Питательная среда для культивирования светящихся бактерий
Союз Советских
Социалистических
Республик
О П И С А Н И Е »973614
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свкд-ву (22) Заявлено 29.04.81 (21) 3281527/28-13 с присоединением заявки ЭЙ— (23) Приоритет (5! )М. Кл.
С 12 N 9/02
3Ьоударстмнимй комитет
СССР ио лелем изобретений и открытий
Опубликовано 15.11.82. Бюллетень Р642
Дата опубликования описания 15.)1.82 (53) УДК 663.15 (088.8) 1 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СВЕТЯЩИХСЯ
БАКТЕРИЙ
1О
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выращивания: светящихся бактерий — продуцептов фермента люциферазы.
О
Известна питательная среда для выращивания светящихся бактерий Beneckea harveyi для получения люциферазы из биомассы этих бактерий, состоящая из следующих компонентов: 5 г бактотриптона (Difco), 0,5 г дрожжевого экстракта (Difco), 2 мл глицерина, 200 мл дистиллированной воды, 800 мл морской воды (1).
Однако данная среда не обеспечивает достаточно высокого уровня содержания люциферазы в биомассе бактерий. Удельное содержа15 ние люциферазы в этой биомассе мило и составляет 0,98 отн.ед/опт.ед.
Наиболее близкой по технической сущности к предложенной является среда для выращивания светящихся бактерий следующего состава, г/л: ИаС! 28,0-30,0; Na2 НРО4 12 Н20
8 0 10>01 КН2 Р04 l 0 1 1 у (NH4 ) g НР04
0,50 — 0,55; МАЗО, 711, О 0.08 — 0,12; глицерин
3,4 — 3,6, бактопептон 5,0 — 5,5, дистиллированйая вода до 1 литра (2).
Однако эта среда не обеспечивает достаточно высокий уровень содержания люциферазы в биомассе бактерий. Удельное содержание люциферазы в биомассе бактерий составляет
4,7 отн.ед./опт.ед.
Цель изобретения — повышение выхода бактериальной.люциферазы с единицы биомассы.
Поставленная цель достигается тем, что питательная среда, для культивирования светящихся бактерий, содержащая натрий хлористый натрий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, аммоний фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокислый, глицерин, бактопептон, дистиллированную воду, дополнительно содержит фенобарбитал в количестве 0,2 — 1,0 г/л при следующем соотношении компонентов, г/л:
Фенобарбитал 0,2 — 1,0
Натрий хлористый 28,0 — 30.0
973614 4 ницы биомассы светящихся бактерий почти в 2 раза по сравнению с прототипом.
8,0 — 10,0
Натрий. фосфорнокислый однозаме щенный 8,0 — 10,0
Калий фосфорнокислый одно замещенный 10 — 1,1
Аммоний фосфорнокислый одно замещенный 0,50 — 0,55
Магний ссрнокислый 0,08 — 0,12
Глицерин 3,4-3,6
Бактопептон 5,0-5,5
Дистиллированная вода Остальное
Фенобарбитал является ангибитором синтеза ,альдегидного фактора одного из субстратов люциферазы в клетках бактерий.
Пример 1. В культиватор заливают стерильную питательную среду, г/л: NaCI 29,0;
Наг НРО4 12Н О 10,0; KHsP04 1,0; (йНф)аНР04
0525; Mg504, ° 7Н О 0,08; глицерин
3,5; бактопептон 5,5; дистиллированная вода до 1 л. Затем вводят инокулят и сразу же добавляют фенобарбитал в концентрации
0,2 г/л. Скорость роста (фиг. lcl, кривая
2) не отличается от контроля (фиг. 1а, кривая 1). Удельное содержание люциферазы в биомассе составляет 8,6 отн.ед./опт.ед.(фиг.1б, 2).
Пример 2. В культиватор заливают стерильную пйтательную среду, г/л: NaCl 28,0;
Na HPO4 ° 12Н О 8;0; KH PO„1>05; (NH4) р
НРО4 0,55; Мц$0 ° 7Н О 0,12; глицерин 3,4; бактопептон 5,25; дистиллированная вода до
1 литра, Затем вводят инокулят и сразу же добавляют фенобарбитал в концентрации
1,0 г/л. При такой концентрации фенобарбитала в среде скорость роста бактерий (фиг.1п, кривая 3) меньше, чем скорость роста бакотерий в контроле (фиг. 1ц, кривая 1), Удельное содержание люциферазы в биомассе
9,1 отн. ед./опт.ед. (фиг. 1Ь, кривая 3), .Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить выход люциферазы, .с едиФормула изобретения
Питательная среда для культивирования све тящихся бактерий, содержащая натрий хлористый, натрий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещен 0 ный, аммоний фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокислый, глицерин, бактоI пептон, дистиллированную воду, о т л и ч аю щ а я с я тем, что, с целью увеличения выхода люциферазы с единицы биомассы, 5 она дополнительно содержит фенобарбитал в количестве 0,2 — 1,0 г/л при следующем соотношении компонентов, г/л.
Фенобарбитал 0,2 — 1,0
Натрий хлористый . 28,0 — 30,0
Натрий фосфорнокислый одно замещенный
Калий фосфорнокислый двузамещенный 1,0 — 1,1
Аммоний фосфорнокислый одно замещенный 0,50 — 0,55
Магний сернокислый 0,08 — 0,12
Глицерин 3,4-3,6
Бактопептон 5,0-5,5
Дистиллированная вода Остальное
Источники. информации
30 принятые во внимание при экспертизе
1. Gunsa1us-Miguel А., Meighen Е. А., Nicoli, Nico1i M. 2.; Nea1son К. Н., Hastings J. W., Purifi— сабоп and properties of bacterial luciferases.
Journal of Biol. Chem. 1972, V. 247, N 2, 35 P 398 404, 2. Воробьева Т. И., Высоцкий Е. С., Заворцев В. В. и Межевикин В. В. Регуляция синтеза люциферазы, — „Микробиология, 1980, т. 49, N 4, с. 517-520 (прототип).
973614
Составитель Е. Воробьева
Техред Е.Харитончик Корректор У.Пономаренко
Редактор И. Митровка
Заказ 8617/29
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Тираж 505 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
