Способ получения аммонийной соли монофосфоинозитида

 

6 t

О П И С:А- Н - И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ (u) 740740

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву р м „г (22) Заявлеио181078 (21) 2531671/23-04 с присоединением заявки №

С 07 С 43/02

С 07 С 31/18//

A 61 К 29/00

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет—

Опубликовано 150680, Бюллетень ¹22 (- з) УДЫ 547.953. .07(088.8) Дата опубликования описания150 6.80 (72) Авторы изобретения

В,Н. Крылова, A.È. Лютик и В.И. Швец

Московский ордена Трудового Красного Знамени институт химической технологии им. М.В. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ANMOHHAHOA СОЛИ

МОНОФОСФОИНОЗИТИДА

Изобретение относится к усовер.шенствованному способу получения монофосфоиноэитидов формулы (1)

gg он 5

П

ОД ()-Р-О-СН

HQ О Hcroo @44ç

1 ÎOÅ,С„, эч важнейших. представителей природных фосфолипидов-фосфоинозитидов, определяющих функционирование живых организмов и необходимых для исследований в молекулярной биологии и медицине.

Известен способ получения монофосфоинозитидов (фосфатидилинозитов) на внове миоиноэита, заключающийся вд взаимодействии миоинозита с 2Q циклогексаноном в присутствии И-толуолсульфокислоты, в ацетилировании полученного циклогексилиден-5п-мионоэита уксусным ангидридом, в снятии циклогексилиденовой защиты кислст- 25 ным гидролиэом, во взаимодействии полученного ацетатного производного

Sn -мионоэита с 3,4,б-три-О-ацетил-1,2-этилортоацетил- P — 0-маннопиранозой, в ацетилировании полученного30 продукта уксусным ангидридом, в снятии маннопиранозной группы кислотным гидролизом, в конденсации полученного пента-0-ацетата-5и-миоинозита с фосфатидиловой кислотой в присутствии триизопропилбензолсульфохлорида, в снятии ацетильных защит гидразинолиэом И3.

Недостатком указанного способа синтеза монофосфоинозитидов является его многостадийность (8 стадий), что снижает препаративные возможности способа.

Целью изобретения является упрощение процесса.

Указанная цель достигается описываемым способом, заключающимся во взаимодействии миоинозита с циклогексаном в присутствии И -толуолсульфокислоты, полученный 1/3/,2:5,6 (4)-ди-О-циклогексилиден-Sh-мионозит подвергают взаимодействию с

3,4,б-три-О-ацетил-1,2-этилортоацетилD -маннопиранозой в дихлорэтановом растворе в присутствии

И -толуолсульфокислоты с образованием 3,4,б-три-О-ацетил-1,2-0†(2,3:4,5-ди-О-циклогексилиден-5и-миоинозит-б-ортоацетил) — и†1 -ман740740 нопиранозы, которую затем конденсируют с фосфатидиловой кислотой формулы (II) CH ООСС

2 П

Сп".мсООС Н а

/l и

СН ОР-QP

OH в пиридине в присутствии 2, 4, б-триизопропилбензолсульфохлорида, с последующим удалением защитных группйровок полученного производного монофосфоинозитида кипячением с

ВОЪ-ной уксусной кислотой, .

Пример. 1/3/,2:5,6/4-ди-О-циклогексилиден-5п -миоинозит.

Смесь 25,00 г миоинозита в 250 мл циклогексанона и 65 мл бензола нагревают в присутствии и -толуолсульфокислоты с водоотделителем ДинаСтарка. После выделения 8 мл воды рЕакционную смесь фильтруют, фильтрат промывают 1,5 н. раствором аммиака (34x50), добавляют 0,25 г углекислого натрия и смесь перегоняют с водяным паром, остаток воды удаляют бенэолом.Получают смесь 1/3/2:4/б/5-g

1/3/,2:3/1/4/б/ и 1/3/,2:5,6/4/--дикеталей миоинозита, которые раст-.. воряют в 100 мл четыреххлористого углерода и оставляют кристаллизоваться. Осадок отделяют, маточный раствор упаривают, остаток растворяют в хлороформе и хроматографируют на колонке с окисью алюминия ЕЕ степени активности. Системой хлороформ— этиловый спирт (1:1) вымывают смесь оставшихся дикеталей инозита, которую повторно хроматографируют на колонке с силикагелем, элюируя 1/3/,2:

5,6/4/-ди-О-циклогексилиден Sn-мноинозит (а) системой хлороформ ацетон (94:б). После кристаллизации из смеси бензол-петролейный эфир (70-100 С, 2:3) . получают 8,45 r (18,1%) соединения A с т, пл. 132133 C, y - О, 36 (силикагель, бензолацетон, 7:3).

3,4,6-Три-О-ацетил-1,2-0-(2,3:4,5-ди-О-циклогексилиден-Stl-миоинозит-б-орто-ацетил) — P3 — Э -маннопираноза.

Раствор О, 475 г дикеталя A u

1,05 r 3,4,б-три-О-ацетил-1,2-этилортоацетил-(Ъ вЂ” D --маннопиранозы в

15 мя дихлорэтана кипятят в аппарате Сокслета, загруженном 2 г молекулярных сит типа 4А, 10-15 мин.

Затем в реакционную смесь вводят

0,0103 г )) -толуолсульфокислоты и продолжают кипятить 3,5 ч в тех же условиях. После окончания реакции добавляют несколько капель пиридкна и упаривают. Остаток (1,5 r) разделяют методом препаративной õðîматографии на окиси алюминия ЕЕ степеки активности в системе хлороформ50

55 бО б5

Раствор 0,19 г защищенного монофосфоинозитида Г в 15 мл 80%-ного водного раствора уксусной кислоты нагревают при .%ипении.в течение 4 и °

Растворители упаривают, к остатку добавляют 3 мп смеси спирта.и хлороформа (3:1), добавляют 4 н. водный раствор аммиака до рН В,О, После удаления растворителей аммонийная соль фосфатидилинозита переосаждается 5 мя ацетона из 1 мл хлороформа. Выход 0,06 г (47, 6%) . т. пл. Д + 23,2 (с-0,25, хлороформ-метиловйй спирт- 4 н. N Н4.ОН, 9: 7: 2) .

Найдено,Вг С 60,81; Н 11,08;

N 1,47; P 3,36.

С Н Р„ КР., -ацетон (9: 1), Из фракции с К -0,27 выделяют 0,206 г (24,6%) 3,4,б-три-О-ацетил-1, 2-0-/2, 3: 4, 5-ди-О-циклогексилиден-5И-миоинозит-6-ортоацетил/- )Ъ -D -маннопиранозы (В) с т ° пл. 172-174 С (из эфира), + 2, О С (с-0,5, хлороформ) °

1-0-(1,2-Ди-О-стеароил-5п-глицерил-3-О-фосфорил) -2,3,:4,5-ди-О-циклогексилиден-б-(3,4,б-три-О-ацетил- Р1Π— D -маннопиранозил-1,2-ортоацетил)—

-5и-миоинозит.

Раствор 0,62 r 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида, 0,91 г ортоэфира В в 10 мл пиридина перемешивают 30 мин при 18-20 С. Затем добавляют 0,48 г 1,2-ди-О-стеароил— 5n-глицерин-3-О-< осфорпой кислоты.

Т,пл. 67-68 С, сй + 4,5. Нагревают

1 мин при 60 С до полного растворения и продолжают перемешивание

12 ч при 18-20 С. После этого к реакционной массе добавляют 17 мл хлороформа и перемешивают 1,5 ч. В конце этого периода приливают 5 мл воды, перемешивая смесь 10 мин, 25 Отгоняют растворители,остаток разделяют с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя защищенный фосфатидилинозит смесью хлороформа с метиловым спиртом (97:3). После

3П (упаривания растворителя и кристаллизации из ацетона получают 0,54 г (60,63) 1-0- (1,2-ди-О-стеароил-Sh- глицерил-3-О-Фосфорил) -2, 3; 4, 5-ди.—.О-циклогексилиден-б- (3, 4, б-три-О-ацетил- f5 — I) -ман нопиранозил-1, 2-ортоацетил) -5 -миоинозита (1) с т. пл. 38-40,ЫЭ+ 6,57,Щ +12,48 (с()2„+ 13,14,$ 3 + 15, 77 (c-О, 35, хлороформ). R 4,39 (бензол-ацетон, 440 7Ф 3)

Найдено,В:,С 61,65; Н 8,43; P 2,86.

Вычислено,%: С 62,06; Н 8,96;

P 3,01.

Аммонийная соль 1-0-/1,2-ди-О-стеа45 роил- 5п -глицерил- 3-О-фосфорил-5п-миоинозита.

740740

Формула изобретения

Составитель Л. НикУлина

Редактор Н. Потапова Техред Н.Бабурка

Корректор N. Вигула

Подписное

Заказ 3147/29 Тираж 495

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

11 3035, Москва, Ж-35, Рауыская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Вычислено,%: С б1,12; Н 10,2бу

Н 1,58; P 3,50.

Способ получения аммонийной соли монофосфоинозитида общей формулы (1) Ои Он

И

-Р-0-CH

3 2

Он н 0 Pg QQGG H» -

1т ЗВСи -аОСО„„Н на основе миоинозита, о т л и ч щийс личающ с я тем, что, с целью упрощения процесса, исходный миоинозит обрабатывают циклогексаноном в присутствии п-толуолсульфокислоты, полученный 1/3/,2:5,6/4/-ди-О-циклогексилиден-бп-миоинозит подверга- 20 ют взаимодействию с 3,4,б-три-О-ацетил-1,2-этил-орто-ацетил-.Я-Р-маннопиранозой в дихлорэтановом растворе в присутствии и-толуолсульфокислоты с образованием 3,4,6 три- 25

-0-ацетил 1,2-0--(2,3:4,5-ди-О-циклогексилиден-%-миоинозит-б-орто-аце- тил) - P — В -маннопиранозы, которую затем конденсируют с фосфатидиловой кислотой формулы (II) col OOCC„H ,, 5СООСН П я

И снсрр д

OH в пиридине в присутствии 2,4,6-триизопропилбензолсульфохлорида, с последующим удалением защитных группировок полученного производного монофосфоинозитида кипячением с

80%-ной уксусной кислотой.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Лютик A.È., Садовникова M.Ñ., Швец В.И., Евстигнеева P.Ï. Исследования в области .производных асимметрично замещенного миоинозита. ХХХ, Синтез моно- и дифосфоинозитидов . ЖОХ, 44, 2573 (1974) прототип.