Способ тестирования тератогенной активности химических веществ

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОЛ ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ8У

<»938946 (6l ) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заявлено 28.07.80 (21) 2966437/28-13 с присоединением заявки М (28) П рморитет (51)M. Кл.

А 61 В 16/00

G 01 N 33/48

Гоеударсткнный камнтет

СССР ко делам нее4ретеннй н вткрытнй

Опубликовано 30.06.82. Бюллетень М 24

Дата опубликования описания 30.06.82 (53) УДК 616-07 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. P. Бариляк, С, Ю. Козачук, Г. Т. Пнсько, Б. Н. Бычковский и П. И. Я нчук (71) Заявитель (54) СПОСОБ ТЕСТИРОВАНИЯ ТЕРАТОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ

ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ! о!

Изобретение относится к медицине, а именно к способу тестирования тератогенной активности факторов внешней среды химической природы (в том числе и лекарственных препаратов) .

Известен способ тестирования тератогенной . активности химических веществ, основанный на введении испытуемого вещества животным

-в разные сроки беременности без дополнительной нагрузки (1) .

Недостатком известного способа тестирования является то, что в ряде случаев не удается определить тератогенную активность у потенциальных тератогенных препаратов, так как они еюобладают в больших дозах, либо она проявляется в определенных условиях (например, нарушенное состояние материнского организма часто наблюдающееся у больных беременных женшинj.

Цель изобретения — повышение точности способа, а также одновременное вынвление тератогенных и эмбиотоксических свойств химических веществ.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа тестирования тератогенной активности химических веществ путем введения исследуемых веществ интактным беременным животным тестирование проводят на фоне алкогольной нагрузки, при этом в течение периода эмбриогенеза животным внутрижелудочно вводят этиловый спирт за 30—

60 мин доя воздействия испытуемого химического вещества.

Способ осуществляют следующим образом.

Беременным животным (крысам) в течение нескольких дней (с 1 — 10 rfo 13-й или с 10-го по 13-й день беременности) до введения испытуемого вещества вводят этиловый спирт в количестве 1 мл в виде 20%-ного водного раствора внутрижелудочно. Затем многократно или однократно в соответствующие сроки внутриутробного развития этим же беременным животным вводят испытуемое вещество, применяя необходимый способ введения. Учет результатов влияния испытуемого фактора на внутриутробное развитие производят в конце

Формула изобретения

Способ тестирования тератогенной активност и химических веществ путем введения исследуемых веществ интактным беременным животным, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, а также одновременного выявления эмбриотоксических свойств химических веществ, тестирование проводят на фоне алкогольной нагрузки, при этом в течение периода эмбриогенеза животным внутрижелудочно вводят этиловый спирт за 30 — 60 мин до воздействия испытуемого химического вещества.

Источники информации принятые во внимание при экспертизе

1. Методы экспериментального исследования по установлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования. М., МЗ СССР, 1977.

714 Подписное и улЛТроекгная. 4

3 93894 периода беременности или в соответствующие сроки постнатальной жизни, Пример . Исследовали влияние хлоридина (2,4-диамин -5- п-хлор-6-этилпиримидина), адреналина, тио ТЭФа и 2-меркаптобензимидазола на внутриутробное развитие крыс.

Хлоридин вводят внутрижелудочно в дозе

25 мк/кг внутрибрюшинно на 13-й день беременности (первым днем беременности считают день обнаружения спермиев во влагалищных 10 мазках после подсадки самок к самцам) 2—

° меркаптобензимидазол в дозе 30 мг/кг вводят внутрижелудочно с 10 по 13- день беременности. Учет результатов влияния указанных препаратов производят на 20-й день беременности с использование общелринятых тератологических методик.

В результате проведения опытов было установлено, что хлоридин и адреналин в испытуемых дозах не оказывают влияния на эмбриогенез, тиоТЭФ обладает слабым тератогенным действием: у 8,4% зародышей отмечены аномалии развития скелета и внутренных органов. Введение 2-меркаптобензимидазола в течение нескольких дней органогенеза не обуславливало тератогенного его действия, однако приводит к повышению числа погибающих на постимплантационных стадиях развития зародышей (26,4%).

Таким образом, использование общеприня30 той методики тестирования тератогенной активности позволяет выявить слабый тератогенный эффект лишь у тиоТЭФа, в то же время хлоридин, адреналин и 2-меркаптобензимидазол при такой постановке опытов в укаэанных дозах тератогенным действием не обладают.

В связи с этим возникает задача проверить наличие тератогенных свойств у испытуемых препаратов при предварительной алкогольной нагрузке. Этанол в виде водного

40 раствора (20%-го в объеме 1 мл вводят с

1-го по 13-й день беременности) в случае исследования тератогенных свойств 2-меркаптобенэимидаэола) или с 10-го по 13-й день беременности (при исследовании остальных препаратов). Спустя 30-.-60 мин после введения эталона вводили испытуемые препараты в указанных выше дозах и в соответствующие сроки беременности. Учет результатов производят аналогично как и в предыдущей серии (па

20-й день беременности).

Как показали результаты исследований, хлоридин в этих условиях обусловил возникновение аномалий развития у 40,8% эмбрионов,, причем уродства разви ия были типичными дчя дс.й< вил лаппого препарата в больших

ВНИИПИ Заказ 4524/10 Тираж

Филиал 11ПП "Патен1", i Уясгоргь

6 4 дозах (50 мг/кг): фокамелия, микроцефалия, экзофтальмия, гипо- и агнатия, экстродактилия, гидроцефалия, гидронефроз и др.

ТиоТЭФ на фоне алкогольной нагрузки вызывает аномалии конечностей и черепа у 33,80 плодов крыс, что в 4 раза больше по сравнению с действием одного тиоТЭФа, причем аномалии развития значительно сильнее выражены. Адреналин обусловил тератогенный эффект у 21,7% эмбрионов, причем следует отметить что при алкогольной нагрузке адреналин вызывает грубые аномалии черепа, костей грудины, ребер и др. 2-меркаптобенэимидаэол на фоне алкогольной нагрузки вызывает уродства развития внутренних органов и скелета у 33,8% плодов.

Следует подчеркнуть, что введение одного этилового спирта в объеме 1 мл с 1-го по

13-й день беременности не оказывает повреждающего . действия на эмбриогенеэ: уровень постим плантационной гибели зародышей (7,0 — 2,5%) не превышает контрольный уровень, ни у одного из 93 зародышей не отмечено аномалий развития. Аналогично воздействие этанола с 10-го по 13-й день беременности в приведенной выше дозе не оказывает тератогенной и эмбриотоксический эффект.

Таким образом, предварительная нагрузка этиловым спиртом с 1-ro по 13-й или с

10-го по 13-й дни беременности в нетоксической для зародышей крыс дозе значительно усиливает тератогенные и эмбриотоксические свойства химических веществ и повышает эффективность выявления этих свойств у химических агентов в малых дозах, в которых у интактных животных они не обладают таким действием.