Способ очистки молокосвертывающего ферментного препарата из мuсоr pusillus,мuсоr мiснеi

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических .Республик

<1962303 (6!) Дополнительное к авт. свид-ву

{22) Заявлено 25. 12. 80 (2! ) 3225542 28-13 с присоединением заявки HP (23) Приоритет

Опубликовано 300982, Бюллетень HP 36

Р1 М К з

С 12 N 9/58

Государственный комитет

СССР яо делам изобретений и открытий

133) УДК 577.15 (088. 8) Дата опубликования описания 30. 09. 82 (72) Авторы изобретения

К.А ° Калунянц, Т.А. Смирнова, В.М. Денис

P. Джалмухамедова, А.П. В1арапов и Н.П. Шу

Московский ордена Трудового Красного Зна технологический институт пищевой ироьышл

{7!) Заявитель (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ МОЛОКОСВЕРХЫВАОЩЕГО

ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ИЗ NUC0R

PUS I 11U$, NUC0R NICHEl

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при получении микробных заменителей сычужного фермента, для очистки молокосвертывающего фермента от целлюлозолитических, липолитических примесей и снижения бактериальной обсемененности в препаратах микробного реннина, полученных из культуры грибов Nucor pusillus, Nucor michei.

Известен способ очистки молокосвертывающего ферментного препарата из Nucor pusillus, Nucor michei путем обработки его раствора бентони" том, затем проводят фракционирование этанолом в количестве от 0,5 V до 2,5Ч (1).

Однако данный способ очистки не обеспечивает удаления целлюлозолитических и липолитических примесей.

Кроме того, получаемые по этому способу молокосвертывающие препараты загрязнены бактериальной микрофлорой, ухудшающей их качества. Бактериальная микрофлора загрязняет готовые сыры ь. оказывает побочное. неуправляемое действие на вкусовые качества и физические свойства сыров при длительном хранении. целлюлазные примеси, содержащиеся в получаемых препаратах, оказывают разрушающее действие на хлопчатобумажные прессы используемые в сыроделии для формирования сыров.

Липолитические ферменты также оказы вают отрицательное действие на процесс изготовления сыров. С действием липаз на жиры молока увеличивается содержание свободных жирных кислот в молочной сыворотке и сгустке, уменьшается выход сыра, развивается более пресный вкус сыра и изменяются физические, характеристики сыров.

Цель изобретения — удаление липазных и целЛюлозных примесей и снижение бактериальной микрофлоры в препаратах Реннинопузиллин и Ренниномиин.

Указанная цель достигается способом очистки молокосвертывающего ферментного препарата иэ Nucor pusillus, Nucor michei, включающим обработку водного раствора ферментного препа рата бентонитом и фракционирование этанолом при соотношении объемов

25 этанола и обрабатываемого раствора (0,5-2,5):i причем после обработки беитонитом ферментный раствор вццерживают при рН 2,8-3,0 в течение 2040 мин,затем подвергают тепловой об30. работке при 50-55 С и рН 5,5-6,0 в

962303 течение 10-20 мин, после чего в раствор добавляют перекись водорода до концентрации 0,05-0,4% и выдерживают при той же температуре в течение 1020 мин.

Пример. К 100 мп 5,0%-ного 5 водного раствора технического препарата Реннинопуэиллин добавляют 2 r бентонита и перемешивают 20 мин. Отработанный бентонит и нерастворимый материал отделяют центрифугировани-, О ем при 3000 об/мин 20 мин. В полученном растворе доводят рН до 2,8 добавлением 2,0 М HCl, раствор выдер. живают 30 мин, затем к раствору .добавляют 2,0 М NaOH до рН 6,0 и раст..вор нагревают до 59 С. При этой температуре ферментный раствор выдер/

Активность

Молокосвертыва». Пиполитичесющая кая

Способ

Содержание спор

Целлюлозо литическа ед/г ..% ... . ед/г. ..%... ..ед/г спор/г

64,0. 100 11,7 100

12х10

Обработка

0,2%-.ной Н О

60,2 94 8,85 79,5 2х10

140000 99,5

Обработка

0,2%-.ной Н О, 55 . С

lх10

140000 99 5

36,0

56„,2 Следы 1, 2

Обработка

О, 2%-.ной . Н О, рК 2 8-.6,0, 55 С

139000 98,6 0

Молокосвертывающую активйость оп- ределяют по времени свертывания 10% раствора сухого, обезжиренного молока, восстановленного в 0,01 М СаС1 при рН 6,5 и .35 С. 45

Липолитическую активность измеряют по выходу титруемых жирных кислот, образовавшихся в результате ферментативной реакции с пастеризованными молочными сливками (25% жирности) в присутствии 0,01 М СаС1 при

35 С в течение l ч. Эа единицу липолитической активности принимают такое количество фермента, которое приводит к образованию свободных жирных кислот при ферментативной реакции в течение l ч при 35 С эквивалентное при титровании 1,0 мп

0,05 M NaOH.

Целлюлозолитическую активность измеряют по выходу редуцирующйх :са- @ харов при ферментативном гидролизе

2,0% Na-КМЦ в 0,1 М Na-ацетатном буфере рН 5,0 при 35 С. Количество редуцирующих сахаров определяют методом Шомодьи-Нельсона. За одну едиФормула изобретения

Способ очистки молокосвертывающе-. го ферментного препарата иэ Mucor

$5 pusillus, Mucor michel, включающий

Контроль (препа-. рат, полученный по прототипу) 141000 100 живают 15 мин и затем добавляют

1,0 мп 25%-ной Н О, после чего выдерживают при 55 С в течение 15 мин.

После охлаждения к. раствору добавляют 50 мл (0,5Y) этанола, балластный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин, а затем к супернатанту добавляют 250 мп (2,5V) этанола. Образовавшийся осадок собирают центрифугированием при 3000 об/мин в течение 15 мин:и сублимационно высушивают. Аналогично данному примеру проводят процесс очистки с препаратом Ренниномиин.

Сравнительные данные препаратов, полученных предлагаемым и известным способами, приведены в таблице., 0 0 0 lх10 ницу целлюлозолитической активности принимают такое количество фермента, которое приводит к образованию 1 мкм глюкозы в течение 1 мин при 35ОС при действии на субстратнатриевую соль КМЦ.

Количество бактерий в препаратах устанавливают высевом на чашки Петри с MGA и просчетом количе"тва колоний о после термостатирования при 35 С в течение 2 сут.

Использование предлагаемого способа позволяет избирательно инактивировать примеси липолитических и целлюлозолитических ферментов в технических препаратах Ренниномиин и

Реннинопузиллин. и проводить дополнительную обработку по снижению бакте1риальной обсемененности в прейаратах в 100-150 раэ.

962303

Составитель O. Скородумова

Редактор Л. Пчелинская Техред 3. Палий Корректор С. ше кмар

Заказ 7428/37

Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по, делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 обработку его водного раствора бентонитом и фракционирование этанолом при соотноыении объемов этанола и обрабатываемого раствора (0,5-2,5)г1, отличающийся тем, что, с целью обеспечения очистки от приме-,3 сей целлюлазы, липаэы и снижения бактериальной зараженности, ферментный раствор после обработки бентонитом выдерживают при рН 2,8-3,0 в течение 20-40 мин, затем подвергают тепловой 10 обработке при 50-55>С и рН 5 0-6,0 в течение 10-20 мин, после чего в раствор добавляют перекись водорода до концентрации 0,05-0,4В и выдерживают при той же температуре в течение 1020 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР по заявке В 2758198 /28-13, кл. С 12 D 9/58, 1979.