Способ получения агрегата бактериальных клеток sтrертомусеs olivaceus

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

Сотоз Соватскнх

Соцналнстичесннх

Ресн1тбннк

«»929014 (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 26. 03. 79(21) 2745296/28-13 (23) Приоритет - (32) 27.03 78 (5!) М. Кл.

С 12 N 9/92

С 12 Х 11/02//

С 12 P 19/24

3ееуларотаеииый комитет

СССР

IIo леан иаооретеиий, и втирыти1 (31) 890500 (331 СНА (53) УДК 577 15. .07(088.8) Опубликовано 15. 05. 82,Бюллетень № 18

Дата опубликования описания 15. 05.82

Иностранец

Джеральд Бальтзер Борглум (СВА) (72) Автор изобретения

Иностранная фирма

"Майлз Лабораториз Инк" (71) Заявитель (CllIA) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АГРЕГАТА БАКТЕРИАЛЬНЫХ

КЛЕТОК STPXPTQFCES OLIVACEUS

Изобретение относится к получению иммобилизованных ферментных препаратов, находящих практическое применение в некоторых промышленных процессах, и касается, в частности, получения иммобилизованных (отвержденных) клеток микроорганизмов, содержащих глюкозоизомераэу, которые могут быть использованы в качестве источника этого фермента при конверсии !О глюкозы во фруктозу.

Известен способ получения бактериального клеточного агрегата, обладающего глюкозоизомерззной активностью, путем обработки клеток раэ- 1S личными полиэлектролитными флоккулирующими агентами.

Однако получаемый таким способом клеточный агрегат не обладает твердостью, достаточной для промышлен- 20 ного применения, в частности, для использования в реакторных слоях увеличенной толщины в процессах изомеризации глюкозы.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ получения агрегата бактериальных. клеток Streptomyces oIivaceus, заключающийся в том, что массу бактериальных клеток выдерживают при рН 6,5-8,5 и температуре 15-60оС в течение

0,5-2 ч в контакте с поперечносши" вающим агентом, в качестве которого используют глутаровый альдегид в количестве О, 1-50 вес.Ф от веса сухих клеток.

Однако данный способ также не обеспечивает получения продукции с достаточной твердостью, необходимой для его практического использования в процессах конверсии глюкозы во фруктозу. . Цель изобретения-повышение твердости получаемого бактериального клеточного агрегата.

Цель достигается тем, что согласно способу получения агрегата бак929014 териальных клеток Streptolivj es oIivaceus заключающемуся в том, что массу указанных бактериальных клеток выдерживают в контакте с поперечносшивающим агентом в щелочной среде в течение 0,5-1,5 ч,причем в качестве поперечносшивающего агента используют продукт взаимодействия .

12-65,1 вес./ соединения, выбранного из группы, включающей глутаровый i0 альдегид, трихлорангидрид циан- " уровой кислоты и их сочетание, и

1.

88-34,9 вес.Ф водорастворимого катионоактивного полимера — продукта полимеризации эпихлоргидрина с ал- 15 киленполиамином формулы R„R NRH где R — низший С -С6 — алкилен, а R и R<- низшие С -С6 — алкилы, указанный поперечносшивающий агент используют в количестве 6 5- 20

55 вес.3 от сухого веса клеток, и процесс ведут при рН 8-9 и температуре 5-30 С с последующим выделением целевого продукта.

После выделения агрегат сушат. 25

В качестве поперечносшивающего агента используют продукт взаимодействия 57,1 вес. глутарового альдегида и 42,9 вес. водорастворимого катионоактивного полимера в коли- З0 честве 17,5 вес.3 в пересчете на сухой вес клеток.

В качестве поперечносшивающего агента используют также продукт взаимодействия 54,9 еес.3 глутарового альдегида и 3,6 вес. трихлорангидрида циануровой кислоты, взятых в качестве глутарового альдегида, и

41,5 вес.4 водорастворимого катионоактивного полимера в количестве 40

18,2 вес. в пересчете на сухой вес клеток.

Бактериальные клетки, содержащие активную глюкозизомеразу, которые могут быть использованы при осуществлении предлагаемого способа, можно получать. в соответствии с известной технологией. Ферментсодержащие. клетки получают выращиванием в погруженном состоянии в аэробных усло- 50 виях культуры Streptomyces oIivaceus (обычно — штамм NRRh 3583) или их мутантов в среде, содержащей соответствующие питательные вещества известным способом. Полученные бак- 5s териальные клетки отделяют от ферментативной среды путем фильтрования и центрифугирования. Компоненты, которые используют при осуществлении такого способа, являются легко доступными. Особый эпигалоидгидринполиаминовый полимер, который используют при осуществлении предлагаемого способа, представляет собой технически доступный продукт, выпускаемый с товарным знаком БЕТЦ 1180 фирмой

Бетц лабораториз, инк.Тревоз, шт.Пенсильвания. Молекулярный вес продукта БЕТЦ 1180 менее 1 000 000, его молекулы содержат приблизительно

0,288 MMQJlb, аминогрупп на грамм раствора (согласно данным нингидринового испытания), а сам продукт поступает в продажу в виде раствора, содержащее 30 вес. ; сухого вещества в пересчете на общий вес раствора.

Этот продукт является известным и охарактеризован как водорастворимый катионоактивный полимер, полученный полимеризацией хлоргидрина с алкиленполиамином, отвечающим общей формуле R

1 обозначен низший алкил, содержащий от 1 до 6 углеродных атомов, причем молекулярное соотношение между хлоргидрином и полиамином находится в интервале от 0,60:1 до 2,7:1, в процессе указанной полимеризации предусматриваются осуществление реакции алкиленполиамина с 50-90 эпихлоргидрина от того количества, которое должно быть полимеризовано, продолжение этой реакции до момента достижения практически однородной вязкости реакционной среды и проведение реакции оставшейся части эпихлоргидрина в постепенно увеличивающихся количествах, в результате чего образуется катионоактивный полимер, температура полимеризации находится в пределах от 60 до

120оС. В дальнейшей части данного описания этот материал носит название "полиаминового полимера".

В качестве поперечносшивающего реакционного продукта, необходимого для практического осуществления предлагаемого изобретения, в процессе получения агрегата бактериальных клеток можно использовать одну из трех возможных композиций. Можно провести реакцию полиаминового полимера с глутаровым альдегидом или ангидридом циануровой кислоты, или же как с глутаровым альдегидом, 929014

30

4О

55 так и с трихлорангидридом циануровой кислоты одновременно.

Глутаровый альдегид трихлорангидрид циануровой кислоты, и их сочетание, объединенные под обобщающим названием глутарового альдегида, используют для реакции с полиаминовым полимером. При величине рН в интервале от 6 до 10 и температуре от 0 до 30 С в течение от 0,5 до

2,5 ч. В целом поперечносшивающий реакционный продукт содержит от 12 до 65,1 вес Д глутарового альдегида и примерно от 34,9 до 88 вес.3 полиаминового полимера в пересчете на общий вес активнодействующих компонентов.

Предпочтительно сшивающий агент, получаемый в результате реакции между глутаровым альдегидом и полиаминовым полимером, получают при величинах рН от 8 до 9, температуре

18 25оС и в течение примерно 0,5 ч.

Глутаровый альдегид должен присутствовать в молярном соотношении по меньшей мере 1:1 аминогрупп в молекулах полиаминового полимера, что препятствует нежелательному поперечному сшиванию полиаминового полиме-. ра глутаровым альдегидом.

Реакцию между только одним трихлорангидридом циануровой кислоты и полиаминовым полимером по предпочтительному варианту проводят при величинах рН среды от 8 до 9 и температуре от 0 до 10 С в течение от

1 до 2 ч. Трихлорангидрид циануровой кислоты должен присутствовать в молярном соотношении, равном по меньшей мере 1:1 аминогрупп в молекулах полиаминового полимера, что позволяет предотвратить нежелательное поперечное сшивание молекул полиаминового полимера галоидангидридом циануровой кислоты. В молекуле трихлор- 4 ангидрида циануровой кислоты, имеются три галогеновых реакционноспособных участка. Один из этих участков вступает в реакцию при температуре

0 С или выше. После завершения реакции на этом первом участке при температуре от 30 до 50 С вступает в реакцию второй участок, а третий участок вступает в реакцию при температуре от 90 до 100 С. Желательно

0 первоначально использовать для реакций с полиаминовым полимером только первые участки молекул трихлорангидрида циануровой кислоты. Образовавшийся поперечносшивающий реакционный продукт используют в реакции с бактериальными клетками, после чего нагревают в процессе сушки до повышенной температуры, оставшиеся активные участки галоидангидрида циануровой кислоты вступают в реакцию с молекулами полиаминового полимера с обеспечением дополнительного поперечного сшивания бактериального клет.очного агрегата.

- Реакцию между полиаминовым полимером и сочетанием глутарового альдегида с трихлорангидридом циануроi5 .вой кислоты проводят в несколько стадий. СНачала проводят реакцию трихлорангидрида циануровой кислоты с полиаминовым полимером при величине рН от 8 до 9 и температуре от

0 до 1ФС в течение от 1 до 2 ч. По предпочтительному варианту исходные реагенты для осуществления такой стадии следует использовать в молекулярном соотношении 1 моль три25 хлорангидрида циануровой кислоты на

2 моль аминогрупп в молекулах полиаминового полимера. Затем добавляют избыточное количество глутарового альдегида и реакцию проводят в тех же самых условиях рН и температуры в течение 0,5 ч.

Используемый поперечносшивающий реакционный продукт не является катионоактивным полиэпектролитом, поскольку аминогруппы в молекулах полиаминового полимера, которые первоначально сообщали этому последнему катионоактивные характеристики, к этому времени уже прореагировали с глутаровым альдегидом и/или трихлорангидридом циануровой кислоты, вследствие чего свободные группы уже отсутствуют.

Бактериальные клеточные агрегаты получают путем введения массы бактериальных клеток в контакт с поперечносшивающим реакционным агентом, полученным s соответствии с предлагаемым, при величине рН от 8 до 9 и температуре от 5 до 30 С в течение от 0,5 до 1,5 ч. Поперечносшивающий реакционный агент используют в таких количествах и концентрации, что бактериальные клетки вступают в контакт приблизительно с 6,555 вес.3 активнодействующих компонентов поперечносшивающего реакционного продукта в пересчете на сухой вес клеток.

После завершения указанной реакции полученный бактериальный клеточный агрегат по предпочтительному варианту обычно экструдируют или подвергают формованию с сообщением продукту желаемой формы и сушат -при температуре приблизительно 65ОС в течение нескольких часов. Полученный сухой агрегат можно хранить до тех пор, пока он не понадобится для проведения ферментативного процесса ° При этом высушенный агрегат повторно гидратируют и готовят к использованию.

Полученные образцы подвергают испытанию на твердость с целью оценки их пригодности для использования в реакторах. Эта твердость выражается в стойкости к сжатию частиц бактериального клеточного агрегата. Испытания проводят с использованием разрывной машины "Инстрон" в сочетании с блоком сжимающей нагрузки

No.CCI в соответствии с ранее описанной методикой. Этот прибор выпускается фирмой Инстрон корпорейшн

Кантон, штат Массачусетс.

Ниже приводится процедура испытаний по определению твердости после повторной гидратации.

Раствор для повторной гидратации готовят путем смешения 9,68 r гексагидрата хлористого кобальта, 28,0 r гидрата окиси магния и 56,0 r безводной лимонной кислоты в 600 мл

"дистиллированной воды при 45о0. Эту смесь далее перемешивают и нагревают до 60 С с растворением всех солей.

Затем смесь охлаждают до 25 С и доводят величину рН до 8,5 добавлением гидрата окиси натрия. Далее раствор фильтруют и доводят его объем до

1,0 л добавлением дистиллированной воды. Порцию в 2,5 м указанного раствора смешивают с 130 мл воды, 70,3 г декстрозы, 24,228 г трис-(оксиметил)-аминометана и доводят величину рН до 8,55 добавлением гидрата окиси натрия при 25оС. Затем объем доводят до 200 мл добавлением дистиллированной воды.

Проводят конверсию 5 частиц высушенного бактериального клеточного агрегата с использованием 2,5 мл указанного раствора для повторной гидратации в чашке Петри и выдерживают при 60оC в водяной бане в течение 1 ч, а затем оставляют стоять при комнатной температуре до охлаж29014

8 дения. После этого частицы удаляют из раствора, удаляют также из него избыток поверхностной жидкости и проводят испытания с применением разрывной машины "Инстрон". Перед применением данного прибора для про1О

15 го

25 зо

55 ведения измерений его подогревают в течение по меньшей мере 30 мин совместно со смонтированным на нем блоком сжимающей нагрузки. Устанавливают скорость движения ползунка на уровне 5,1 мм/мин и скорость движения диаграммы 51 мм/мин. Переводят ручку "Возврат" до половины хода, доводя ее до уровня 0,965 мм для поверхности блока нагрузки.

Устанавливают ручку Длина испытываемой части образца" таким образом, чтобы очистить кромку чашки для образца. Задают на самопишущем приборе диапазон всей шкалы. Это обычно составляет 4,54 кг. Стандартизируют самопишущий прибор таким образом, чтобы считывать нулевое число с чашкой для образца на блоке нагрузки и

1 фунтом (0 454 кг), с чашкой и

1 фунтом (0,454 кг) стандартного веса на блоке нагрузки. Помещают единственную частицу после повторной гидратации на чашку для образца,которая сцентрирована с ползунком.

Вручную опускают ползунок на верхнюю часть частицы и нажимают кнопку "Ход".

На самопишущем приборе считывают усилие в фунтах (килограммах) на расстоянии 0,03 дюйма 0,762 мм от точки,в которой ползунок касается частицы.

Таким образом твердость выражается в усилии (в фунтах или килограммах), необходимом для сжатия частицы на

0,03 дюйма (0,762 мм). Этот эксперимент повторяют на нескольких частицах, а полученные результаты усредняют.

Пример 1. Поперечносшивающий реакционный продукт получают добавлением 2,25 г раствора БЕТЦ

1180, содержащего 0,675 r активнодействующего материала и 0,648 ммоль аминогрупп, в 100 мл 1,254-ного (вес на объем) раствора глутарового альдегида, содержащего 13,24. ммоль активнодействующего материала, при величине рН, равной 9. Эту смесь перемешивают в течение 30 мин, в результате чего получают раствор глубокой желтой окраски. Конечный продукт получают из реакционной смеси, которая содержит 64,9 вес.3 глута929

Культуру мутанта Streptomyces

oIivaceus NRRh 3583 выращивают в ферментере с перемешиванием и аэрацией, в котором содержалась соответствующая питательная среда. Величину рН питательной среды ферментора, содержащую массу бактериальных клеток, доводят до 8,2 добавлением соответствующих, буферных материалов. часть приготовленного раствора добавляют в порцию питательной среды ферментора в таком количестве, которое необходимо дпя достижения эквивалента 14 sec.4 глутарового альдегида (21,6 вес.4 от всего количества реакционного продукта) в пересчете на сухой вес бактериальных клеток.

0о истечении 30-минутного промежутка времени реакции при 25 С и величине о рН, равной 8,2, обработанню среду 2s отфильтровывают. Затем фильтровальный пирог подвергают экструдированию через шприц с диаметром отверстия

2,2 мм. Отформованные таким образом экструдированные нити разрезают на отрезки длиной 30 мм и высушивают в течение ночи при 65оС в печи с принудительной циркуляцией горячего воздушного потока. Аналогичную порцию питательной среды ферментора обрабатывают только одним глутаровым альдегидом при концентрации 14 вес.3

Таблица 1

Твердость, кг

Доба вляемое количество, вес. i

0,82

13,9

Контрольный

100

76,7

1 >23

13,0

23,3

34,7

1 23

40,0

18,7

44,4

55,6

1,64

29,8

34,9

65,1 воляет существенно повысить твердость в сравнении с той твердостью, которая достигается с использованирового альдегида и 35,1 вес./ полиаминового полимера в пересчете на общий вес глутарового альдегида и полиаминовый полимер.

Глутаровый Полиаминовый альдегид, полимер, вес.3 вес.ь

Использование поперечносшивающего агента на основе глутарового альдегида и полиаминового полимера поз014 10 в пересчете на сухой вес бактериальной клеточной массь1. Затем обработанные клетки отфильтровывают, экструдируют и высушивают таким же образом с получением контрольных частиц. Как контрольный продукт,так и продукт, получаемый по предлагаемому изобретению подвергают испытаниям на определение твердости. Твердость контрольного образца 0,364 кг, тогда как продукт, обработанный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает повышенной твердостью, равной 1,27 кг.

Пример 2. Порции питательной среды ферментера с микроорганизмом Streptamyces oIivaceus, аналогичной упомянутой в примере 1, подвергают обработке только одним глутаровым альдегидом (контрольный эксперимент) и различными сочетаниями поперечносшивающих агентов при величине рН, равной 9, и температуо ре 29 С, Различные поперечносшивающие агенты получают в соответствии с изложенным в приведенном примере l c использованием различных количеств глутарового альдегида и полиаминового полимера. Затем обработанные бактериальные клетки отфильтровыBàют, экструдируют, высушивают и подвергают испытанию на определение твердости.

В табл.1 показана реакционная смесь для приготовления композиции,,из которой получают поперечносшивающий реакционный продукт. ем в соответствии с известным способом только одного глутарового альдегида.

9290

25

Пример 3. Поперечносшивающий реакционный агент получают растворением 0,188 г трихлорангидрида циануровой кислоты (0,64 ммоль) в

10 мл ацетона, а затем этот раствор при перемешивании добавляют к 70 мл водой, охлаждаемой льдом, с получением тонкодисперсного осадка.Порцию в количестве 2,25 г раствора

БЕТЦ 1180 (содержащего 0,675 r активнодействующего материала и

0,648 ммоль аминогрупп) разбавляют добавлением 20 мл воды и добавляют смесь в суспензлю трихлорангидрида циануровой кислоты. Конечную смесь подвергают перемешиванию и выдерживают при величине рН 9 и температу- 20 ре О-5ОС в течение 1-2 ч, после чего разбавляют до объема 100 мл. Трихлорангидрид циануровой кислоты растворяется, указывая на реакцию с полиамином. Этот реакционный продукт получают из реакционной смеси, которая содержит 21,8 вес.l трихлорангидрида циануровой кислоты в качестве полиаминового колимера. Часть питательной среды, аналогичной указанной 30 в примере 1, из ферментера с микроорганизмом Streptomyces oIivaceus смешивают с частью указанного реакционного продукта с достижением концентрации 32,0 вес.3 реакционного продукта в пересчете на сухой вес бактериальных клеток.0,23 (вес на объем) водного раствора бикарбоната натрия добавляют для поддержания величины рН на уровне 9. По истечении 40

1,5 ч при величине рН 9 и температуре 25 С обработанную питательную срео ду фильтруют, экструдируют и высушивают. Другую часть питательной среды ферментера обрабатывают согласно из- 45 ложенному в течение 0,5 ч. В начальной стадии не добавляют бикарбоната натрия, но отфильтрованные клетки промывают раствором бикарбоната натрия концентрацией 1 вес.I при величине рН 9 перед экструдированием и высушивают. Для получения контрольного продукта в отдельную порцию питательной среды из ферментера добавляют глутаровый альдегид при концентрации 14 вес.3 в пересчете на сухой вес бактериальной клеточной массы.

Полученную массу обрабатывают глутаровым альдегидом в течение 30 мин

14 1" при величине рН 8,2 и температуре

25 С с последующим фильтрованием, экструдированием и сушкой. Твердость контрольного продукта 1 кг, тогда как в результате обработки указанным поперечносшивающим продуктом в течение 0,5 ч получают продукт с твердостью 1,73 кг, а в результате обработки им же в течение 1,5 ч достигают твердости 1,82 кг.

Пример 4. Поперечносшивающий реакционный продукт получают добавлением 4,5 г раствора БЕТЦ 1180 (содержащего 1,35 r активнодействующего материала и 1,296 ммоль аминогрупп) в 0,118 r (0,64 ммоль) тонкоизмельченного трихлорангидрида циануровой кислоты в воду, охлаждаемую льдом. Величину рН доводят до 9 и поддерживают на этом уровне в ледяной бане (при ООС) в течение 2 ч. Затем добавляют 1,25 г (13,24 ммоль) глутарового альдегида при величине рН 9 и низкую температуру поддерживают в течение приблизительно 0,5 ч,Смесь приобретает темно-желтую окраску.

Реакционный продукт получают из реакционной смеси, которая содержит

4,3 вес., трихлорангидрида циануровой кислоты, 46,0 вес.г глутарового альдегида (всего 50,3 вес.Ф глутарового альдегида) и 49,7 вес.Ф полиаминового полимера в виде глутарового альдегида . Порцию питательной среды, аналогичной питательной среде примера 1, из ферментера с культурой микроорганизма Streptomyces oIivaceus смешивают с порцией указанного поперечносшивающего продукта с достижением концентрации 30,4 вес.:. реакционного продукта в пересчете на сухой вес бактериальной клеточной массы. После истечения 0,5-часового реакционного периода при величине рН 9 и температуре 25оС обработанную питательную среду фильтруют, промывают водным раствором бикарбоната натрия концентрацией 5 вес,Ф при величине рН 9, экструдируют и высушивают. Контрольный образец получают таким образом, как это описано в примере 3, Твердость контрольного продукта 0,364 кг, тогда как твердость, достигнутая с использованием указанного поперечносшивающего продукта достигает 1,73 кг.

Пример 5. Порции питательной среды из ферментера с культурой микроорганизма Streptomyces о!1чл13

929014

ceus, аналогичной упомянутой в при- мере 1, обрабатывают только одним глутаровым альдегидом (контрольный эксперимент) и различными сочетаниями поперечносшивающих продук,тов при величине рН 9 и температурах

О

25 и 5 С. Во всех случаях поперечносшивающие реакционные продукты,которые используются, включают в себя

1 моль трихлорангидрида циануровой кислоты на 2 моль аминогрупп в полиГлутаровый альдегид, вес.4

Трихлорангидрид циануровой кислоты, вес. l

Добавляемое количество, вес.4

Твердость, кг

Полиаминовый полимер, вес.4

25о С

100 Контрольный

0 55

1,05

64,3

30,6

6,5

5,1

18,2,75,8

6,0

38,4

0,96

47,4

1,41

3,8

48,8

29,5

12,8

87,2

1 50

55,0

100 Контрольный

0,55

44,5

2,0

13,5

3,5

52,0

15,9

2,6

18,8

75,3

5,9 в пересчете на общий вес активнодействующих ингредиентов. По предпочти45 тельному варианту эту композицию следует также применять в количестве

17,5 вес.4 в пересчете на сухой вес бактериальных клеток. В том случае, когда используют поперечносшивающий

50 реакционНый продукт, полученный из глутарового альдегида, трихлорангидрида циануровой кислоты и полиаминового полимера, в соответствии с предварительным, вариантом, композицию следует получать из смеси

54,9 вес.4 глутарового альдегида и . 3, 6 вес. 4, трихлорангидрида циануровой кислоты и 41,5 вес.3 полиамино1вого полимера в пересчете на общий

Как видно из приведенных данных, бактериальные клетки, обработанные поперечносшивающими реакционными продуктами согласно предлагаемому изоб. ретению, обладают заметно повышенной твердостью в сравнении с бактериальными клетками, которые были обработаны в соответствии с известным способом только одним глутаровым альдегидом.

8 случае использования поперечносшивающего реакционного продукта,полученного из глутарового альдегида и полиаминового полимера, предпочтительную композицию готовят из смеси

57,1 вес.4 глутарового альдегида и

42,9 вес.4 полиаминового полимера аминовом полимере. Затем готовят сочетания, которые указаны в табл.2.

Затем обработанные бактериальные клетки фильтруют, экструдируют, высушивают и подвергают испытаниям на определение их твердости.

В табл.2 показана композиция реакционной смеси для получения

10 поперечносшивающего реакционного проду„та.

Т а б л и ц а 2

9290

Формула изобретения

Составитель О. Скородумова

Техред Ж. Кастелевич Корректор И. Муска

Редактор А. Гулько

Заказ 3301/79 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 вес активнодействующих ингредиентов.

По предпочтительному варианту эту композицию следует также применять в количестве 18,2 вес. в пересчете на сухой вес бактериальных клеток.

Все бактериальные агрегаты, полученные в соответствии с изложенным, проявляют способность к конверсии глюкозы во фруктозу. Практическое осуществление предлагаемого способа не ухудшает глюкозизомеразной активности.

Основное преимущество и техникоэкономическая эффективность данного изобретения состоит в достижении твердости бактериального клеточного агрегата после повторной гидратации в сравнении с бактериальными клеточными агрегатами, получаемыми по ранее известным способам.

1, Способ получения агрегата бактериальных клеток $1ге1 Яотп)гсея oI jvaceLIs, предусматривающий выдерживание массы бактериальных клеток в контакте с поперечносшивающим агентом в щелочной среде в течение 0,5-1,5 ч, зо отличающийся тем, что, с целью повышения твердости получаемого продукта, в качестве поперечносшивающего агента используют продукт взаимодействия 12-65,1 вес. 1 соединения, выбранного из группы,вклю35 чаюшей глутаровый альдегид, трихлор14 16 ангидрид циануровой кислоты и их сочетание, и 88-34,9 вес. 1 водорастворимого катионоактивного полимера продукта полимеризации эпихлоргидрина с алкиленполиамином формулы Же и где К - низший С -Сй- алкилен, а R < и R - низшие С -С6 - алкилы, причем указанный поперечносшивающий агент используют в количестве 6,5-55 вес.3 от сухого веса клеток, и процесс ведут при рН 8-9 и температуре 5-30оС с последующим выделением целевого продукта.

2. Способ по и.1, о т л и ч а юшийся тем, что после выделения аrрегат сушат.

3. Способ по п.1, о т л и ч à юшийся тем, что в качестве поперечносшивающего агента используют продукт взаимодействия 57,1 вес.1 глутарового альдегида и 42,9 вес.3 водорастворимого катионоактианого полимера в количестве 17,5 вес.1 в пересчете на сухой вес клеток.

4. Способ по и.1, о т л и ч а юшийся тем, что s качестве поперечносшивающего агента используют продукт взаимодействия

54,9 вес.1 глутарового альдегида и

3,6 вес. i трихлорангидрида циануровой кислоты, взятых в качестве глутарового альдегида и 41,5 вес. 1 водорастворимого катионоактивного полимера в количестве 18,2 вес.i

1в пересчете на сухой вес клеток.