Способ получения фосфатидилхолинов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (ii) 957908 (61) Дополнительное к авт; свид-ву— (22) Заявлено 251180 (21) 3210762/28-13 с присоедииением заявки №(23) Приоритет—

Опубликовано 15.09.82. Бюллетень ¹ 34

Р М К з

A 61 К 35/50

Государственный комитет

СССР но делам изобретений н открытий ($3) УДК 615. 45: . 615. 34 (088. 8) Дата опубликования описания 15. 09. 82 (72) Авторы изобретения

Т. К. Митрофанова и P. П. Евстигнеев .а..М

Московский ордена Трудового Красного Зка тонкой химической технологии им. М. B. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФАТИДИЛХОЛИНОВ

Изобретение относится к .химии природных соединений и касается тех. нологии производства фосфолипидов °

Известен способ получения фосфатидилхолинов из спинного и головного мозга крупного рогатого скота и свиней, включающий иэмельчение исходного сырья,его обеэвсживание последовательную экстракцию .ацето-, .ном и этанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение целевого продукта Г13 °

Однако известный способ не обеспечивает выделения продукта с достаточно высоким выходом (20Ъ) и чистотой.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта и его чистоты.

Поставленная. цель достигается тем, что в способе получения фосфатидилхолинов из спинного и головного мозга крупного рогатого скота и свиней, включающем измельчение исходного сырья, его обезвоживание, последовательную зкстракцию ацетоном и этанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение целевого продукта отличие состоит в том, что обезвоживание сырья осуществляют методом лиофильной сушки при 4 от 0 до 50оС, а очистку полученного экстракта проводят по5 этапной кристаллизацией при температуре от -20 до О C с последующей хроматографией на колонке с окисью алюминия.

Пример 1. Измельченный спин19 ной мозг крупного рогатого скота (10 кг ) в виде пасты намазывают на протвини слоем 10-12 см, замораживают и затем лиофильно высушивают при температуре от -15 до -20оС и давлении 0,1 мм рт. ст. Выход обезвоженного мозга 3,3 кгпв содержание влаги 1%.

В производственных условиях сушка мозга манжет быть проведена в суб20 лимационных установках различных типов при температуре от 0 до -50оС.

К 100,00 r лиофильно высушенного .мозга добавляют 300 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при

20-25 С в течение часа.- Ацетоновый экстракт отфильтровывают. K остатку приливают 250 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при 2025оС в течение часа. Таких зкстракций проводят 5. Из объединенного экстракта после отгонки растворите957908

S5

65 ля в вакууме (10 мм) и двухкратной перекристаллизации из этанола выход холестерина 13,96 г (13,96%)от сухого веса мозга). Жмых после извлечения холестерина сушат в вакууме (1 мм ), получают 75, 4 г (75, 4% от сухого веса мозга). Жмых 50,0 r экстрагируют 150 мл 96%-ного этано" ла в течение часа при 50О С. Экстракт отфильтровывают. Таких экст— ракций проводят четыре, объединенные экстракты охлаждают до 20 С и выдерживают при этой температуре в течение 10 ч. Выпавший в осадок концентрат. сфинголипидов отфильтровывают и высушивают в вакууме (1мм).

Выход концентрата сфигнолипидов

10,90 г (21,8% от веса жмыха,16,4% от сухого веса мозга ), содержание основного вещества 81,.0%, и том числе цереброзидов 73,2%, сульфатидов

7, 8% . Маточный" раствор охлаждают до О С. и выдерживают при этой температуре 10 ч. Осадок отфильтровывают и высушивают в вакууме (1 мм).

Выход концентрата фосфатидилэтаноламинов 5,53 г (11;1% от веса жмыха, 8,4% от сухого веса мозга ), содержание основного вещества 80,5%. Изматочного раствора удаляют этанол в вакууме (10 мм ). Остаток растворяют в 600 мл смеси дихлорэтанэтанол, 95:5. Раствор перемешивают с 200 r окиси алюминия ф степени активности по Брокману в течение часа и декантируют. К адсорбенту приливают

600 мл дихлорэтан-этанол, 95:5„ перемешивают в течение часа. Эту процедуру повторяют 4 раза. Объедичен. ный раствор перемешивают в течение часа со свежей порцией окиси алюминия (200 г), фильтруют. Адсорбент промывают этанолом 3 раза по 600мл.

Раствор декантируют, добавляют окись алюминия. после второй обработки, перемешивают 15 мин. После декантации раствора адсорбент перемешивают с 300 мл этанола и фильтруют

Все спиртовые растворы объединяют, этанол отгоняют в вакууме (10 ьж) .

Выход фосфатидилхолинов 2,9 г (5,8% от веса жмыха, 4,4% от сухого веса мозга), содержание основного вещества 92,5%, перекисное число 0,02. !

Пример,2. Измельченный с помощью мясорубки парной или дефростированный головной моз r крупного рогатого скота (3,0 кг) лиофильно высушивают при температуре от -10 С о до -15ОС и давлении 0,1 мм рт. ст.Выход обезвоженного мозга 0,9 кг; содержание воды 5,2%. Лиофильно высушенный мозг (500,0 г) перемешивают с 1500 мл ацетона в течение

1 ч при 18-20ОС. Таких экстракций проводят пять. Объединенный экстракт упаривают в вакууме досуха, остаток дважды перекристаллизовывают из

95%"ного этанола, нолучают 43,3 r холестерина (9,1% от сухого веса мозга, 86,0% от содержания холесте-.

5 рина в головном мозге). Жмых после извлечения холестерийа сушат в вакууме (1 мм рт. ст.), получают

393,0 г (83,2% от сухого веса мозга ) материала,50,0 r которого экст-

1О рагируют 300 мл 96%-ного этанола в течение 1 ч при 50ОC. Экстракт фильтруют через стеклянный пористый фильтр 9 3 способом обратного фильтрования., Твердый остаток еще трижды экстрагируют указанным. методом. Все полученные экстракты объединяют и выдерживают 10 ч при 20 С. Выпавший осадок, представляющий собой концентрат сфинголипидов, отфильтровывают в вакуумном эксикаторе над едким кали до постоянного веса. Выход концентрата сфинголипидов 8,3 г ,(16 6% от веса жмыха, 13,8% от сухого веса мозга), содержание основного вещества 82,3%. Маточный раст вор выдерживают 12 ч при OOC, оса- док отфильтровывают на стеклянном фильтре 9 3 и сушат в вакуумном эксикаторе над едким кали, получают

4,2 r концентрата фосфатидилэтанол30 аминов (8,3% от веса жмыха, 6,3% от сухого веса головного мозга), содержание основного вещества 79,9%.

Фильтрат упаривают в вакууме (10 мм) досуха, остаток растворяют в 200 мл

35 смеси хлористый метил-этанол (95:5 по объему), раствор помещают в хроматографическую колонку (50x4 см), заполненную 500.г окиси алюминия (нейтральная, активность Й ) в той

40 же смеси растворителей. Колонку промывают последовательно 1200 мл указанной смеси растворителей и

2000 мл этанола. После упаривания спиртового алюата в вакууме полу45 чают 4,9 г концентрата фосфатидилхолинов (9,8% от веса жмыха, 7,8% от сухого веса мозга ), содержание основного вещества 91,9%, перекисное число 0,01), 50 По аналогич методик получают. концентраты фосфатидилхолинов из спинного и головного мозга свиней.

Таким образом, по сравнению с известным способом содержание фосфатидилхолинов в целевом продукте увеличивается с 17-20% до 90-94%.

Уменьшается содержание токсичных и канцерогенных перекисей (перекисное число не выше 0,03). Предлагаемый способ представляет собой комплексную технологическую схему выделения органопрепаратов из нервных тканей сельскохозяйственных животных и позволяет с достаточно

957908

Формула изобретения

20

Составитель В. Брусиловская

Редактор Т. Парфенова ТехредМ.Надь- Коррект.ор Е. Рошко

Заказ 6652/7 Тираж 714

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4 высокими выходами получать наряду с фосфатиднлхолинами выход 4,34,5% от сухого веса мозга с достаточно высокими выходами получать и 98%-ный холестерин выход(13,313,8% ), 78,81%-ный концентрат сфинголипидов выход(8,6-8,9%), 8082%-ный -концентрат фосфатидилэтаноламинов; (выход 5,9-6,2%) и белковый гидролизат, содержащий до 50% незаменимых амйнокислот (выход 1718%).

Способ получения фосфатидилхолинов из спинного м головного мозга крупного рогатого скота и свиней, включающий измельчение исходного сырья, его обезвоживание, последовательную зкстракцию ацетоном и .этанолом, последующую очистку полученного экстракта и выделение целевого продукта, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и его чистоты, обезвоживание сырья осуществляют методом лиофильной сушки при от 0 до 50ОC а очистку полученного экстракта проводят поэтапной кристаллизацией при температуре от -20 до ООС с последующей хроматографией на колонке с окисью алюминия..

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Гуров В.A., Иноземцев М.A., Замиховский А.Б. Справочник по производству органопрепаратов. М., "Пи. щевая промышленность", 1970; с. 137-139.