Способ определения аспарагина
0 П И С А Н И Е-: fff!827544
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 28.06.79 (21) 2785109/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 07.05.81. Бюллетень № 17 (45) Дата опубликования описания 07.05.81 (51) М. Кл.
С 12Q 1/02
Государстеениый комитет
СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 547.466.63:
:576.8.093 (088.8) (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АСПАРАГИНА
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу определения аминокислот, и в частности аспарагина, в различных исследуемых объектах, например в почвах, в растительных 5 тканях, в культуральной жидкости при производстве аспарагина, в сточных водах при его производстве и т. д.
Известны многочисленные методы опре- 10 деления аминокислот, в частности аспарагина. Наиболее широко применяется хроматографический метод определения аминокислот (1).
Этот метод достаточно точен, но трудо- 15 емок, требует больших затрат времени, реактивов и высокого профессионального уровня. Кроме того, в один прием невозможно проанализировать большое количество образцов. Невозможно также опре- 20 делить аспарагин непосредственно в исследуемом материале без нарушения целостности вещества.
Известен микробиологический способ определения аминокислот, который преду- 25 сматривает введение исследуемого образца в суспензию чувствительной культуры микроорганизма, не растущей в отсутствии аминокислот, инкубирование с последующим определением по наличию зоны роста 30 вокруг исследуемого материала аминокислот и их концентрации в материале (2).
Однако такой метод требует получения мутантов и постоянной селекции штаммов для поддержания потребности в определенной аминокислоте, а также более длительной инкубации, например в случае применения микромицета или медленнорастущих бактерий в качестве тест-объектов.
Целью изобретения является упрощение способа и возможность определения аспарагина в природных нестериллизованных материалах.
Поставленная цель достигается тем, что в качестве тест-культуры используют микроорганизмы вида Pseudomonas lemonnieri, а определение аспарагина проводят по диаметру образующегося синего цвета пигментного кольца вокруг исследуемого образца.
Присутствие аспарагина в среде индуцирует пигментообразование таким образом, что имеется прямопропорциональная зависимость пигментообразования от количества аспарагина в образце в пределах концентраций аспарагина 0,05 — 0,005 г/г.
Способ определения аспарагина состоит в следующем. Если исследуемый материал твердый, его измельчают, слегка увлажняют и определенное количество его помеща827544
Ъ
1 з
И ь
О
Ъ
Составитель М. Ларина
Редактор Т. Зубкова
Техред Л. Куклина
Корректор Н. Федорова о,гХ ют в суспензию культуры Pseudomonas
lemonnieri. Через сутки на определенном расстоянии от исследуемого материала образуется синего цвета пигментное кольцо за счет диффузии аспарагина в агаризо- 5 ванную среду, и оно тем больше, чем больше аспарагина содержится в навеске испытуемого материала (см. чертеж).
Пример 1. Для обнаружения аспарагина в почвах или других материалах 10 (почве, лесной подстилке, компостах, растительных тканях) навеску материала в 1 г при содержании аспарагина не менее
0,005 г/r образца помещают в суспензию односуточной культуры Pseudomonas lemon- 15
nieri на глюкозо-минеральной агаризованной среде: агар 2%, К2НР04 0,05 /о, глюкоза — вода водопроводная. После введения навески чашки Петри выдерживают в течение 3 ч при 10 — 12 С для предотвраще- 20 ния роста тест-культуры до начала диффузии аспарагина из навески в агаризованную среду. Спустя указанное время производят инкубирование посева при 25 С. Через 24 ч образуется пигментный круг, диа- 25 метр которого находится в соответствии с количеством аспарагина в среде.
Пример 2. Для обнаружения аспарагина в растворе, например в культуральной жидкости, при получении аспарагина кап- 30 лей раствора (0,05% К НР04) увлажняют фильтровальный диск диаметром 1 см и вводят в суспензии односуточной культуры
Pseudomonas lemonnieri и далее поступают так же, как в примере 1. 35
Предлагаемый способ позволяет определять аспарагин в различных нестерилизованных материалах, таких, как почва, лесо 40
1 о г0
1
Р г0 1 1 4 /0 оооо оа ооо аоо оою а о
Нонцентрацил аслардгика, г/г субстрата ная подстилка, компосты, растительные ткани, культуральная жидкость при производстве аспарагина, сточные воды от производства последнего. При этом способ может быть использован при определении аспарагина в различных природных нестерилизованных объектах с целью не только качественного, но и количественного определения и позволяет наблюдать накопление и разложение аспарагина в любом из указанных природных материалов.
Кроме того, предложенный способ может быть использован в микробиологической промышленности для контроля за содержанием аспарагина в культуральной жидкости, а также для контроля за содержанием аспарагина в отходах производства.
Фор м ул а изобретения
Способ определения аспарагина в исследуемом образце путем введения его в суспензию тест-культуры и последующего инкубирования, отл и ч а ющий с я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве тест-культуры используют микроорганизмы вида Pseudomonas lemonnieri, а определение аспарагина проводят по диаметру образующегося синего цвета пигментного кольца вокруг исследуемого образца.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Майстер А. Биохимия аминокислот.
1961, с. 39.
2. Рубан Е. Л., Вербина Н. М. и др. Биосинтез аминокислот микроорганизмами, М., Наука, 1968, с. 133 — 136 (прототип).
Заказ 905/12 Изд. № 307
Тираж 530 Подписное
НПО <<Поиск»
Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
