Способ количественного определения парааминосалицилата натрия

 

Союз Советскик

Социапистическик

Реснубпик

< и 7f 763J к

Н АВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. сеид-ву— (22) Заявлено 18.04.78 (2I ) 2605437/23 О (51)М. Кл. с присоединеииент заявки J%—

G 01N 21/24

Гооудврстввнный комитет

СССР па денем изобретений н открытий (23) Приоритет

Опубликовано 25.02.80. Бюллетень № 7

Дата опубликования описания 28.02.80 (53) УЙК543 42. .062(088.8) (72) Авторы . изобретения

А. А. Хабаров и Л. И. Поваляева

Читинский государственный медицинский институт (7I) Заявитель.(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ПАРААМИНОСАЛИЦИЛАТА НАТРИЯ

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способу определения парааминосалицилата натрия, и может быть использовано при анализе лекарст-"" венных средств в лабораториях аптечных управлений и химико-фармацевтических за- водов, а также в биохимических лаоораториях системы здравоохранения и при ток- сикохимических исследованиях.

Известен способ количественного определения параамнносалицилата натрия пу10 тем обработки пробы анализируемого ве-" щества концентрированной серной кислотой с последуюшпм измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора (1).

Недостатками способа являются его неселективность н невысокая чувствитель ность.

Этот способ позволяет обнаружикь при концентрации 50 мкг/мл в среднем только 75% препарата в моче и 71,5;о — в . крови даже в искусственных смесях.

Цель нзоброт..иия — повышение селек- тивности и чувствит» и пости способа.

Цель достигается тем, что по способу заключаюшемуся в том, что пробу анализируемого вещества обрабатывают неорга— ническим реагейтом с последующим измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора,в качестве неорганического реагента используют хлорид алюминия н

\ обработку ведут в кислой среде и присутствии бутилового спирта.

Сопутствующие ингредиенты, находящиеся в лекарственных формах, не меша-, ют прямому определению. Линейная зависимость между интенсивностью флуоресценции образующегося внутрикомплексного соединения и концентрацией парааминосалицилата натрия находится от 0,0 1 до .

50 мкг/мл .

Содержание парааминосалицилата натрия, начиная с 0,1 мкгlмл, определяется полностью (100%) в биологических жидкостях (моча и кровь).

Пример 1. Количественное определение парааминосалицилата натрия в лекарственных формах.

Результаты флуориметрического определения парааминосалицилата натрия в

Пасомицине приведены ниже (навеска порошка составляет 0,9194), Найдено парааминосалипилата по калибровочному из расчета на 1 г графику, мкг порошка

0,4600

; 0,5000

0,5532

9,1500

10,0000

11,0640

3 7176

Точную навеску (0,05 г, 0,1 r или

1-2 мл) исследуемых образцов переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 50-60 мл этилового спирта и энергично встряхивают 3-5 мин, доливают спиртом до метки и перемешивают (раствор А). Аликвотную часть раствора А переносят в мерную колбу, чтобы получился раствор с содержанием не более

200 мкг/мл (раствор Б). К 1 мл раство- 10 ра Б приливают 1 мл 1%-ного раствора хлорида алюминия, 8 мл бутилового спирта, 3 капли 2й, спиртового раствора соляной кислоты и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора. 15

Содержание рассчитывают по калибровочному графику, для чего в ряд пробирок отмеривают 0,1; 0,5; 1,0; 1,5;

2 мл стандартного раствора в этиловом спирте с содержанием 100 мкг/мл, до- 20 ! t бавляют по 1 мл 1%-ного раствора хлорида алюминия, доводят все растворы бутиловым спиртом до 10 мл, добавляют по

3 капли 2 н.спиртового раствора соляной кислоты. Флуориметр фуит одновремен- но с растворами исследуемых образцов.

По результатам этих измерений строят калибровочный график.

Найдено пар ааминосалицилата натрия по калибровочному графику, мкг

10,4347 в растворе, г

0,0344

9,7826

10,2137

9,5652

l0,0347

9,1304

0,0322

0,0337

0,0315

0,0331

0,0301

Метрологические характеристики

Х = 0,0325

6 = + 0,0019

Е„9 = + 0,0019

g. = 0,0325 + 0,0019

Пример 2. Определение парааминосалицилата натрия в крови.

0,1 мл крови разбавляют до 1 мл этиловым спиртом, хорошо перемешивают, ценрифугируют 3-4 мин при 3000 об мин.

К 1 мл центрифугата добавляют 1 мл 1%ного спиртового раствора хлорида алюминия, 8 мл бутилового спирта и 3 капли

2 н, раствора соляной кислоты. Измеряют интенсивность флуоресценции. Содержание рассчитывают по калибровочному графику, для чего в ряд пробирок отмеривают 0,1;

0 5," 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 мл стандартного раствора с содержанием 25 мкг/мл в этиловом спирте, добавляют по 1 мл

1%-ного раствора хлорида алюминия, дово . дят объем всех пробирок до 10 мл бутиловым спиртом, добавляют по 3 капли 2Н. раствора соляной кислоты. Флуориметрируют одновременно с растворами исследуемых образцов.

31 4

Ниже даны результаты флуориметрического определения парааминосалицилата натрия в 3%-ном растворе для инъекций.

7,4469

8,7234

0,3723

0,4361

0,4468

0,3085

0,3936

Oi4150

8,9361

6,1702

50 7,8723

8,3000

Метрологические характеристики

Х 0,4317

< =+ 00714

Е 095 =+ 00547

G, <. 0,43171 0,0547

Пример 3. Определение парааминосалицилата натрия в моче.

1 мл мочи разбавляют до 1О мл этиловым спиртом, центрифугируют 3-4 мин при 3000 об/мин. К 1 мл данного раствора прйбавляют 1 мл 1%-ного раствора хлорида алюминия в этиловом спирте, 8 мл бутилового спирта и 3 капли 2н. спиртового раствора соляной кислоты„измеряют интенсивность флуоресценции. Содержание ПАСК рассчитывают по калибровочному графику, для чего в ряд пробирок отмеривают 0,1; 0,5; 1,.0; 2,0; 3,0;

5 717631 6

4,0 мл стандартного раствора в этило- но с растворами исследуемых образцов. вом сцирте с содержанием 25 мкг/мл, Результаты определения представлены. добавляют по 1 мл 1%-ного раствора Результаты флуорнметрического опрехлорида алюминия, доводят объем всех деления парааминосалицилата натрия в пробирок до 10 мл бутиловым спиртом, 5 крови и моче при назначении по 9,0 r добавляют по 3 капли 2и,раствора соля- в виде таблеток (%.èç 10 больных) даны ной кислоты, флуориметрируют одновремен- ниже.

3,457 3,063 0,856 0,210 0,114 0,061 0,045 0,035 7,844 44,6 48,1 54,7 40,2

4 = + 0,774 = 7,844 «+ 0,815

40,0 мкг/мл, прямолинейная от 0,01 до

50 О ллкг/мл.

Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации парааминосалиципата натрия приведена в табл. 1.

Таблица 1.

Относительная интенсивность флуоресценции

Концентрация пар ааминосалицилата натрия, мкг/мл

50 13 15

58 23 22

66 36 32

l0,0

5,0

1,0

2,0

0,1

0,01

10,0 20,0

0,2

0,02

150 . 300

20,0 40,0

25,0 50,0

З,О

О,з

0,03

0,4

72 49

4,0

0,04

53 48

60 54

5,0

0,5

0,05

0,06

30,0.

6,0

60,0

70,0

0,6

7,0

35,0

0,7

68 58

79 66

0,07

40,0 80,0

45,0 90,0

0,08

0,09

0,8

8,0

102 90 67

66

0,9

9,0

10,0

1оо

110

104 69

50,0

0,10

1,0

Ниже приведена зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации хлорида алюминия

При изучении оптимальных условий проведения флуоресцентной реакции на парааминосалицилат натрия установлено, что прямая зависимость интенсивности флуореспенпии от конпентрапии парааминосалипила натрия лежит от 0,0 1 до

Чувствительность реакции достаточно высокая (0,01 мкг/мл), что позволяет проводить определения препарата в лекарственных формах (0,01 мкг/мл) и биологических жидкостях (0,1 мкг/мл) без от- деления от сопутствующих компонентов.

Определения проводились на электронном флуориметре ЭФ-ЗМА.

Концентрация раствора хлористого алюминня, используемого для обработки анализируемой пробы, составляет от

0,000001 до 0,1 г/мл. Оптимальные значения этого интервале от 0,01 до

0,О3 г/мл.

7 717631

Концентрация хло- Относительная инрида алюминия, г/мл тенсивность флуоресценции

0,001,, 46

102

82

0,01

Влияние времени на интенсивность флуоресценции, дано ниже.

0,02

0,03

0,04

Время, мин (0,05

1 73

Тотчас

Выявлено влияние концентрации соляной кислоты. Количества соляной кислоты, времени на величину интейсивности флуо- !5 ресценции приведены ниже.

82

15

Концентрация Относительная инсоляной кислоты, н. тенсивность флуоресценции

12

50

85

40

1,5

45

1 68

Зависимость интенсивности флуоресцен- ЗО ции от количества 2н. соляной кислоты дана ниже.

82

Через сутки

Исследовали состав полученного внутрикомплексного соединения методом изомолярных серий (см. табл. 2).

100

Таблица 2

Состав внутрикомплексного соединения парааминосапицилата натрия с хлоридом алюминия методом изомолярных серий

Количество парааминоса пилата натрия, мл при концентрации

1 10 М 0 5 10 N 1 10 N 0,5 10 М 1 10 М 0 5 10 М

10,0

13

0,5

1,0

9,0

4,5

22

1,0

2,0

8,0

4,0

3,0

7,0

1,5

3,5

2,0

6,0

3,0

Количество ка- пель 2 н. сол яной

1 / кислоты

Относительная интенсивность флуоресценции

Относительная интенсивность флуоресценции

717631

П о олжение таЯ Я, Количество парааминосалицилата натрия, мл

Количество хлорида алюминия, мл

Относительная интенсивность флуоресценции при концентрации

1 10 М

05 10 М 110 М 05 ° 10 М 1 10 М 05 10 М

2,5

5,0

5,0

6,0

3,0

2,0

35,0

7,0

3,0

40,0

8,0

2,0

1,0

0,5

9,0.

45,0

1,0

10,0

50,0

Составитель С. Хованская

Редактор Н, Чурикова Техред М. Кузьма Корректор Г. Назарова

Заказ 9831/60 Тираж 1019 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

Способ количественного определения парааминосалицилата натрия путем обработки пробы анализируемого вещества неорганическим реагентом с последующим измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора, о т л и ч а ю шийся тем, что с целью повышения чувствительности способа и его селективности, в качестве неорганического реагента используют хлорид алюминия и обработку ведут в кислой среде в присутствии бутилового спирта.

Источники информации, д принятые во внимание при экспертизе

1. Сенов П. Л., Павлюченкова Л. П.

Флуориметрическое определение натрия парааминосалицилата. «Фармация», 1973, % 5, с. 32-34 (прототип).