Способ получения пролактина

 

Союз Соввтс них

Социалистичвскик

Рвсвублик

onисАнИВ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (i ii 971342 (61) Дополнительное к ввт. свнд-ву (22)Заявлено 01.04.81 (2!) 3260602/28-13 (51)М. Êë. с присоединением заявки М

А 61 К 37/32

Рйфдвретюны5 квинтет

СССР ао девам изобретение н открытия (23) Приоритет

Опубликовано 07. 11. 82. Бюллетень М 41

Дата опубликования описания 07.11.82 (53) УДК 615.45.: :615.361.814. 3 1 (088. 8) Г. К. Коротаев, Е. И. Кандыба, С. А. Ланге, Н. P. Палеев и В. С. Стрижков (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт технологии кровезаменителей и гормональных препаратов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОЛАКТИНА

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается получения лекарственных средств из сырья животного происхождения.

Известен способ получения пролактина, включающий экстракцию гипофизов свиней или крупного рогатого скота, осаждение сырца гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного рас о твора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, элюирование гормона и выделение целевого продукта 11.

Однако известный способ трудоемок (250 ч) и не обеспечивает получение гормона достаточно высокой активности (30 ЕД/мг).

Целью изобретения является упрощение технологического процесса и повышение активности целевого продукта.

Поставленная, цель достигается тем, что в способе получения пролактина включающем экстракцию гипофизов свиней или крупного рогатого скота, осаж-. дение сырца-гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного раствора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе, элюирование гормона и выделение целевого продукта, к раствору сырца гормона добавляют уксусную кислоту до рН

5,0-5,5, образовавшийся осадок после его отделения растворяют в воде, к полученному раствору добавляют водный раствор аммиака до рН 7,0-8,0, очистку на ДЭАЭ-целлюлозе проводят из 0,253ного раствора ацетата аммония, а элюирование осуществляют 0,53-ным раствором ацетата аммония, в полученном элюате устанавливают рН 5,0-5,5 и полученный осадок промывают спиртом.

П р и и е р 1. 100 r кислого .аце,тонированного порошка, полученного из

3,6 кг гипофизов свиней; растворяют в

Формула изобретения

3 9713

10 л 0,63-ного раствора уксусной кис" лоты и к раствору добавляют около

100 мл 123-ного водного раствора аммиака до pH 5,0 . Осадку дают сформироваться в течение 2 ч при комнатной температуре, затем надосадочную жидкость декантируют, осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкость используют для получения кортикотропина (АКТГ), а осадок растворя- 10 ют в воде при рН 9,0-9,5 (добавляя раствор аммиака), затем устанавливают рН 7,0 (добавляя уксусную кислоту)и оставляют для формирования осадка на

10-12 ч. Осадок балластных белков от- 35 деляют центрифугированием, а в растворе устанавливают рН 5,0 (прибавлением уксусной кислоты) . Через 10- 12 ч осадок отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат в вакуум- ур сушильном шкафу, Выход сырца составляет 10 г. 2 г сырца растворяют в О, 1 л воды при рН 9,5, затем устанавливают рН

7,7 (прибавлением уксусной кислоты) 2s и отделяют осадок балластных белков.

В растворе устанавливают рН 5,0 (уксусной кислотой), выпавший осадок отделяют, растворяют в 1,0 л 0,253-ного раствора ацетата аммония при рН 8,2. зо

Раствор пропускают через колонку, наполненную 10 мл ДЭАЭ-целлюлозы. По окончании сорбции колонку промывают

20 мл 0,253-ного раствора ацетата аммония (рН 8,2), а затем 70 мл 0,53ного раствора ацетана аммония с рН

8,3. Во фракции, элюирующейся 0,53ным раствором, доводят рН до 5,0 (уксусной кислотой) и оставляют для формирования осадка на 10 ч при 5 С. По- о о лученный осадок промывают спиртом, ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Активность полученного пролактина 40 ЕД/мг. !

Пример 2. 100 г кислого ацето45 нированного порошка, полученного из

6,7 кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота, растворяют в 10 л .0,6 -ного раствора уксусной киспоты и к раствору добавляют около 120 мл 12i-® ного водного раствора аммиака до рН

5,5. Осадку дают сформироваться в течение 2 ч при комнатной температуре, затем надосадочную жидкость декантируют,.осадок отделяют центрифугирова- >> нием. Надосадочную жидкость используют для получения кортикотропина, а осадок растворяют в воде при pFI 9,0-9,5, 42 4 затем устанавливают рН 7,5 и оставляют для формирования осадка на 10- 12 ч.

Осадок балластных белков отделяют центрифугированием, а в растворе устанавливают рН 5,5 (прибавлением уксусной кислоты). Через 10-12 ч осадок отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Выход сырца составляет 10 г.

2 r сырца растворяют в О, Г л воды при рН 9,5, затеи устанавливают рН

7,5 и отделяют осадок балластных белков. В растворе устанавливают рН 5,5, выпавший осадок отделяют, растворяют

s 1,0 л 0,253-ного раствора ацетата аммония (рН 8,2), затем пропускают через колонку, наполненную 10 мл ДЗАЭцеллюлозы. По окончании сорбции колонку промывают 20 мл 0,253-ного раствора ацетата аммония, а затем 70 мл 0,53 ного раствора ацетата аммония с рН

8,2. Во фракции, элюирующейся 0,53ным раствором, доводят рН до 5,5 (уксусной кислотой) и оставляют для формирования осадка на 10 ч при 5ОС. Полученный осадок промывают спиртом, ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу. Активность полученного пролактина составляет 37 ЕД/мг.

Предлагаемый способ позволяет упростить технологический процесс за счет исключения таких операций как гельхроматография, диализ, лиофильная сушка и сократить продолжительность процесса с 250 ч до 80 ч, а также повысить в 1,5-2 раза активность препарата.

Высокая степень чистоты препарата позволяет расширить спектр его применения в медицине.. Способ получения пролактина, включающий экстракцию гипофиза свиней или крупного рогатого скота, осаждение сырца гормона органическим растворителем, его растворение, последующее отделение из полученного раствора балластных веществ, очистку с помощью хроматографии на ДЗАЭ-целлюлозе, элюирование гормона и,выделение целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения технологического процесса и повышения активности целевого продукта, к раствору сырца гормона добавляют уксусную кислоту до рН 5,0-5,5, образовавшийся осадок после его отделения растворяют в воде, к полученному раствору добавляют вод971342 4 и полученный осадок промывают спир том.

Составитель 8. Брусиловская

Техред А. Ач Корректор Н. Король.

Редактор Г. Прусова

Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 8770/1 l

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

S ный раствор аммиака до рН 7,0-8,0, очистку на ДЭАЭ-целлюлозе проводят из

0,253-ного раствора ацетата аммония, а элюирование осуществляют 0,53-ным раствором ацетата аммония, в получен- 3 ном weave устанавливают рН 5,0-5,5

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.1. Патент Англии N 1083855, кл. А 5 В, опублик. 1967 (прототип)