Способ определения эризимина

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИ

ИЗОБРЕТЕН И

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ (63) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено24.04.78 (21) 2609 180/2 с присоединением заявки М

Пкударстеапвй коннтет

СССР. дв делам нзобретеннй н еткрмтнй (23) Приоритет

Опубликовано 28.02.80.,Бюллетень

Дата опубликования описании 03,03. (72) Авторы изобретения

В. В. Михно, В. В. Петренко, И. Г. Постригань и П. П. Луцко

Запорожский медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭРИЗИМИНА

Изобретение относится к области кли лической биохимии, а именно к способу определения гликозида эризимина и может быть применено для количественного и качественного анализа этого соедине-

3 ния в различном материале для клинических исследований.

Известен способ определения эризими- на путем воздействия на исследуемый материал реагентом с последующей фотометрией образовавшегося окрашенного продукта (11.

Недостатком этого способа является его3малая специфичность и точность. .Йель предлагаемого изобретения — по1% вышение чувствительности и специфично- сти анализа.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве реагента используют . 2,3,2,4-тетранитродифенил, и реакцию ао проводят в щелочной среде.

К раствору 10 мкг исследуемого

"препарата в 96 этаноле илн к 0,1 мл ампульного раствора прибавляют до

3 мл 96" этанол. 2,5 мл 15%-ного спиргового раствора ТНДФ, 0,5 мл 0,15 н. родного раствора едкого кали. Смесь охлаждают цо 20-22ОС. При этом возникает синее окрашивание. В опыте для сразнения проба бесцветна.

Построение калибровочного графика определения эризимина.

Точную навеску препарата (0,0500 г) растворяют в 96 з этаноле, количественно переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки этим же растворйте:лем (раствор А). Из разведения берут

10 мл (точно мерной пипеткой) переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят 96 этанолом до метки (растворБ).

Из раствора Б берут 0,1; 0,2; 0,5;1

1 и 2 мл, помещают в пробирки, добавляют

96 этанол до 2 мл, 2,5 мл 0,15% спир" тового раствора ТНДФ, 0,5 мл 0,15 н. водного раствора едкого кали. Смесь охлаждают до 20-22 С и проводят измерение оптической плотности растворов, окрашенных в синий цвет, через 20 минут

3 7 18092 4 после добавления щелочи. Измерения комплексов 18-20 мин, стабильность проводят на фотоалектроколориметре окрашивания М, 8-10 мин. Подчиняе

ФЭК И. В течение 20 мин "до измерения" мость продукта реакции основному за растворы хранят в темноте. Светофильтр кону светопогльщения наблюдается в красный, кювбта 5 мм, фон - смесь 5 пределах концентраций препарата 10 реактивов. Экспозиция Е окрашенных 150 мкг/мл. Данные приведены в таблице.

Результаты зависимости величийы оптической плотности окрашенных растворов эризимина с ТНЙФ от концентрации ть

0,1

0,050 0,050 0,050 0,050 0,050 0,050

0,100 0,100 0,090 0,095 0,100 0,095

0,550 0,050

О, 100 0,085

0,180 0,170

0,235 0,217

О, 330 О, 325

0,2

0,4 40

О, 170 О, 170 О, 170

0,210 0,240 0,220

О, 180

0,240

О, 175 О, 180

0,240 0,235

0,5

О, 7 70

0,300 0,325 0,330 0,330 0,330 0,320

0,450 0,500 0,470 0,460 0,490 0,480

0,590 0,580 0,560 0,560 0,600 0,580

0,470 0,480

0,600 0,600

0,680 О",680

0,720 6,700

0,900 0,890

1,0 100 1,2 120

1,4 140

1,5 150

20 200

О;680 0,650 0,650 0,680 0,690

0,650

0,720

0,700 0,700, 0,900 0,900

0,690 0,7 10

0,850 0,860

0,72О;

0,8фО

0,870

Пример. К l00 г печени, почек крови и мочи трупа, погибшего от травмы, добавляют l000 мкг аризимина.

Изолирование проводят через сутки

70% ным атачолом. Настаивают объект с растворителем 24 ч. После троекратного настаивания спиртовые вытяжки объединяют, упаривают при 60"С и осаж45 дают белки 96 атанолом. Осадок коагулировавших белков отфильтровывают, Раствор упаривают и растворяют в 50 мл

20%-ного этанола. Полученный раствор

-" двоекратно очишают от прймесей акстракцией этиловым эфиром. Из оФййейного спиртоводного раствора экстрагируют эризимин четырежды смесью атанола— хлороформа 1:4. Объединенный спирто.хлероформный экстракт очишают акстрак цией 1 н. раствором едкого натра, промывают дистиллированной водой, осушивают, пропуская через слой безводного сульфата .натрия и упаривают при 40 С

O досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл 96 этанола. Из разведения берут, 1 O мл, добавляют до 2 мл 96О этанол..Изолирование из мочи проводят аналогично, опуская настаивание 70%-ным этанолом и осаждение белков. Расчет

: процентного содержания эризимииа, выделенного из биологического материала, пров<щят по формуле

-a ° Ч 400 ч. )

q Р где 0 - концентрация, мкг, найденная по калибровочному графику;

71 — объем, мл, взятый на анализ

Э

V< - объем, мл в котором растворен сухой остаток

- количество эризимина, мкг, добавленного к 100 r объекта.

5 718092 б г

Результаты исследования контрольных Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я, проб указывают на отсутствие влияйия Способ определения эризимина пугем экстрактивных веществ из печени на:. воздействия на исследуемый материал ре опрецеление эризимйна, колориметри- агентом с последующей фотометрией обра руемые растворы практически бес- 5 зовавшегося окрашенного продукта, о т л ицветны. ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и сцецифичСпособ позволяет повысить чувстви- ности анализа, в качестве реагента истельность и специфичность метода ortpe- пользуют 2,4,2,4-- тетранитродифенил, и деления эризимина, исключить дорого- 1О реакцию проводят в щелочной среде, стоящее оборудование, упростить мето- Источники информации, дику анализа аризимина, уменьшить рас- принятые.во внимание при экспертизе ход исследуемого препарата. 1. Аптечное дело. 3, 1962, с. 38-41.

I . Составитель П. МоРозо

Редактор Л, Герасимова Техред Я. Петро Корректор

Заказ 9983/6 Тираж 673 Подпйсйое

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4