Способ подготовки молока дляопределения дизентерийного антигена

 

О П И С А Н И Е ()833259

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ .СВИДЕТЕЛЬСТВУ

CoIo3 Свввтскми

Семмвимстмчвскмк

Рвстгублмк (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 22.01.79 (21) 2718792ф8-13.(51) М. Кл.з

А 61 К 39/112 с присоединением заявки №вЂ”

Веударвтавей кеаитет

СССР

N 4935N 136ф4ивий и втиумтва (23) Приоритет—,(53) УДКа616-О? (088.8) Опубликовано 30.05.81. Бюллетень № 20

Дата опубликования описания 31.05.81 (72) Авторы извбретеиия

А; М. Минеев и Н. Н. Расстегаева

Горьковский медицинский институт им. С. М. К (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ МОЛОКА

ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИЗЕНТЕРИИНОГО АНТИГЕНА

Изобретение относится к микробиологии, а именноксеродиагностике, и может быть. использовано в медицине, эпидемиологии.

Известен способ подготовки молока для определения дизентерийного антигена путем сбраживания молока, прогрева и фильтра ции сыворотки с последующей постановкой с фильтратом реакции непрямой гемаггл инации (1). нако известный способ является недостаточно чувствительным и не позволяет во многих случаях на практике получать положительные или достаточно четкие результаты специфической реакции дизентерийного антигена с, антительным диагностикумом вследствие присутствия в фильтрате сыворотки молока примесей белка, которые вызывают неспецифическую агглютинацию эритроцитов антительного диагностикума.

Цель изобретения — повышение чувствительности определения.

Поставленная цель достигается тем, что в способе подготовки молока для определения дизентерийного антигена путем сбражи вания молока, прогрева и фильтрации сыворотки с последующей постановкой с фильтра-!

2 том реакции непрямой гемагглютинации. сбраживание ведут с помощью 1%-ного раст- вора сычужного фермента и сыворотку. фильтруют под давлением 6 — 8 атм.

Пример. К 5 мл молока добавляют О,1мл .1%-ного сычужного фермента и термостатируют при 37 С в течение 20мин. Полученную сыворотку прогревают при 100 С 20 мин и фильтруют через уплотненную асбестовую вату при давлении? атм. В лунку поаистироловой пластины помещают 0,5 мл полученного фильтрата, добавляют 2 кап ли антительиого диагностикума, встряхивают пластину и оставляют ири комнатной гемпературе. В случае наличия дизентерийного антигена специфическую агглютинацию эритроцитов аитительного диагностикума наблюдают уже через Зч, окончательный результат получают через 18 ч.

Для контроля специфичности реакции параллельно с реакцией непрямой гема— глютинации ставйт реакцию задержки гамагглютинации.

Результаты определения дизентерийного антигена в пробах искусственно зараженного молока известным способом и предлагаемым приведены в таблице.

833259

Известный

Предлагаемый

Доза заражения молока, м.кл. /

М/мл

Количество полоКоличест- Количество отриво поло- цательных режительных зультатов за

РНГА, Ж счет неспецифических реак1 цийа Ж

Количество отрицательных результатов за счет неспецифических реакций, Т жительных

РНГА, 7.

18

100

5 10

100

79

100

2 10

16

l ° 10

20,Ж

Иикробные клетки.

Формула изобретения

Составитель С. Малютин

Редактор В, Пса) аш Техрел А. Бойкас Корректор Г. Решетник

Заказ 3845/4 . Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР но делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Длительность одного ойределения (по предварительным результатам) известным и предлагаемым способами составля ет соответственно 51 и 4 ч.

Из данных таблицы следует, что извест ный способ определения дизентерийного ан. тнгена в молоке и молочных продуктах дает воэможность обнаружить наличие .дизентерийного антигена лишь в 80о вслучаев даже при больших концентрациях возбудителя (10 -2.10 м.кл/мл) за счет наличия неспецифических реакций, вызванных присутствием белков в сыворотке молока и гемолиэом эритроцитов диагностикума.

Предлагаемый способ во всех случаях позволяет определить дизентерийный антиген при наличии 10 -2.10а м.кл/мл и повышает количество положительных результатов при (..пособ подгоговки молока для определеí fH дизентирийного антигена путем сбраживания молока, прогрева и фильтрации сыворотки с последующей.постановкой с фильт р fuM реакции непрямой гемагглютинации, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, сбраживание

4 наличии 1 ° 10 -; 510 м.кл/мл с 50% до

70% и с г1 до 20% соответственно.

Длительность определения дизентерийного антигена по сравнению с известным. способом сокращается в 10 — 12 раз.

Использование предлагаемого способа позволяет повысить чувствительность и специфичность реакции непрямой гемагглютинации с антительным диагностикумом при определении дизентерийного антигена в молоке и молочных продуктах. Кроме того, ускорение определения позволяет использовать его в практических лабораторных санэпидстанций для раннего обнаружения зараженности молока и молочных продуктов дизентерийными возбудителями и тем самым предотвратить возникновение и распространение инфекционных заболеваний. ведут с помощью 1%-ного раствора сычужно

ro фермента и сыворотку фильтруют под давлением 6 — 8 атм.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

l. Добровольская В. М.,Колесова В. Н.

О возможности применения РНГА с целью

45 обнаружения шигелл Зонне в молоке.—

ЖМЭИ, 19?6, № 5.