Способ приготовления препаратов бактерий для просмотра в сканирующем микроскопе

 

Оп ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советеник

Социалистические

Рес убнни

<и 933700 (6! ) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 13.08.80 (2 ) 2927007/30-15 с присоединением заявки рй (23) Приоритет (5t)M. Кп.

С 12 М 1/00

С 12 и 1/00! вву4вретеккный кемнтет

СССР

10 делам нзебретеннй н вткрмтнй

Опубликовано 0.7.06.82. Бюллетень М 21 (53) УДК 578.6:

:086.3 ! 088.8) Дат» опубликования описания 07.06.82 т (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ БАКТЕРИЙ

QJIH ПРОСМОТРА В СКАНИРУЮШЕМ МИКРОСКОПЕ

Изобретение относится к микробиоло- гии.

Известен способ подготовки колоний бактерий для просмотра в сканирующем микроскопе, включающий замораживание бактерий и высушивание в замороженном состоянии (1) .

Этот способ подготовки препаратов бактерий путем лиофилиэации требует специальной вакуумной камеры и охлаждение до температуры твердой углекислоты. Кро

1О ме того, лиофилиэация сильно повреждает клетки за счет образования внихкристал-. ликов льда. Данный способ не позволяет просмотреть колонию на разной глубине, 1S качество .снимков очень низкое, способ трудоемок, время, необходимое на подготовку бактерий к просмотру, составляет приблизительно по 246 ч.

Известен также способ приготовления препаратов бактерий для просмотра в сканирующем микроскопе, включающий выращивание колоний бактерий на питательной среде с последующим фиксированием, приклеивание электропроводным клеем к металлическому столику и напыление металла на препарат $2), Однако извесжьтй способ очень трудоемок, долог и не позволяет изучать мелкие микроорганизмы, например фитопатогенные бактерии.

Целью изобретения является упрощение способа и сокращение времени приготовления,,Пля достижения поставленной цели согласно способу приготовления препаратов бактерий для просмотра в сканирующем микроскопе, включаюптему выращивание колоний бактерий на питательной. среде с последующим фиксированием, прикле иванне электропроводным клеем к металлическому столику и напыление металла на препарат, фиксирование колоний бактерий проводят путем погружения их вместе с агаровой полушкой в концентрированный раствор металла на 2-72 ч, а после приклеивания к столику снимают поверхностную пленку и пооиэводат нанесение бороэдок

3 9337 на поверхности колонии на глубину 0.10,2 мм.

Пример . На питательных средах содержащих агар-агар выращивают коцо нии фитопатогенных бактерий различных родов, например, PceudomonaS илк Ь, pvAHo.

Этк колонии зафиксированы вместе с

at àðoâoN подушкой в концентрированном метаноле в течение 2, 5-6, 10, 12, 24 to и 72 ч при комнатной температуре.

Далее колонии приклеивают клеем

БФ-2 к специальному металлическому столику для сканирующего микроскопа

ДЯМ50-А, не дожидаясь испарения ме- 1% танола.

Приклеенные колонии хранились от

1-2 ч до 6 мес. и при этом качество иэображений не менялось.

Непосредственно перед напылением zo металла на копанию:проводят бороздки тонкой препаровальной иглой и снимают бактериальную пленку.

Колонии просматривают на японском сканирующем электронном микроскопе 25 марки ЯМ-50-А.

Предложенный способ имеет следующие преимущества; фиксируется целая колония бактерий, что искиючает операцию приго» товления взвесей; исключается центрифу щ гирование, которое приводит к массовой гибели исходного материала; применяется одно легкодоступное фиксирующее вещество; исключается применение спожных бу

ОО 4 ферных смесей при фиксации; значительно сокращается время подготовки к просмотру в микроскопе.

Формула иэобре тен ия

Способ приготовления препаратов бактерий для просмотра в сканирующем микроскопе, включающий выращивание коцо= ний бактерий На питательной среде с последующим фиксированием, прккпеивание электропроводным клеем к металлически кому столику и напыление металла на препарат, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и сокращения времени приготовления, фиксирование коловший бактерий проводят путем погружения их вместе с агаровой подушкой в концентрированный раствор метанола на. 2-72 ч, а после приклеивания к столику снимают поверхностную пленку и производит нанесение бороэдон на поверхности колонии на глубину 0,10,2 мм.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Статья Мамекова К. Ю. и др.—

Иэвестия АН СССР". Сер. биологическая," Наука, 1978, l4 6.

2. Большой практикум по.физиологии растений, И., «Высшая школа, 1978, с. 252-264.

Составитель А.. Макаров

Редактор Т. Веселова . Техред М.Рейвес Корректор Ю. Макаренко

Заказ 3863/6 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений..и.. открытий..

113035, Москва,.Ж"35, Раушская наб., д. 475

Ъ» « ° » ° « ° »

Филиал ППП «Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4