирование проводят на полисахаридном носителе с алкиламином в качестве боковой цепи с последующей гельфильтрацией на ультрагеле А с А 44.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Kvnitz М., Archiv of Biochemistry and

Biophysie, 1Я61, Я2, 270.

2. Cooperman В.$., Chin N. !., Brvckmann R.N., Bunick J. J., Mekenna J.B., Biochemistry, 1973, !2, 1965.