Способ приготовления носителя для диск-электрофореза гуминовых кислот почв

 

университет им; И.В.Ломоносова (54) СПОСО6 ПРИГОТОВЛЕНИЯ НОСИТЕЛЯ

ДЛЯ ДИСК-ЭЛЕКТРОФОРЕЗА ГУИИНОВЫХ

КИСЛОТ ПОЧВ

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к изучению состава гуминовых кислот почв.

Известен способ приготовления носителя для электрофореза гуминовых кислот почв, в которых носителем является хроматографическая бумага или агаровый гель (11.

К недостаткам известного способа относятся низкая разрешающая способ" . ность и длительность проведения айализа.

Известен способ приготовления носителя для диск-электрофоретической- . трубки концентрирующим гелем и раз" деляющим полиакриламидным гелем (23.

Недостатки известного способанизкая разрешающая способность, а также то, что приготовление концентрирующего геля предусматривает ис" пользование фотокатализатора рибо». флавина, что делает приготовление . трудоемким H плохо воспроизводимым.

Цель изобретения - повышение разрешающей способности фракционирования гуминовых кислот.

Поставленная цель достигается тем, что .в качестве концентрирующего геля используют декстрановый гель с интервалом фракционирования по молекулярной массе 40Я-150000 в количестве 0,35-0,45 мл, а в качестfO ве разделяющего геля " полиакрилвмидные гели с диаметром пор -121, 161, 28А в соотношении 1: 1:1, в количествах, равных для каждого геля 1,451,65 мл.

На чертеже представлена схема,поясняющая способ.

На схеме представлены диск"электрофореграммы гуминовой кислоты:

1-по известному способу, 2 - по предлагаемому способу.

П р и и е р 1. В электрофоретичес" кую трубку длиной 20 см и диаметром

0,6 см помещали разделяющий полвакриламидный гель с диаметром пор 30А в

3 9188 количестве 4,65 мл до высоты 18 см, затем наслаивали сверху концентрирующий полиакриламидный гель с диаметром пор 50 А в количестве 0,4 мл на высоту 1,0 см; на гель помещали препарат гуминовой кислоты. Трубки поме. щали в электрофоретическую камеру.

Модель - 69 (Реанал. Венгрия) и проводили диск-электрофорез при стабилизации по току 2 мА на трубку s течение 30 мин и 5 мА на трубку в течение lu. В результате было получено

4 фракции гуминовых кислот (схема 1) .

Пример 2. В электрофоретическую трубку длиной 20 см и диаметром

0,6 см помещали полиакррламидный гель с диаметром пор 12А в количестве 1Ä45 мл до высоты 5,4 см, сверху наслаивали полиакриламидный гель с диаметром пор 16А в количестве

1 45 мл на ту же высоту и аналогич" о но гель с диаметром пор 28 А.

Соотношение лолиакриламидных гелей 1: 1: 1 является необходимым и достаточным условием для получения при диск-электрофорезе наилучшей . разрешающей способности, которая оценивается по числу получаемых электрофоретических фракций. Изменение, соотношения гелей допустимо в пре30 делах не более 5Ф, т.е. величины экспериментальной ошибки, включаю" щей ошибку набора растворов пипеткой, ошибку внесения растворов исходных веществ в электрофоретические трубки при полимеризации гелей и др.

Изменение соотношения гелей более

«54 приведет диск"электрофорез в полиакриламидном геле к ухудшению его разрешающей способности: размыванию зоны электрофоретических фрак4в ций, а также слиянию близко лежащих по электрофоретической подвижности фракцИй в одну сплошную форетическую зону, уменьшению общего числа получаемых фракций.

43

Затем проводили наполнение декстрановым гелем с интервалом фракционирования по молекулярной массе

4000-150000 Sephadex 6-100 в количестве 0,35 мл на высоту 0,95 см, сверху помещали препарат гуминовой кислоты, условия проведения дискэлектрофореза аналогичны приведенным в примере 1. В результате получено 8 фракций гуминовых кислот.

5$

Пример 3. В электрофоретическую трубку помещали полиакриламидный гель с диаметром пор 12А в коли48 4 честве 1,65 мл до высоты 6,2 см, сверху наслаивали полиакриламидный гель с диаметром пор 16А в количестве 1,65 мл на высоту 6,2 см и гель с диаметром пор 28А на ту же высоту и в тех же количествах. Затем проводили наполнение трубки декстрановым гелем с интервалом фракционирования по молекулярной массе 4000-150000 на высоту 1,05 см в количестве 0,45 мл, сверху помещали препарат гуминовой кислоты. Условия проведения дискэлектрофореза аналогичны приведенным в примере 1.

В результате получено 9 фракций гуминовых кислот.

Как видно при приготовлении носителя для фореза согласно известному способу было выделено 4 фракции гуминовой кислоты (а, в, е, ж) по их электрофоретической подвижности в геле. При этом фракиця не диффузна и не концентрируется s виде узкой полосы, что свидетельствует о. низком качестве разделения. Предлагаемый способ позволяет выделить 8-9 фракций (а, б, в, r, д, е, ж, 3, и) при этом вместо диффузной, размытой зоны е выделяется ряд четких фракций (г-е), а полоса вещества (ж) (по известному) разделяется на 2-3 фракции(ж,з,и).

Пример 4. В электрофоретическую трубку длиной 20 см помещали полиакриламидный гель с диаметром пор

12А до высоты 6 см, в количестве.

1,35 мл сверху наслаивали полиауриламидный гель с диаметром пор 16А, на . в высоту 6 см и с диаметром пор 28 А на ту же высоту в количестве 1,55 мл.

Затем проводили наполнение декстрановым гелем с интервалом фракционирова" ния по молекулярной массе 4000- 150000

Sephadex - G- 100 в количестве 0,4 мл на высоту 1 см, сверху помещали препарат гуминовой кислоты, условия проведения диск-электрофореза аналогичны приведенным в примере 1. В результате получено 9 фракций гуминовых кислот (схема 2).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет увеличить разрешающую способность при разделении -гуминовых кислот почв методом диск-электрофореза более, чем в 2 раза. формула изобретения

Способ приготовления носителя для диск-электрофореза гуминовых кислот

Составитель Л.Рубинова

Техред Й. Кастелевич

Корректор "- И1выдкая

«Г

Редактор Н.Пушненкова

Заказ 2129/27 Тираж .883 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раувская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 918848 6 почв, включающий заполнение электро- 12, 16 и 28А в соотношении 1: 1: 1, в форетической трубки концентрирующим количествах, равных для каждого гегелем и разделяющим полиакриламид- ля 1,45-1,65 мл. ным гелем, отличающийся Источники информации, тем, что, с целью повышения разреааю- принятые во внимание при экспертизе щей способности фракционирования. гу- 1. Кононова А.Н. Органическое веминовых кислот, в качестве концент" щество почв. й., "Наука", 1963, рирувщего геля используют декстрано- с. 120. вый гель с интервалом фракционирования по молекудярной массе 4000- 1о 2, Степанов В,В. и Пахомова A.H.

150000 в количестве 0,3 -0,45 мг, а Электрофорез гумусовых веществ в пов качестве разделяющего геля - поли- лиакриламидном геле. - "Почвоведеакриламидные гели с диаметром пор ние", И 12, 1969, с. 67 (прототип).