Способ получения колоний кроветворных клеток у птиц

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОБУСНОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Сециапистикескик

Республик нн734382 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 29.1278 (21) 2724821/30-15 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 1 5 058 О. Бюллетень М 1 8

Дата опубликования описания 170580 (53)М. Кл.2

С 12 К 9/00

Государственный комнтет

СССР по делам нзобретеннй н открытий

G 01 М 33/16 (53) УДК

: 391.85 (088.8) (72) Авторы изобретения

Н.И. Дриэе и Е.И. Дерюгина

° . Лацис, Московский ордена Ленина и ордена Трудового Коасного знамени государственный университет им. М. В. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЛОНИЙ KPOBETBOPHblX

КЛЕТОК У IITHII

Изобретение относится к способам получения культур животных тканей и может быть применено в медицине, гистологии, гематологии и эмбриологии °

Из ве ст ен спосо б полу чени я гемопоэтических колоний у млекопитающих пу тем облучения мышей ионизирующей радиацией и последующего введения клеток костного мозга интактного организма в вену хвоста облученной мыши (1) .

Способ имеет следующие недостатки:трудоемкость способа;необходимость сложной идентификации донорских клеток;.использование способа возможно только на чистых линиях животных.

Известен способ получения гемопоэтических колоний у млекопитающих путем облучения ььгмей ионизирующей радиацией и последующего введения клеток костного мозга крысы в вену хвоста облученной мыши (2).

Способ имеет следующие недостатки- ;необходимость сложной идентификации донорских клеток, например, реакция .на кислую фосфатаэу или применение люмииисцентной микроскопии; использование спо- соба возможно только на линейных животных.

Известен способ получения кровет» ворных колоний у птиц путем введения клеток костного мозга цыплят в вену крыла сублетально облученных цыплят с последующей инкубацией в течение

6-12 сут, извлечением костного мозга из кости голени и проведения бензидиновой реакции (3).

Прототип имеет следующие недостатки: трудоемкость способа; низкий выход колоний, вследствие низкой выживаемости цыплят; невозможность отличия экзогенных колоний, образую шихся из клеток донорского материала от эндогенных, образующихся из собственных клеток; воэможность использования способа лишь на одновидовом материале °

Белью изобретения является повышение выхода колоний и более точная идентификация колоний кроветворных клеток.

Бель достигается тем, что в качестве донора используют перепела, а после проведения бенэидиновой реакции дополнительно проводят реакцию

)Эельгена, йо которой судят о нали30

734282 .

Формула Изобретения

Составитель Д. Данишевский

Редактор Т. Девятко Техред M.Петко Корректор В. Синицкая

Подписное

Заказ 2010/36 . Тираж 522, IIHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4.чик донорской колонии кроветворных клеток.

Пример 1.. Трехнедельных цыплят облучают сублетальио дозой

750 Р по 50Р/мин. Через 1 сут после облучения в крыловую вену вводят

4 « 10 клеток желточного мешка перев пела, например на стадии 60 ч инкубации, в 0,6 мл суспенэии. На 7 сут после введения клеток цыпленка декапитируют и осторожно вскрывают кости конечностей, извлекают костный мозг и просчитывают количество бензидин-положительных макроколоний после бенэидиновой реакции, s 8 кос» тях каждого цыпленка (бедерных, голени, плечевых, локтевых). Для гистологической обработки костный мозг проводят. через кедровое масло и заливают в парафин, На срезах дополнительно проводят реакцию Фельгена.

Образуется при эгом 123 бенэидин-положительные колонии в костном мозге цыпленка. Экэогенные копонии составляют 77% от общего числа колоний на срезах. Все это колонии кроветворных клеток, Пример 2. Трехнедельных цыплят облучают сублетально дозой

800 Р по 50 Р/мин. Через 1 сут" после облучении в крыловую вену вводят

1,5 10 клеток почки зародыша перепела, например на стадии 60 ч инкубации, в 06 мл суспензии. На

9 сут производят дальнейшие операции, согласно примеру 1.

Образуется при этом 435-бенэидинположительных колоний, Экэогенные колонии кроветворных клеток составляют 793 от общего числа колоний на срезах.

Пример 3. Трехнедельных цыплят облучают сублетально дозой

850 P по 50 Р/мин. Через 1 сут. после облучения в крыловую вену вводят

6 10 клеток из собственно эароЬ дыша перепела, например на стадии

48 ч инкубации. При этом образуется

87 бенэидин-положительных колоний в костном мозге цыпленка. Экзогенные колонии кроветворных клеток составляют 72% от общего числа колоний на срезах.

Использование предпагаемого способа имеет следующие преимущества перед известным; упрощение способами повышение выхода колоний с одновременной надежной и простой идентификацией экзогенных и зндогенных колоний кроветворных клеток; расширение круга объектов.

Способ получения колоний кроветворных клеток у птиц путем введения в вену крыла сублетально облученного цыпленка кроветворных клеток донора с последующей инкубацией в тече20 ние 7-9 сут, извлечением клеток костного мозга и проведением бенэидиновой реакции, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода колоний и более точной

25 идентификации колоний кроветворных клеток, в качестве донора используют перепела, а после проведения бензидиновой реакции дополнительно

-проводят реакцию Фельгена, по которой судят о наличии донорских колоний кроветворных клеток.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

35 1 Т1М J,&cCuKKoch E А direct "еа9

ment of Иiе radiation sensivita от normat ovзе bone -магно е ce_#_s,Radiat.éås.,1961, И,Ю

213-222

4О С, 2,%u AW,Titl3.,Sirnino itcb1 МсСоИос1чЕ.

Ъ

C>tology>ca colony 1ог тп нц ceNs and cetus оЕ tte Ornpboig s ste,Q.Ехр- Red.,1968,1121, 455-464.

3 .Sornurvt 3., Ni n Ч.."IHf fer entEation of

Ъоеторо1еОс Мзьщэ fro e,mbr os and

Qdut% injected into (rradiuted cbickens, J E br of. 1хр Мог р Мой .,1915, ъ 3,259-278.