Способ получения пептида

 

ygccvgy ----ПАт Г ММ СКА б A иотека МБА

Союз Советскик

Социалистических

Республик

ОП И НИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

< 701641 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22)Заявлено 11.05.78 (21) 2638259/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет— (51)М. Кл.

А 61 К 39/02

61оуддрствеииый комитет ао делам изобретений и открытий

Опубликовано 05.12.79. Бюллетень Ж 45

Дата опубликования описания 05.12.79 (53 ) УД К 615.45:

: 616-097 (088.8) (72) Авторы изобретения

Л. И. Ванеева, 1. Д. Растегаева и Ю. А. Черникова

Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (7l) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДА

Изобретение относится к вакцинно-сывороточному производству и касается получения пептида для создания монорецелторных сывороток и специфических диагностикумов.

Известен способ получения пептида путем гидролиза флагелина трипсином с последующим хроматографическим разделением, элюцией и диалиэом целевого продукта (1).

Однако длительный гидролиз снижает активность и специфичность пептида.

С целью повышения активности и специфичности пептида по предлагаемому способу гидролиэ ведут в течение 20-30 мин и элюируют целевой продукт смесью, содержащей 80—

120 мл муравьиной кислоты, 250 — 350 мл уксусной кислоты и 530 — 670 мл воды.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Мономерную форму Н-антигенов "d", "а", "в", "1, 2" получают путем прогревания ее полимерной формы при 100 С в течение 1 мин. К полученному мономеру прибавляют трипсин в соотношении 1/100. Гидролиз проводят в 0,02М аминоацетатном буфере при рН 8,2. Гидролиэ ведут в течение 20 мин. Полученный гидролизат наносят на колонку с сефадексом Г-200. Элюцию проводят

HCO0H: СНз OOH: НзО в соотношении соответственно 1: 3: 6. Препарат 1 пика диалиэуют и лиофилиэируют. Изучение серологической активности в РТПГА или радиоконкурентным методом показало, что препарат 1 пика всегда обладает серологической активностью, более высокой, чем исходный препарат флагелина.

t0

Флагелин несет на своей поверхности как специфическую антигенную детерминанту, так и общую для ряда Н-антигенов (титр сыворотки с диагностикумом к Н вЂ” d 1: 16000, титр

15 . сыворотки с диагностикумом к Н-а 1: 4000).

Полученный пептид несет на своей поверхности только специфическую антигенную детерминанту (титр сыворотки с диагностикумом к

Н вЂ” д 1: 32000).

Значительное сокращение времени ферме тативного гидролиза и применение указанной смеси растворителей создают условия, повыш; ющие активность и специфичность пептила.

701641

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Волкова Техрец Э.Чумак Корректор М. Внгула

Заказ 7478/6 Тнрвк 672 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раугпская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

Способ получения пептнда путем гидролиза флагелина трипсином с последующим хроматографическим разделением, злюцией и диализом целевого продукта, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью цовьппения активности и специфичности пептида, гндролиз

4 ведут в течение 20 — 30 мнн и злюируют целевой продукт смесью, содержащей 80 — 120 мл муравьиной кислоты, 250 — 350 мл уксусной кислоты и 530 — 670 мл воды.

5 Источники информации принятие во внимание при экспертизе

1. У.Immunochemistry, 1972, Ч 9, р.153!

67 (прототип).