Способ диагностики е-гиповитаминозау птиц

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (iu829100 (6I ) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено01.12.75 (2! ) 2310486/30-15 (51)M. Кл.

А 61 В 10/00//

G 01 N 33/48 с присоединением заявки ¹

Гасударстееиимй комитет

СССР (23) П риорнтет ло делам изобретений и uTKpblTHII

Опубликовано 15.05 81 Бк1ллетень ¹ 18 (53 ) УДК 6 L 6.39 1-6 16-07 (088.8) Дата опубликования описания 15.05.81 са

1 (72) Авторы изобретения

П, И. Войтов и E. М. Кожевников

1 г

Всесоюзный научно-исследовательский институт незаразных болезней животных (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ E-.ÃÈÏÎÂÈÒÀÌÈÍÎÇÀ У ПТИЦ

Изобретение относится к ветеринарии и может быть применено для диагностики Е-гиповитаминоза птиц непосредственно в птицеводческих хозяйствах.

Известен способ диагностики E-гийовитаминоза у птиц путем прямого определения содержания витамина Е в органах и тканях. биологических объектов посредством .экстракции витамина жирорастворителями с последующим спектрографированием и хромотографированием jl).

Однако эти методы очень сложны, трудоемки, требуют использования дорого"стоящего оборудования и дефицитных реактивов, а -при исследовании витамина

E в крови молодняка птиц необходимо

10-12 цыплят на один анализ, поэтому они не нашли применения в птицеводческой практике.

Наиболее близким к предлагаембму является способ диагностики Е-гиповитаминоза, основанный HB косвенном определении E-витаминной недостаточности у животных, путем определения резистентности эритроцитов к гемолитическому действию диалуровой кислоты $2) .

Основными недостатками данного косвенного определения E-витаминной недостаточности :является то, что в реакции в качестве гемолитика применяется диалуровая кислота, растворы которой должны использоваться только свежеприготовленными, так как в растворах, хранящихся более 24 ч, диалуровая кислота разлагается, отчего теряется ее гемоли тическое свойство, что приводит к большому расходованию диалуровой кислоты.

Стоимость 1 кг диалуровой кислоты (ТУ 16П-357-68) 1600 р, что удорожает диагностику. Кроме того, реакция гемолиза эритроцитов с диалуровой кислотой осуществляется в сложном фосфатно-буферном растворе, требующем постоянного поддержания кислотности на одном уровне, а это увеличивает продолжительность исследований и количест во используемых реактивов.

Бель изобретения — сокращение сро ков исследований и упрощение способа, а также снижение затрат на осуществление способа.

Поставленная цель достигается том, что в способе определения Е-гиповитаминоза у птиц, заключающемся в прове-.. дении гемолиза эритроцитов для определения их резистентности к действию гемолитического фактора, для проведения ге- 10 молиэа используют О, 007-0,01%-ный раствор лимонной кислоты, а эритроциты перед гемолизом разбавляют физиологическим раствором.

Благодаря предложенному способу поя-. 5 вилась возможность заменить сложный фосфатно-буферный раствор физиологическим раствором, при этом отпала необходимость в постоянном поддержании кисло ного равновесия растворов.

8291 а-в 100 гемолиз б-В

0,03-0,012 ° 100

5,3

0,35-0, 012

Гемолиз = а — в 1 00 б — в

5-О G1 100 — 5 3 о, 0,29-G, 01

Реакцию гемолиза эритроцитов предложеHHbIM способом проводят на клинически здоровых птицах (150). Одновременно на этих же птицах проводят параллельные исследования с диалуровой кис40 нотой. B обоих реакциях используют

0,007-0,01 %-ные растворы кислот и получают одинаковые результаты, что в конечном итоге подтверждает надежноность, простоту и эффективность данного

45 изобретения. Результаты исследований сведены в таблицу.

0,01 0,02 0,11 0,015 5,2

0,01 0,021 0,1 15 0,016 5,1

0007 0009 014 0005 29 0007 001 015 0006 27

0,008 0,013 0,17 70,01 1 90,,008 0,,015 0,175 0,012 1,8

Способ определения Е-витаминной недостаточности осуществляется следуюп им образом.

Свежевзятую кровь птиц разбавляют физиологическим раствором, гемолизируют 0,007-0,01%-ной лимонной кислотой и инкубируют в термостате 1 ч при 39-41оС, центрифугируют 8 10 мин. при 1500-2000 об/мин и колорийетрируют на ФЭК.

Пример 1 . В центрифужную пробирку, содержащую 3 мл физиологическсго раствора, добавляют 0,03 мл крови птиц, взятой иэ подкрыльцовой вены. Осторожно смешивают до однородной взвеси эритроцитов и переносят по 1 мл в 3 пробирки. B 1-Ic и 2-ю пробирки добавляют 1 мл 0,01%-ный раствор лимонной кислоты, в 3-ю пробирку 1 мл фиэиолотического раствора и выдерживают 1 ч в термостате при 39-41 С, затем 30 мин при комнатной температуре. После этого в 1-ю и 3-ю пробирки добавляют по 3 мл физиологического раствора, в !

00 4

2-ю пробирку — 3 мл дистиллированной воды. Содержимое каждой пробирки осторожно перемешивают и центрифугируют

8-10 мин при 1500-2000 об/мин. Недостаточную жесткость каждой пробирки колооиметрируют на ФЭК при светофильтре %3 (длина волн 415-420 ммк ).

Гемолиз в и ропе нтах вычисляют по формуле где а — показание Ф Я, в пробирке

1 - 0,03, б — -"«2 = 0,35, в - -"- 3 = 0012.

Гемолиз эритроцитов выше 10 % сигнанализирует о дефиците витамина E.

Пример 2 . Исследования проводят по примеру 1, но дополнительно в качестве раствора используют фосфатнобуферный раствор, в виде гемолитика — диалуровую кислоту.

Продолжение табл

829100

О 09 0018 022 0013 24 0009 0017 02 0012 2 6

0,01 0,02 0,098 0,016 - 4.8 0,01 0,021 0,1 0,017 4,7

Составитель Л. Мурая

Редактор N. Недолуженко Техред E.Ãàâðèïåøêî Корректор С. Шомак

Заказ 2 6 12/2 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Предлагаемый способ диагностики

Е-гиповитаминоза у птиц с использованием гемолиза эритроцитов лимонной кислоты обеспечивает по сравнению с известным способом следующие преимушества: сокрашает время исследования в 2 раза, что позволяет в течении 8 ч одному исследователю провести экспрессдиагностику E-гиповитаминоза у 6-7 стадах птиц (60-70 анализов); замена реактивов и растворов делает реакцию более простой и доступной для применения в птицеводческой практике, сокращает затраты при исследовании одной nTBIlbl в 200 раз, что имеет большое экономя»ческое значение.

Так, при исследовании 1 пробы крови с диалуровой кислотой, затраты coctBBHg» ют 20 коп, тогда как при исследовании одной пробы крови с лимонной кислотой

- 0,1 коп.

В птицеводческом хозяйстве среднего размера, для одноразового определения

Е-витаминной обеспеченности проводят как минимум 350-400 анализов. B течении года такую профилактическую диспансеризацию в бройлерных хозяйствах проводят не менее 24 раз и 12 раз в хозяйствах яичного направления, что составляет 9-10 тыс. исследований для бройлерного хозяйства и 4-5 тыс. исследований для хозяйства яичного направлеФ ния. Затраты на реактивы при исследоваИ нии птиц с помощью диалуровой кислоты в одном бройлерном хозяйстве составляют 1800-2000 р; и 900-1000 р в хозяйстве яичного направления; в то время как при исследовании птиц предлог женным методом соответственно 9-10 р и 4-5 р. р Формула изоб ре те ния

Способ диагностики Е-гиповитаминоза у птиц путем проведения гемолиза эритроцитов для определения их резистентности к действию гемолитического фактора, о т r, и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, для проведения гемолиза используют

0 007-0 ОЦ-ный раствор лимонной кисло-ты, а эритроциты перед гомолизом раз3S бавляют физиологическим раствором.

1 %

Источники инфсрмации, . принятые во внимание при экспертизе

1. Биохимия и физиология питания жи49 вотных. Рига, 1972, с. 11-. о

2.МпЧЕММ E.E.. Иет 0Ч5Ы а% ИчНаа смФев &от чМат т Е-Ае с атй ЫсМпв. -" 9 ос.Ь ттМса о 5 ophvМCo", Acta. Я76, ч06,2.0 >M=3,р.55Ь.