Штамм рsеudомоnаs acruginosa 590,1650-продуцент алкалоида фенилтиазолового ряда

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (1)960260 (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 170780 (21) 2966198/28-13 с присоединением заявки ¹â€” (И) М. Кд.з

С 12 P 11/00//

С 12 P 11/00

С 12 Ц 1/385

Государстееииый комитет СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет— (Щ УДКМ78. 044, . 29 (088. 8) Опубликовано 230982. Бюллетень ¹.35

Дата опубликования описания 230982

Д. К. Огай, Ш. Мусаев, В.К.Шврбакова, А. Зуннунд3канбв " Г и Э.Нуримов 1

;, ) < (f Ä ; у г Р. ;.) А (< Г"; " (, (° " ее

Институт микробиологии AH Узбекской ССР (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) ШТАММ PSEUOOMONAS AERUGINOSA 590, 1650

ПРОДУЦЕНТ АЛКАЛОИДА ФЕНИЛТИАЗОЛОВОГО

РЯДА

Изобретение относится к микробно логии и касается получения штаммов

Pseudomonas aerueinosa - продуцентов алкалоидов.

Известен штамм Pseudomonas aerueinosa — поодуцент-алкалоидов хинолинового ояда.

Однако известный штамм не продуцирует алкалоиды фенилтиазолового ряда ..

Целью изобретения является получение штамма Pseudomonas aeruginosa - продуцента алкалоида фенилтиазолового ряда.

Штамм Pseudomonas aeruginosa 590 выделен путем обработки нитрозогуани мидином .ïðîòîòðîôíoé культуры дикого типа .Pseudomonas aeruginosa mz.

A-197.. После повторной обработки нитрозогуанидином триптофаннедостаточного мутанта 736внйелен цевертант 590.

Штамм Pseudomonas aeruginosa 590, 1650 — продуцент алкалоида фенилтиазолового ряда хранится в коллекции культур микроорганизмов ВНИИА.

Морфология. Палочки с ровными краями, длина клеток 1,5-3 мкм, ширина

0,6-0,8 мкм. Окрашивается по Грамму отрицательно, подвижен, спор не образует. Размножается делением.

Физиологические признаки. Аэроб.

Оптимальная температура роста 32-37 С, максимальная 42, 5 С, рН среды

7,0-7,8.

Культуральные признаки.

Колонии на мясо-пептонном агаре (поверхностные) круглые, размерам 2, 5-3 мм. Край зубчатый, .Поверкность шероховатая, колонии плоские с зернистой структурой, эеленЬватожелтого цвета„.

На пептонно-кукурузном агаре колонии поверхностные, круглые, размером 2,5 -5,0 мм, край ризоидный с шероховатой поверхностью, выпуклый (конусовидный) с мелкозернистой структурой молочного цвета.

Мясо-пептонный бульон. Поверхностный рост. Колъцеобраэная пленка.

Муть сильная, однородная. Осадок средний, хлопьевидный, образует желто-зеленый флюоресцирующий пигмент.

Среда Люкнера. Поверхностный рост, Пленки нет. Муть сильная, равномерная. Осадок средний, хлопьевидный.

Нра выращивании без встряхиваний цвет светло-коричневый, при фермен®О тации на качалке - синевато-зеленый.

960260

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред М. Гергель Корректор E. Рошко

Редактор Л.Лукач

Заказ 7149/31 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

О тношение к углеводам. Сбраживает глюкозу, галактозу, левулезу. Усваивает слабо сахароэу, хорошо - маннит, мальтозу, глицерин, Крахмал не гидролизует,клетчатку не разлагает. Желатину разжижает послойно через

7.сут. На картофеле рост обильный, пигментация зеленовато-синяя.

Молоко пептониэирует полностью без изменения реакции среды.

Сероводород и индол на белковых 36 средах не образует.

Нитраты восстанавливает.

Культура образует новый алкалоид, обладающйй биологической активностью., HC "СНАМОМ 20

СН

П р и м.е р 1. Суточную культуру,» выращенную на скошенном мясо-пептонном или пептонно-кукурузном arape пересевают петлей в пробирку с жидкой питательной средой того же состава. через 16-18 ч роста культуру используют для прививки 100 мл питательной среды, помещенной в колбу

Эрленмейера на 500 мл. 30

Питательная среда имеет следующий состав, г/л: лактат аммония (40%)

19,0) КНуРО 1,0, NgSO4 0,5; кукурузный экстракт 2,0; глюкоза в виде . 40Ъ-ного р ; вода дис- 3$ тиллированная 900 мл, рН 7,0-7,1.

Культуру встряхивают при 354 1 С в течение 7 дней на круговой качалке при 150 об/мин ° 100 мл культуры подщелачивают 10%-ным аммиаком до рН 8-9 и экстрагируют хлороформом в соотношении с фильтратом 1 3.

Хлороформенные экстракты наносят для разделения на;"колонку с силикагелем марки ЛС 100/160 м в соотношении. 1s50. Элюируют алкалоид из колонки этилацетатом.

Вещество кристаллизуют в гексане.

Количество выделяемого алкалоида определяют весовым методом. Полное содержание алкалоида в культуре составляет 50-100 мг/л.

Hp и м е р 2. Штамм и жидкая питательная среда те же, что в примере 1.

Из пробирки культуру используют для прививки шести колб Эрленмейера на 750 мп, содержащих по 20 мл питательной среды Люкнера с кукурузным экстрактом. Культуру выращивают 24 ч на круговой качалке. После этого 1,2 л полученного таким образом материала используют для инокуляции 40 л питательной среды, помещенной в 100-литровый ферментер. Ферментацию культуры проводят в течение 72 ч при 35+1 С при перемешива- нии 400 об/мин и насыщении воздухом со скоростью. 2 л/мин. Содержание .сухой биомассы достигает 5-6 г/л.

Количество алкалбида в культуре

10-20 мг/л.

Предложенный штамм позволяет продуцировать новые алкалоиды фенилтиазо лового ряда, обладающие биологической активностью.

Штамм Pseudomonas aeruginosa 590, 1650 (коллекция культур микроорганизмов ВНИИА) - продуцент алкалоида фенилтиазолового ряда.