Способ определения количества извлекаемого аденозинтрифосфата из почвы

 

Г аешь 1 йлтеь,,„. А)4

ОПИСАН

ИЗОБРЕТЕНИЯ

ММюетена

И Е

Союз Советскик

Социалистических

Республик

« >791771

К АВТОРСКОМУ СВИ ВТИЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 10 . 10 . 78 (21) 26 7264 5/30-15 с присоединением заявки Й9(23) Приоритет—

Опубликовано 3012,80, Бюллетень Но 48

Дата опубликования описания 30.12. 80 (51)М. Кл 3

С 12 Q 1/00

С 12 М 1/00

Государственный комитет

СССР. но делам изобретений н открытий (53) УДК 576.8:631..46 (088.8) (72) Авторы изобретения

С. И. Аксенов, Л. Н. Анисимова, И. В. Асеева и В. Е. Зайцева

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. N . В . Ломоносова (7() Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ИЗВЛЕКАЕМОГО

АДЕНОЗИНТРИФОСФАТА ИЗ ПОЧВЫ изобретение относится к почвенной микробиологии и биохимии, в частности к определению содержании аденозинтрифосфата в почвах.

Известен способ определения количества извлекаемого аденозинтрифосфата из почвы, включающий внесение навески аденозинтрифосфата в почву с

ПО1=ЛЕДУЮЩЕй ЭКСтракцией И ОПрЕДЕЛением аденозинтрифосфата в экстракте по люциферин-люциферазной реакции f1/ .

Для этого в природные субстраты . (глину, песок и т.д.) вносят раствор аденозинтрифосфата, экстрагируют аденозинтрийосфат серной кислотой и за- 15 тем определяют количество извлекаемого аденозинтрифосфата.

Недостатком известного способа является невысокая точность определе- 20 ния аденозинтрифосфата, а также невозможность применения способа для определения количества извлекаемого аденозинтрифосфата (АТФ) из почв из-за разложения части внесенного

АТФ в почве.

Цель изобретения — повышение точности определения извлекаемого аденозинтрифосфата. 30

Поставленная цель достигается тем, что навеску вносят в почву в виде лиофилизированных культур микроорганизмов с известным количеством аценозинтрифосфата, перемешивают и обрабатывают кипящей водой в течение

1-2 с.

Сущность предлагаемого способа заключается в следующем.

К навеске почвы 100 мг добавляют навеску лиофилизированной культуры микроорганизмов (дрожжей или бактерий), содержащую 1-3 мкг аденозинтрифосфата. Затем аденозинтрифосфат экстрагируют 4-5 мл кипящей воды, центрифугируют полученный раствор и в супернатанте определяют аденозинтрйфосфат по люциферин-люциферазной реакции . Выход адейозинтрифосфата определяют с введением поправочного коэффициента по формуле

Х=В:к, где Х вЂ” выход АТФ с учетом поправочного коэффициента; к — поправочный коэффициент, равный (а - 6У /С, а — количество АТФ в почве с внесенной культурой;

791771

Формула изобретения

Составитель М. Мирзаев

Техред T.Ìàòo÷êà Корректор И.Муска

Редактор Н. Спиридонова Заказ 9400/25 Тираж 522 Подписное

ВНЙИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. /

4/5

Филиал IIIIII "П тент" г. Ужгород, ул. Проектная, а в - количество АТФ в почве без . учета коэффициента с - количество АТФ, внесенное в почву в виде лиофилизированной культуры .

Пример 1. К 100 мг почвы

5 (вышелоченный чернозем) добавляют

1 мл раствора ATC в концентрации

1 мкг/мл. Затем добавляют 4-5 мл кипящей воды и выдерживают 2 с„извлекают ATC и определяют люциферин-люциферазным методом . Параллельно опреде- 10 ляют АТФ в почве. Количество АТФ составляет соответственно 0,32 и

0,30 мкг/г, т.е.. в почве произошел практическИ полный распад внесенного

АТФ, поправочный коэффициент в данном 3$ случае равен единице. Следовательно, известный способ определения АТФ в субстрате не может быть применен для оценки количества извлекаемого аденозинтрифосфата из почвы. 20

Пример 2. К 100 мг почвы (выщелоченный чернозем) прибавляют лиофилизированную культуру бактерий содержащую 1 мкг . АТФ. Д::.Лее все операции проводят как в пример 1, тол ко в кипящей воде навеску выдерживают 1 с.

Количество выделенного АТФ из почвы с культурой составляет 0>9 мкг,а содержание АТФ в черноземе — 0,3 мкг.

Поправочный коэффициент, рассчитанный по приведенной выше формуле, ра- 3

30 вен О,б, а содержание АТФ в чернозеМе с учетом поправки — 0,5 мкг, вместо

О, 3 мкг.

Пример 3. К дерново-подзолйстой почве (100 мг) добавляют лиофилизированную культуру дрожжей в количестве 3 мкг, выход АТФ равен 0,13 мкг а после введения поправочного коэффициента, равного 0,8-0,16 мкг.

Таким образом, при внесении в почву аденозинтрифосфата в виде лиофилизированных культур микроорганизмов точность определения аденозинтрифос-. фата повышается на 20-40%.

Способ определения количества из-. влекаемого аденоэинтрифосфата из почвы, включающий внесение навески аденозинтрифосфата в почву с последую- щей экстракцией и определением аденоэинтрифосфата в экстракте по люциферин-люциферазной реакции, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности определения, навеску вносят в почву.в виде лиофилизированных культур микроорганизмов с известным количеством аденозинтрифосфата, перемешивают и обрабатывают кипящей водой в течение 1-2 с.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе, 1. Ausmus В.. The use of the АТР, assay in Terrestrial Decomposition

Studies, Bul l . Ecol. Res. Comm

223-234. 1973 .