Способ получения эндогенных резерпиноподобных веществ

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

Oll NCAHHE

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

< 731968 (6l ) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлеко08.09.77 (2l ) 2547564/28-13 (53)M. Кл:

А 61 К 35/12 с присоединением заявки.%—

Государственный комитет (23) Приоритет до делам изобретений и открытий (5З) УДК615.45:

:591.8 (088. 8) Опубликовано 05.05.80. бюллетень № 17

Дата опубликования описания 12.05.80 (72) Авторы изобретения

П. П. Гаряев, A. M. Вихерт и Ю. С. Петренко

Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР (7l) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОГЕННЫХ

РЕЗЕРПИНОПОДОБНЫХ ВЕШЕСТВ

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, и касается выделения алкалоидоподобных веществ.

Способ получения эндогенных резерпиноподобйых веществ из тканей животных и человека в патентной и научно-техничес кой литературе не описан.

Белью изобретения является получение эндогенных резерпиноподобных веществ из тканей животных и человека. ю

Эта цель достигается тем, что ткань животных и человека измельчают, экстрат ируют хлорной кислотой, термостатируют в течение 2-18 ч, фильтруют, подшелачивают раствор, экстрагируют смесью хлороформ: н-пропанол: изобутанол в соотношении 13:1:1, отделяют органическую фазу, упаривают и хроматографируют с использованием системы растворителей хлороформ: метанол в соотношении 95:5 в тон-2О ком слое на пластинке "Силуфол", пластинку- после высушивания развивают в системе изобутанол: уксусная кислота: вода в соотношении 4;1:.1, с высушенных пласти-. нок отбирают зоны, флуоресцирующие в ультрафиолетовом свете с длиной волны

270-300 нм, которые экстрагируют хлс рофармом или апетоном, полученный экстракт профильтровывают через бактериальный фильтр, хроматографируют в системе изобутанол: уксусная кислота: вода в соотношении 4: l:1 с последующим отбором фракций с 3< 0,75; 0,61; 0,45, соответствующие резерпинопоаобным (РП ) фракциям 1, 2, 3, каждую из которых экстрагируют и рехроматографируют.

Способ поясняется следующим примером.

50-70 г ткани сердца из самцов крыс линии %Ма " сразу после забоя измельчают ножницами, затем растирают с 1015 г песка 5-6 мин, Песок для гсмогенезаций предварительно обрабатывают кипячением с 6 (ч НС1 в течение 2 - ч и отмывкой дистилированной водой до рН

5,0-6,0. Сразу после растираиия в гомогенат добавляют 50 мл 0,4 МНС.РО и растирание продолжают еше -6 мин. Затем

3 7319 доводит общий объем 0,4 Й НС1 0, до

200 мл и термостатируют при 37оС в течение 18 ч в темноте. Гомогенат фильтруют через бумажный фильтр, фильтрат подщелачивают водным аммиаком до рИ

10-11. Экстрагируют встряхиванием в делительной воронке триждь< по 3 мин порциями по 60 мл смесью хлороформ: иэобутанол: н-пропанол в соотношении

13:1.1. Степень полноты экстракции контролируют по интенсивности пика флуоресценции изолированных РП-фракций при

515 нм в хлороформе (длина волны возбуждения 270 нм). После экстракции указанной смесью органическую фазу отделяют от водной центрифугированием в течение 8 мин при 10000 Органическую фазу концентрируют в вакууме на роторном о испарителе при 40 С и наносят на плас тинки "Силуфол". Хроматографируют в сис- gp теме хлороформ: метанол (95:5 по объему). Затем эту же пластинку после высушивания при компактной температуре развивают в системе иэобутанол: уксусная кислота; вода (4:1:1). После высушива- 25 ния при комнатной температуре пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете (270-300 нм). Все флуоресцирующие зоны соскребают, объединяют и экстрагируют хлороформом или ацетоном термостатированием при 37ОС в течение 3 ч.Экстракт фильтруют через бактериальный фильтр, фильтрат концентрируют на роторном испарителе при 40 С и снова хроО матографируют в тех же системах, как 35 описано. Вновь экстрагируют флоуресцирующие эоны, концентрируют и упаривают их, как, описано. Затем <роматографируют в системе изобутанол: уксусная кислота: вода (4:1:1) и соскребают флуоресциру- 4о ющие в УФ-свете эоны c R 0,75; 0,61

0,45, соответствующие РП фракциям 1, 2, 3. (РП 1, РП 2, РП 3), каждую иэ этих фракций экстрагируют и рехроматографируют по отдельности для полной 4> очистки еще 2-3 раза.

После описанной очистки РП 1, РП 2, РП 3 гомогенны, растворимы в виде свободных оснований в хлороформе; этилацетате, этаноле и других органических раство- Ы рителях, В виде хлоридов и перхлоратов рютворимы в воде. На хроматографической пластинке в УФ свете РП фракции обладают характерной флуоресценцией: РП 1голубой, а РП 2 и РП 3 желтой. 55

БНИИПИ Заказ 1584/3

Филиал ППП Патент", г.

68 4

Предложенный способ был испытан для выделения и очистки РП фракций иэ тканей крыс (печень, почки, мозг) и быка (печень, сердце, пинеальная железа), человека (cepaue, почки, надпочечники, гипотеламус, аорта). Во всех случаях с разными выходами выделяли гомогенные РП фракции. Резерпиноподобные вещества действуют на животный организм подобно экзогенному резерпину. Это выражается в с ущес твенных физиологических сдв игах, об условленных изменением ypoBHsf свободных и связанных катехоламинов в животных тканях.

Проведенное физиолого-гистохимическое исследование обнаружило направленное на катехоламиновый обмен и сосудо-двигательный тонус действие эндерпинов, что свойственно и экзогенному резерпину.

Выделение эндогенных резерпиноподобных веществ из тканей животных может найти в дальнейшем широкое применение при получении лекарственных форм новьго типа с направленность на регуляцию обмена таких важных метаболитов, как адреналин, норадреналин, допамин, серотинин, мелатонин.

Формула изобретения

Способ получения эндогенных резерпиноподобных веществ, о т л и ч а ю— шийся тем, что, ткани животных и человека измельчают, эксчрагируют хлорной кислотой, термостатируют в течение

2-18 ч, фильтруют, подщелачивают раст« вор, экстрагируют смесью хлороформ: нпропанод: изобутанол в соотношении

13:1:1, отделяют органическую фазу, упаривают и хроматографируют с использованием системы растворителей хлороформ: метанол в соотношении 95:5 в тонком слое на пластинке Силуфол, пластинку после высушивания развивают в системе изобутанол: уксусная кислота: вода в соотношении 4;1:1, с высушенных пластинок отбирают зоны, флуоресцирующие в ультрафиолетовом свете с длиной волны

270-300 нм, которые экстрагируют хлороформом или ацетоном, полученный экстракт профильтровывают через бактериальный фильтр, хроматографируют в системе изобутанол: уксусная .кислота: вода в соотношении 4:1:1 с последующим отбором фракций с В 0,75; 0,61; 0,45, соответствующие резерпииоподобным фракциям 1, 2, 3, каждую из которых экстраг ируют и рехроматографируют.

Тираж 673 Подписное

Ужгород, ул. Проектная, 4