Патент ссср 826744

 

ВАКЦИНА ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ, содержащая антигенную жидкость из суспензии клеток желточного мешка куриного эмбриона,зараженного хламидиями, отличающаяся тем, что, с целью усиления иммуногенных свойств, она дополнительно содержит раствор тригидрооксиметиламинометана и тетраметилдиамина, раствор акриламида и метилбисакриламида, растворперсульфата аммония и раствор глютарового альдегида при следующем соотношении компонентов, мл: Антигенная жидкость из 20-40%-ной суспензии желточных мешков, зараженных хламидиями (ЭЛД^^-Ю-^'^'^Я ) 8-10 Смесь растворов тригидрооксиметиламинометана (36,3%-ного с тетраметилдиамином

„.SU.„744 А

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

3(Ю С 12 N 5/00 A 61 К 39 118

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

I . ° С ..б

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 2542393/30-15 (22) 09.11.77 (46) 23.03.84. Бюл. Р 11 (72) И.A.Êóðáàíoâ, Р.Х.Юсупов, P.Â.Áîðoâèê, Т.Г.Габдулхаев и И.A.Êóðáàíîâà (71) Казанский ордена Ленина государственный ветеринарный институт им. Н.Э.Баумана (53) 616.998.1:615.371.372 (088.8) 1-2 (54)(57) ВАКЦИНА ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ, содержащая антигенную жидкость из суспензии клеток желточного мешка куриного эмбриона, зараженного хламидиями, отличающаяся тем, что, с целью усиления иммуногенных свойств, она дополнительно содержит раствор тригидрооксиметиламинометана и тетраметилдиамина, раствор акриламида и метилбисакриламида, раствор персульфата аммония и раствор глютарового альдегида при следующем соотношении компонентов, мл:

Антигенная жидкость из

20-40%-ной суспензии желточных мешков, зараженных хламидиями (ЗЛЯ 10 ) 8-10

Смесь растворов тригидрооксиметиламинометана (36,3%-ного с тетраметилдиамином (0,23%-ным) 1-2

Смесь растворов акриламида (30%-ного с метилбисакриламидом (0,8%-ным) 3-4 ф

1,4%-ный раствор персульфата аммония

25%-ный раствор глютарового альдегида с„ до конечной концентрации 0,05% 0,026-0,038 Я

826744

Для этого вакцина дополнительно содержит раствор тригидрооксиметил25 аминометана и тетраметилдиамина, раствор акриламида и метилбисакриламида, раствор персульфата аммония и раствор глютарового альдегида при следующем соотношении компонентов, Антигенная жидкость из

20-40о-ной суспензии желточных мешков, зараженных хламидиями (ЭЛД, 10, 8-10

Смесь растворов тригидрооксимет лламинометана (36, ЗЪ-ного) с тетраметилдиамином (0,23Ъ вЂ” ным) 1-2 40

Смесь растворов акриламида, ЗОЪ вЂ” ного) с метилби сакриламидом (0,8Ъ вЂ” ным)

1,4Ъ-ный раствор 45 персульфата аммония 1-2

25Ъ-ный раствор глютарового альдегида до конечной;<онцентрации 0,05Ъ О, 026-0, О 38 50

1. Приготовление растворов.

3-4

"А" — к 48 мл однонормальна го раствора соляной кислоты добавляют

36,3 г тригидрооксиметиламинометан (СН )2 N(CH2)„ N(Ñi )2, 0,23 мл

ТЭИЭД (тетраметилэтилендиамин)

Н i;2 (- .,O-.i) и доводят до 100 мл стерильной дистиллированной водой с рН 8,9.

"C" — ЗО г av:риламида (CH ".H

С0 . Н2! и О, 8 г метиленбисаркриламида (".i: > ., Н, CO. Ч:, СН,)астворRâò в сTåðèëüHoé диcтиллирoâàííî)I воде до 10 О мл .

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к вакцинам против хламидийных инфекций сельскохозяйственных животных.

Известна вакцина для специфической профилактики хламидийного энзоотического аборта овец, включающая антигенную жидкость из суспензии клеток желточного мешка куриного эмбриона, зараженного хламидиями.

B качестве инактиватора применен 10 формалин, а в качестве адъюванта минеральное масло.

Однако при вакцинировании животных вакциной, специфические антитела вырабатываются в очень низких 15 титрах (1: 8-1: 16), вакцинированные животные не обладают иммунологической защитой при заражении на резистентность живым возбудителем хламидий.

Целью изобретения является повышение иммуногенной активности вакцины и пролонгирования ее действия.

Растворы "А" и "С" стабильны в течение месяца, если хранить при

+5 С, 1,4Ъ-ный раствор персульфата аммония, например 10 мл аммониЯ надсернокислый — (NHg)7 .">20Q — 140 мп.

Рабочий раствор мертиолята готовят растворением 1 г мертиолята в

100 мл дистиллированной воды.

Пример 1. Желточные мешки куриных эмбрионов, зараженных возбудителем хламидийных инфекций, подвергаются определению титра возбудителя заражением в желточный мешок

6-7 дней куриных эмбрионов. Опытным путем установлена высокая иммуногенность вакцины, приготовленной из инфицированных желточных мешков куриных эмбрионов с титром хламидий »>A (эмбрион летательных доз)

1065-,0

Желточные мешки куриных эмбрионов, инфицированные хламидиями с укаэанным титром, суспендируют в пределах до 20-40Ъ на стерильном буферном растворе Хениса, или 0,2 М фосфатном буфере, или физрастворе с рН 7,6 — 7,8.

Полученную взвесь отстаивают при температуре +4 С в течение 2 ч. Надосадочную часть отсасывают стерильнойпипеткой и переносят в стерильную колбу.В надосадочную антигенную жидкость вводят раствор мертиолята до 0,1Ъ и инактивируют о антиген в термостате при +37 С в течение 10-14 ч.

Антиген полимеризуют путем последовательного добавления к 80-100 объемам растворов "А" 10-12 мл, "С" 3 0-40 мл, 1,4Ъ-ного раствора персульфата аммония

10-12 мл, 25Ъ-ного раствора глютарового альдегида до конечной концентрации в антигенной жидкости 0,05Ъ.Смесь растворов с антигеном после тщательного смешивания ставят в холодильник при +4

+ 6 C на 16-18 ч или 2-3 ч в термоо стат при +37 С.

Полимеризованную вакцинную массу в олиакриламидном геле перед употреблением гомогенизируют в гомогенизаторах или коллоидных мельницах (или других приспособлениях) с равным объемом раствора Хенкса или стерильного физиологического раствора (рН 7,2 — 7,4) до кашицеобразной консистенции, способной проходить через инъекционную иглу, Пример 2. Проводят перекрестные опыты по установлению минимальных и предельных объемных частей (в ьж ) компонентов при конструировании вакцины с последующим определением в каждом опыте иммуногенной активности полученной вакцины.

С этой целью определяют объемные дозы антигенной жидкости из 20

40Ъ-ной суспензии инфицированных

826744

1-2

Корректор A.Ильин

Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 2363/2

Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная,4 желточных мешков, смеси растворов

"А", "С", 1,4Ъ-ного персульфата аммония с добавлением глютарового альдегида до конечной концентрации 0,05%.

Иммуногенную активность вакцин определяют по титру комплементсвяэывающих антител в сыворотке крови и отсутствию клинических признаков болезни вакцинированных подопытных животных (белые мыши и овцы) после эаражейия их живым возбудителем хламидий.

Установлены максимальные титры антител (1:64 — 1:128) на 4-8-е сутки после иммунизации подопытных животных вакцинами, конструированными при следующем соотношении компонентов мл;

Редактор О. Юркова Техред A. Бабинец

Антигенная жидкость из 20-40%-ной суспензии желточных мешков, зараженных хламидиями (ЗЛД 10 ) 8-10

Смесь растворов тригидрооксиметиламинометана (36,3Ъ-ного) с тетраметилдиамином (0,23%-ным)

Смесь растворов акриламида (30%-ного) и метилбисакриламидом (0,8В-ным) 3-4

1,4-ный раствор персульфата аммония 1-2

253-ный раствор глютарового альдегида до конечной концентрации 0,05а 0 026