Устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое

 

В . И. Соколов, Н. M. Урванцев и В. Н. )Кадетов

1,) /

Всесоюзный научно-исследовательский ивститщВветеринарно вирусологии и микробиологии Иинистерс о хозяйства СССР (72) Авторы изобретения (?1) Заявитель (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КЛЕТОК

И ВИРУСОВ В ИОНОСЛОЕ

Изобретение относится к ветеринарии и медицине и может быть использовано при производстве вакцин, сывороток и других биологических активных препаратов.

Известны специальные устройства с большой ростовой поверхностью, образованной различными конструктивными элементами PI).

Известно устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое, содержащее герметически закрытый сосуд с газовводом для аэрирования и плоские элементы для роста культуры, расположенные горизонтально один над другим.

Клетки в этом устройстве растут на !

5 пластинках, погруженных в питательную среду, которой заполняют сосуд. Для циркуляции питательной среды и насыщения ее кислородом применяют магнитную

20 мешалку, механический насос или эр.-. лифт (2).

Недостатками известных устройств являются сложность конструкции, большой расход питательной среды и ограниченная аэрация культуры.

Цель изобретения — улучшение условий аэрации, сокращение расхода питательной среды и упрощение конструкции.

Э а цель достигается тем, .что в.уст. ройстве для выращивания клеток и вирусов и монослое, содержащем герметически закрытый сосуд с газовводом для аэрирования и плоские элементы для. роста культуры, распОложенные горизонтально один над другим, элементы дпя роста выполнены в виде кювет, имекицих криволинейное сопряжение стенок с днищем а газоввод выполнен в виде кол» лектора, установленного вертикально и снабженного отверстиями для подвода газа к каждой кювете.

Криволинейное сопряжение, стенок кювет с днищем обеспечивает попадание питательной среды в нижестоящие кюветы при подаче в верхнюю кювету и за" полнений нижестоящих кювет путем пе3 8831 релива через края стенок вышестоящих кювет.

На чертеже изображено устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое, общий вид, Устройство включает сосуд 1, который герметично закрывается крышкой 2, В сосуде 1 установлены кюветы 3, выполненные из титана или термостойкого стекла. Кюветы фиксируются в пазах держателей 4, закрепленных, в свою очередь, в пластинах 5 и 6. В зазорах между кюветами размещен подающий воздух газоввод 7 с отводами 8, расположенными на уровне каждой из кювет.

На крышке 2 закреплены пробоотборное устройство 9, трубопроводы 10 и 11 соответственно для заполнения и выгрузки клеток и вируссодержащего материала, входной 12 и выходной 13 бактери20 альные фильтры.

Все детали устройства могут быть легко разобраны, вымыты и после сборки простерилизованы паром в автоклаве.

Загрузка устройства осуществляется при соблюдении асептических условий, Устройство при этом находится в вертикальном положении. Бутыль с клеточной суспензией посевной концентрации соединяют с пробоотборным устройством

9 и с помощью сжатого воздуха производят заполнение кювет 3. При этом жидкость поступает через трубопровод

lQ (трубопровод 11 перекрыт ) вначале на верхнюю кювету, а после ее заполнения перетекает через края ее боковых стенок и далее по выпуклому сопряжению с днищем в нижестоящие кюветы.

Заполненное устройство устанавливается в термальнам помещении с температурой 37 С. При этой температуре 40 клетки на дне кювет формируют монослой. В процессе культивирования кле- . ток осуществляется аэрирование и стабилизация рН среды за счет подачи над кюветами 3 воздуха с 57 углекислого газа. Газовая смесь подается через бактериальный фильтр 12 и распределяется над культурой клеток в кюветах.

После образования монослоя (через 2436 ч) все устройство ставят в гори- 30

71 4 зонтальное положение и удаляют ростовую питательную среду с помощью сжа-. того воздуха через трубопровод ll (трубопровод 10 перекрыт) .

Операция заполнения кювет 3 питательной средой, содержащей посевной вирусный материал, осуществляется таким же образом, как и при загрузке суспензии клеток. Далее устройство располагают в термальном помещении с температурой 37 С, где и происходит накопление вирусов при тех же у .ловиях аэрирования, что и для размножения клеток. Сбор вируссодержащего материала производится из устройства, находящегося в горизонтальном положении, через трубопровод ll с помощью сжатого воздуха.

Использование для выращивания клеток и вирусов устройства с разделенными газовой фазой кюветами и аэратором с отводами выгодно отличает предлагаемое устройство от известных, так как новые элементы устройства позволяют уменьшить расход питательной сре; ды и обеспечивают насыщение питательной среды кислородом без специальных устройств (мешалки, насос, эрлифт).

Применение предлагаемого устройства повышает экономичность и Юувеличивает производительность труда при выпуске противовирусных препаратов.

Пример. Культуру клеток KMC выращивали в матрасах (контроль ) и в предлагаемом устройстве использовали среду 0,17 ГЛА на растворе Эрла с !ОХ сыворотки свиней. Клетки выращивали в течение 48 ч и заражали вирусом.

Опыты проводились при следующих технологических условиях: посевная концентрация клеток 3,0-4,0 х !О кл/мп множественность заражения 0,01=

0,03 ГАЕ 50/кл; рН среды 7,3-7,5, температура инкубирования 37+0,5 С (устройство и контрольные матрасы устанавливали в общем термостатируемом помещении).

Оценка накопления вируса проводилась через 4 сут. Результаты проведенных опытов представлены в т блице.

883171

Количество виИсходный Накоплетитр ви- ние вируса лог. руса лог.

ГАЕ 50/ /.Плй Объем щадь среды, моно- мл русного ма ГАЕ 50 мл слоя, 2 см териала, КЛ

Матрас однолитровый (Иена, Шотт) ?00 100 7,5-7,6 7,0-7,5 100

530 560 7,5-7,6 7,0-7,5 560

Как видно из таблицы, иснользование20 устройства для выращивания клеток и вирусов позволяет получать вирусный материал такой же активности, как и в контроле.

При использовании предлагаемого 2% устройства для выращивания клеток и вирусов в монослое сокращается время на загрузку и выгрузку клеточного и вирусного материала, уменьшается брак из-за бактериального загрязнения куль- 30 туры клеток, увеличивается производительность в 5 и более раз, в зависимости от объема заливаемой питательной среды и исходного вирусного материала.

Формула изобретения

Устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое, содержащее герСистема для выращивания вируса

Предлагаемое устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое метически закрытый сосуд с газовводом для аэрирования и ппо"кие элементы для роста культуры, расположенные горизонтально один над другим, о т— л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью улучшения условий аэрации, сокращения расхода питательной среды и упрощения конструкции, элементы для роста выполнены в виде кювет, имеющих криволинейное сопряжение стенок с днищем, а газоввод выполнен в виде коллектора, установленного вертикально и снабженного отверстиями для подвода газа к каждой кювете.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент ФРГ Ф 2.341.180, кл. С 12 К 1/10, 1976.

2. Патент США Ф 3407120, кл. 195-104, 1968 (прототип).

883171

Заказ 10124/37

Тираж 531 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул, Проек

Составитель Л.,Серова

Редактор И. Николайчук Техред 3. Фанта Корректор Г,Решетник