Способ оценки активности аллергодерматозов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистических

Республик

<»>952217 ф г (61) Дополнительное к авт; свид-ву— (22) Заявлено 23. 07. 80 (21) 2959818/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет—

Р1 М К з

A 61 В 10/00

6 01 И 33/48

Государственный комитет ссс р ио делам изобретений и открытий

Опубликовано 230882. Бюллетень ¹ 31

{53) УДК 616-07 (088. 8) Дата опубликования описания 230882 (72) Авторы изобретения

Ю.С.Бутов, С.М.Зейни и A.P.Êóøåëåâ

C

2-й Московский ордена Ленина государств нный медицинский институт им. Н.И.Пирогова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ АЛЛЕРГОДЕРМАТОЗОВ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при оценке активности аллергодерматозов, Известен способ оценки активности аллергодерматозов путем количественного определения аминокислот .в плазме крови (1).

Однако известный способ не обеспечивает достаточной точности.

Целью изобретения является повышение точности способа. указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа оценки активности аллергодерматозов путем количественного определения ами- нокислот в плазме крови определяют концентрацию лизина в плазме и суммарную концентрацию.асцарагиновой кислоты и глютатиона в эритроцитах и по изменению величины отношения суммарной концентрации аспарагиновой кислоты и глютатиона в эритроцитах к концентрации лизина в плазме оценивают активность аллергодерматозов.

Пример . Больная М., 17 лет

Основной диагноз: диффузный нейродермит. Сопутствующих. — нет. Кожный процесс распространенный. Аналитическое определение аминокислот осуществляют по двухколоночному методу

Штейна-Мура на принципах ионообменной хроматографии с последующим окрашиванием раздельных компонентов в процессе нингидриновой реакции с количественной фотометрией окрашенных продуктов.

Объем необходимой для анализа венозной крови 10 мл. Забор из вены цитратной крови проводят по общепринятой методике. Разделение на плазму и эритроциты осуществляют, например, центрифугированием при

2 тыс.оборотов в минуту. После этого плазму отделяют от эритроцитов и проводят обработку их, в отдельности сульфасалициловой кислотой: плазму обрабатывают 50%-ным, а эритроциты — 4%-ным раствором этой кисло- ь ты. Тщательно перемешивают и центриФугируют. Надосадочную жидкость отсасывают и переносят в раздельные чистые пробирки. Затем дважды последовательно замораживают, оттаивают и центрифугируют. Элюат отсасывают и вводят в аминоанализатор.

Основные аминокислоты разделяют на колонке 150 мм к 9 мм, содержа-.

З0 щей катионообменную смолу "2611", 952217

Идентификацию аминокислот, полученных при проведении анализа, осуществляют по расположению пика соответствующей аминокислоты от начала хроматограммы в соответствии с анализом стандартной смеси аминокислот. Количественный обсчет содержания аминокислот в данном образце проводят по формуле

Х сто Н I43-0 25

С = К вЂ”вЂ”

q Sx,Ух вюзи

40 где С

Q к онцентр ация ами ноки слоты, выраженная в микромолях на 45 мл плазмы или эритроцитов; коэффициент, показывающий отношение площади норлейцина (SN0v) к площади любой аминокислоты, полученные при анализе стандартной смеси аминокислот (Sñò ); площадь норлейцина, добавленного в качестве внутреннего стандарта к исследуемой пробе; разведение образца, полученное в процессе подготовки пробы для анализа.

Как правило, для Плазмы 60

M = 1,1; для эритроцитов — 4; количество образца, введенного в прибор для анализа; 65 ст

К„

NOV элюирующим натрийцитратным буферным растнором с РН-3,25 и нормальностью

0,35. Кислые и нейтральные аминокислоты разделяют на колонке 500 ммк

«9 мм, содержащей катионообменную смолу "2612", с помощью последовательного элюирования натрийцитратными буферными растворами 1 и tT (T. — буферный раствор рН 3,25, 8Ъ этилового спирта, нормальность 0,2; П вЂ” бубуферный раствор РН 4,25, нормаль- 10 ность 0,2).

Проводят количественное определение разделившихся аминокислот на хроматограммах, полученных при непрерывной фотометрической регистрации15

I оптической плотности окрашенных продуктов нингидриновой реакции аминокислот при длине волны света

440 и 570 нм на точечном самописце, в сравнении с хроматограммами стандартных смесей аминокислот. Допустимая ошибка при работе на аминоанализаторе составляет ЗЪ.

Полученную хроматограмму расшифPOBb1BBI0T HB OCHOBBHHH данных, IIO 25 лученных при анализе стандартной смеси аминокислот и введенного внутреннего стандарта норлейцина (аминокислота, не встречающаяся в животных тканях).

0,25 — количество норлейцина в микромолях, введенное в анализируемый образец

Б — площадь любой аминокислоты, полученной по результатам анализа исследуемой пробы, подсчитывается по формуле

S = W° - Н, Но- Н вЂ” расстояние от нулевой линии бумаги до верхушки пика на хроматограмме;

Н вЂ” расстояние от нулевой лиВ нии бумаги до основания пика;

W — расстояние, равное половине ширины пика.

Распределение содержания аминокислот в пике в условиях данной методики соответствует Гаусову распределению, следовательно, оценку площади пика можно проводить по вписанному в пик треугольнику, так называемый HW-метод. где Н H О

В процессе лечения (больная получала кортикорропин по 20 ед., в течение 15 дней, седативные и антигистаминные препараты) кожный процесс улучшился, зуд и эритема разрешились. Наблюдалась инфильтрация кожи в виде остаточных проявлений в области локтевых сгибов и подколенных ямок. При повторном исследовании аминокислот крови отношение содержа: ния аспарагиновой кислоты с глютатином в эритроцитах к лизину плазмы

1,338 составило †- -д- -, коэффициент, соотI ветственно 7,392.

Для того чтобы найти И провср,-.т линию, параллельную нулевой линик бумаги, через точку, лежащую на середине высоты пика. Это расстояние равно (1/2Н+Н ) . После проведения линии подсчитйвают количество промежутков, заключенных между точками, располагающимися над линией. Так как точки на хроматограмме ставят через равные промежутки времени, то подсчитанное количество точек может служить оценкой ширины пика в условных единицах. Для всех аминокислот (кроме пролина) подсчитывают количество промежутков по красной линии (для пролина — по синей).

Кровь была исследована трижды на

2,7,20 сут. На вторые сутки при первом исследовании аминокислот крови (до начала лечения) отношение аспарагиновой кислоты с глютатионом в эритроцитах к лизину в плазме

О, 700 — что выражалось в. коэффициен9 те, равном 3,608.

952217

Группы

Количество больных

Активное течение

Неактивное теченИе

4,227+1,995

8,139+1,117

10

Количество больны х

Группы

Контрольная группа

Нейродермит

10 12,041+1,133

Активное течение

16 3, 704+1, 203

Неактивное течение экзема

12 10,595+2,273

Составитель P.Kàòîñoâà

Редактор Н.Гунько Техред М.Тепер Корректор О.Билак

Заказ 6001/6 Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5.Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4

Через 9 дней наступило клиническое выздоровление. Аминокислотный

1, 295 коэффициент составил †- = 6,573.

0, Больная выписалась из отделения.

Стойкая ремиссия наблюдалась в течение 7 мес. Показатели аминокислотного коэффициента оставались высокими °

Анализ полученных результатов позволил по величине аминокислотного коэффициента диагностировать активность патологического процесса.

Показатели аминокислотного коэффициента (Х + 0 ) и актив ность аллергодерматозов представлены в таблице..Предложенный способ позволяет с высокой точностью диагностировать активность аллергодерматозов и более эффективно оценивать качество терапии.

Формула изобретения

15: Способ оценки активности аллергодерматозов путем количественного определения аминокислот в плазме крови, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения точности спо20 соба, определяют концентрацию лизина в плазме и суммарную концентрацию

-аспарагиновой кислоты и глютатиона в эритроцитах и по изменению величины отношения суммарной концентрации ас25 парагиновой кислоты и глютатиона в эритроцитах к концентрации лизина в плазме оценивают активность аллергодерматозов.

Источники информации, ЗО принятые во внимание при экспертизе

1. Кряжева С.С., Марголина Н.И., Дукарский Ф.T. Обмен аминокислот у больных ихтиозом и нейтродермитом.

Вестник дерматологии и венерологии".

1977, 9 7, с.28-32.