Ди-натриевая соль 2-(1,2,4-триазолил-3-азо)-1,8- диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты в качестве реагента для обнаружения белков при электрофорезе в полиакриламидном геле

Авторы патента:

ЮСУПОВ МАРУФДЖАН

СКРЕБЦОВА НИНА ВАСИЛЬЕВНА

КОПИЦЯ ТАТЬЯНА ПОРФИРЬЕВНА

КАСЫМОВА ГУЛЬЧЕРА ФАЙЗИЕВНА

КОРЯКИНА НЕЛЛИ ИЛЬИНИЧНА

БУРИЧЕНКО ВИТАЛИЙ КУЗЬМИЧ

Союз Советсиик

Социалистических

Респубпии

О П И С А Н И Е <,935506

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. санд-вувЂ”

{22)Заявлено 29.10.80 (2! ) 3228930/23-04 с присоединением заявки МвЂ” (23) Приоритет (51)М. Кл.

С 07 0 249/14

G 01 Н 33/50

9>еудвретаанныИ камитат

СССР ва делам изааретанкй и атарыткй

Опубликовано" 5 06 82 Бюллетень М 22 (53) УДК 5" 7.964. .4(088.8) Дата опубликования описания 17. 06. 82

М. Юсупов, Н. В. Скребцова, Т. П. Копиця, Г. Ф. Касымова, Н. И. Корякина и В. К. Буриченко

{72) Авторы изобретения

Институт химии им, В. И. Никитина (7 I ) Заявитель (54) ДИНАТРИЕВАЧ СОЛЬ 2- (1,2,4-ТРИАЗОЛИЛ-3-АЗО)-1,8-ДИОКСИНАФТАЛИН-3,6-ДИСУЛЬФОКИСЛОТЫ

В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ БЕЛКОВ

ПРИ ЭЛЕКТРОФОРЕЗЕ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ

ОК OH г у$ з $0ра

Изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно, к динатриевой соли 2-(1,2,3-триазолил-3-азо)-1,8-диоксинафталин -3,6-дисульфокислоты формулы

5 с которое может быть использовано в качестве реагента для обнаружения белков при электрофореэе в полиакриламидном геле.

Известно применение красителейамидового черного 10 Б (1), кумасси голубого R-250 (2), зеленого прочного (3 ) для обнаружения белков в полиакриламидных гелях.

Недостатками укаэанных красителей являются длительность процесса отмывания избытка красителя с геля, многократная смена раствора уксусной кислоты, трудность удаления фона, вызванного разложением красителя, что затрудняет количественную оценку белков депситометрированием и снижение качества анализа белков при длительном отмывании красителя. I

Цель изобретения - расширение ассортимента реагентов для обнаружения белков, обладающих улучшенными свойствами.

Поставленная цель. достигается динатриевой солью 2-(1,2,4-триазолил"

-З-азо)-1,8-диоксинафталин-3,6-ди-:, сульфокислоты общей формулы.

Соединение общей формулы получают азосочетанием диазотированного 3-амино-1,2,4-триазола с хромотроповой кислотой в уксусной среде. Азосочетание диазосоединения с хромотройовой кислотой проводят при эквимолярном соотношении исходных компонентов, или при незначительном избытке ди-,аэосоединения. с

Время отмывания фона красителя

Время проявления белковых зон,мин

Краситель

30-60

Кумасси голубой 15

R-250

15 ЮоО 5

ОРи

3 9355

Ниже приводятся конкретные примеры получения и использования динатриевой соли 2-(1,2,4-триаэолил-3-азо)-1,8-ди оксинафталин-3,6-дисульфокислоты в качестве реагента для обнаружения бел ков при электрофорезе в полиакриламид ном геле.

R р и м е р 1 ° 1,68 г (О 02 моль.)

3-амино-1,2,4-триазола в 16 мл ледяной уксусной кислоты приливают к

1;16 г (0,02 моль) нитрата натрия в

7 мл концентрированной серной кислоты при температуре от 0 до 54С. Через

5 мин к смеси диаэотированного 3-амино-l 2,4-триазола приливают 7,28 г (0,02 моль) хромотроповой кислоты при быстром перемешивании и охлаждении.

Выпадает краситель темно-красного цвета. Получают 5,08 г динатриевой соли 2-(1,2,4-триазолил-3-азо- -1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты.

Краситель перекристаллизовывают на

754 уксусной кислоты. Выход 51,74.

Найдено, l: С 28,97; Н 2,88, N 13,98

С оН Й Ь ОВ Na

Вычислено, 3: C 29,09; Н 2,22; и 14,14.

Пример 2. Использования соединения общей формулы в качест®е реагента для обнаружения белков в полиакриламидных гелях.

Динатриевая соль 1,2,3-триазолил-(3-азо-2)-1,8-динафталин-3,6-дисульфокислоты

Амидочерный 30-60 10 В

Формула изобретения

Динатриевая соль 2-(1,2,4-триазолип-3-азо)-1,8-диоксинафталин-3;6-дисульфокислоты формулы

ОК OH

3Ч = ЯЮ- Н.

06 а

Электрофореэ белков (альбумина и гистона ) в полиакриламидных гелях проводят по методу Панима и Чокли(41 в трубках диаметром 5 мм и высотой

100 мм, а также в блоке полиакриламидного геля размером (1х150xl50 мм).

После электрофореза гели окашивают

0,23-ным раствором красителя общей формулы в смеси метанол-вода-уксусная кислота(5:5:1). .Гели в трубках окрашивают в течение 16 ч, а в блокахвЂ” в течение 30 мин ° После 6 мин окрашивания на полиакриламидных блоках уже ясно видны окашенные белковые эоны.

Применение красителя общей формулы для обнаружения белков в полиакриламидных гелях позволяет определять белки при концентрации 10 - 10 Н и не требует отмывки геля от избытка красителя, что очень удобно при серийном анализе белков.

В случае же известных красителей амида-черного 10 Б и кумасси голубого R-250, проявление белковых зон в ПААГ требует более длительного времени, и необходимо длительное отмывание IlAAC от избытка красителя. что значительно удлиняет время анализа белков.

В таблице приведены результаты сравнения.предлагаемого красителя с известными. в качестве реагента для обнаружения белков при электрофореэе в полиакриламидном геле., Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Raymond S. Wang Y. J., Preparation and properties of acrylamIde

gel for use in electrophoresIs.Anal. 8iochem., 1960, ч.l, N 2, р.391

396.

5 935506 ь

2. Fenner С,, Traut R. R., полйакриламидном геле, М., "Мир", Mason О.Т., Wikman-Coffelt J. Quaniti- 1971, с. 90.

fication of coomassie blue stained

proteins 1п polyacrylamide gels based 4. Panyim S., Chalkley R., High

on analyses of eluted. dye. Anal Bio" s resolution acr 1 4 1 1

reso u on aery am e ge e ectropchem., 1975, ч.63, N 2, р.595-602. horesis of histones.- Arch. Blochem.

3. Маурер Г. Диск-электрофорез. and Biophys., 1969, v..130, N 2., Теория и практика электрофореза в h.337"346.

Составитель О. Галкин

Редактор А. Гулько Техред С.Мигунова Корректор 11 ° 111в"дкаЯ