Способ получения гликозидов антрациклина

 

ОПИСЛНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ ()993822

Союз Советских

Социалистическик

Республик (61) Дополнительный к патенту (53) М. Кл.

3 (22) Заявлено 29. 08. 80 (2 I ) 2969264/23 04

С 07 Н )5/24

РА 61x»/70 (23) Приоритет (32) 01, 09, 79 (31) 7930392 (33) ВеликобританиЯ

Опубликовано30. 01. 83. Бюллетень,% 4

Дата опубликования описания 30.01.83

Гюсудвратненный комитет

СССР но денем изобретений и открытий (53) УДК %47 455. . 07 (088. 8) Иностранцы

Альберто Барджотти, Джузеппе Казинелли, Федерико Аркамоне, Аурелио ди Марко (Италия) Иностранная Фирма

"Карло Эрба С. и. А". (Италия) (72) Авторы изобретения

Серджа,. Пенко, /

l (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛИКОЗИДОВ

АНТРАЦИКЛИНА () Ж

ОН H41

Изобретение относится к способу получения новых гликозидных производных, обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Цель изобретения - получение новых полезных соединений, расширяющих арсенал средств воздействия на живой организм; обладающих улучшенными

/ где R - Н или ОН; один из R и Й2 - метил; а другой ОН, заключающемуся в том, что раствосвойствами по сравнению с ближайшими структурными аналогами, достигается путем синтеза последних, основанного на известной реакции гликозиттирования дауномицинона (3 3.

Поставленная::цель достигается согласно способу получения гликозидов антрациклина общей формулы ренный в сухом хлористом метилене дауномицинон конденсируют в присутствии эквимолярного количества сереб3 993822

4 ряной соли трифторметансульфокислоты .продукт, где R H с помощью обработи молекулярного сита в качестве де- ки метанольным хлористым водородом гйдратирующего агента при комнатной в виде хлоргидрата, который при нетемпературе с 2,3,б-тридезокси-4" обходимости подвергают взаимодейст-С-,метил-4-0-п-нитробензоил-3-три- 5 вию с раствором брома в хлороформе, фторацетамидо-L-ликсогексопираноэил- и полученное 14-бромпроизводное гидхлоридом или 2,3,6-тридеэокси-4-С- ролизуют водным раствором формиата

-метил-4-0-11-нитробензоил-б-арабино- натрия при комнатной температуре с гексопиранозилхлоридом с получением последующим выделением целевого про-. соответствующих. защищенных гликозид-/ 1в дукта, где R — ОН, в виде хлоргидных производных, удаляют все защит- рата. ные группы с помощью мягкого щелоч-, Гликозиды антрациклина формулы ного гидролиза и выделяют целевой (I) имеют следующие названия:

4 -С-Метилдаунорубицин 1-А

4 -С-Метилдоксорубицин 1-В

) 3

4 -зпи-4 -С-Иетилдаунорубицин I-С

) )

4 -зпи-4 С" Метилдоксорубицин 1-0

R Н К1 СНЗЭ R2 ОН

В=12-0Н, к.)зСНд

R=H, R ÎH, В =СН

К=В1 ОН R2=СНЗ

Продолжение табл. I

4 -эпи-4 -С-Метил) ) даунорубицин HCII (1-С) 2,8"

8,4

0,62

Интеграционная доза

ДД>0, нг/мл

Соединение

Даунорубицин солянокислый

4 -С-Иетилдаунорубицин

1 солянокислый (I-A) 35

Таблица 2

Т/С"", 3

Токсическая смерть+"

Доза+, мг/кг

Время

Соединение выживания) ) )+

Даунорубицин HCR

О/40

3/39

0/10

О/10

2,9 175

4,4 180

10 150

20 155

4 -С-Иетилдаунорубицин

I солянокислый (Г-А) Соединения I-P, 1-В, I-С и I-D полезны в качестве противоопухолевых агентов, Новые соединения испытывали на клетках Не1а 1и vItro (время воздействия 24 ч) и на асцитной лейкемии

Р-388 у мышей в сравнении с даунорубицином (дауномицином) и доксорубицином (адриамицином).

Результаты действия соединений на клетки Hefa, вызывающего клонирование, представлены в табл. 1.

Таблица 1

Доксорубицин солянокислый

4 -С-Метилдоксорубицин

НС (r-В)

) )

4 -эпи-4 -С-Метилдокси35 рубицрн HCQ (I-О) Клетки HeRa подвергали действию препаратов в течение 24 ч, затем высевали на чашки Петри. Число колоний подсчитывали через пять дней.

Активность соединений против ас цитной лейкемии Р-388 у мышей пред45 ставлена в табл. 2.

-6

Продолжение-табл. 2

: 993822

/ д., З 4

4 -эпи" 4 -С-Иетилдаунорубицин НСЕ (Т-С) 0,29-. 140

0,44 163

0,66- 158

-6,6 . 193

10 227

6 186

О/! 0

О/10

О/20

О/30

1/28

О/ I 0

О/1 О

2/20

О/1О

О/10

Доксорубицин солянокислый

2/30

5/28 (4 - С-Иетилдоксорубицин солянокислый (I-8) 7 7 172 l 0 233

1 150

2 156

3/20

4 -эпи-4 -С-Иетилдоксорубицин НСВ (I-D) Иышей обрабатывали интрапарентерально через день после прививки опухолевых. клеток; Среднее время выживания обработанных мышей в отношении к среднему .времени выживания контрольных мышей, выраженное в процентах.

+"" Оценивалась на основании макроскопических находок при аутопсии.

Продолжительность времени выживания максимальная. ф фФ-%

Все новые соединения в толерантной дозе на лейкемии Р-388 показали сравнимую или более высокую активность, чем активность известных соединений.

Пример 1. 4тО-Паранитробензоил-2,3,6-тридезокси-4-С-метил-3-трифторацетамидо-L-ликсо-гексопираноэилхлорид (11-А) - исходное соединение.

Раствор 1 г (3,7 ммоль) метил--2,3,6"тридезокси-4-С-метил"3-трифторацетамидо-et;L-ликсо-гексопиранози-. да (IV-А) в 20 мл уксусной кислоты и 80 мл воды подвергают вэаимодей" ствию при 100.С в течение 2 ч. Расто вор выпаривают и получают 2,3,6-три-. деэокси-4-С-метил-3-трифторацетамидо+L-ликсо-гексопиранозу (Ч-А) в виде беЛого твердого вещества с выходом:0,95 г (953) точкой плавления

181 182юС. ()23 1270 (с 1 0 в метаноле).

ПИР-спектр (СДСЕ + ДИС0 - .4) по казал погЛощения при 1,05 (с, СН -С-4) ° 1,16 (д, СНЗ-С-5) и 5,274 (С-1-Н) .

Раствор 0,75 г (2,9 ммоль) соеди- нения V-А в смеси с 10 мл тризтиламина и 20 мл сухого двуххлористого метилена обрабатывают при перемешивании 2,200 г паранитробензоилхлоридом и 0,220 г 4-диметиламинопириди-. ном, затем нагревают при 45 С в течео ние 90 мин. Раствор выпаривают и остаток растворяют в 100 мл хлороформа, промывают 103-. ным раствором бикарбоната натрия и водой, затем хлороформный раствор сушат над. сульфатом натрия. Полученный остаток при выпаривании хроматографируют .на колонке силикагеля. Элюирование смесью хлороформа и ацетона в отношении 95:5 дает

1-.4-ди-О-п-нитробензоил-2,3,6-тридеэокси-4"C-метил-3-трифторацетамидо-1.-ликсо-.гексопираноэу (VI--А, 1,55 r, 953), точка плавления 168-170 С, (с4Р - "35 С (с - 1,0 в хлороформе). раствор 1,10 г (2,0 ммоль) соединения Vl-А в 25 мл сухого двуххлоо ристого метилена насыщают при 0 С безводным хлористым водородом..

Полученный осадок пара"нитробенэойной кислоты отфильтровывают в безводных условиях и фильтрат выпаривают. Получают 2,3,6-тридезокси-4-С"

-метил-4"0-М-нитробензоил-3-трифторацетамидо-L-ликсо-гексопиранозил"

993822

Через час при комнатной температуре реакционную смесь нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, органическую фазу отделяют и выпаривают в вакууме. Хроматографической очисткой сырого остатка на силикагелевой колонке с использованием смеси хлороформа и ацетона в отношении 95:5 в качестве подвижной фазы получают 0,965 r

7 хлорид (! !-А, 0,80 г) в виде белого твердого вещества, пригодного для дальнейшего синтеза без дополнительной очистки.

П р.и м е р 2. 4-0-A-Нитробензоил-2,3,6-тридезокси-4-С-метил-3-трифторацетамидо-L-арабино-гексопиранозилхлорид (ll-В) - исходное соединение.

Кислотный гидролиз метил-2,3,6- 1D

-тридезокси"4-С-метил-.3-трифтор- (65ь) 4-С-метил-4-0-и-нитробензоилацетамидо-а(-, L-арабино-гексопиранози- "N-трифторацетилдаунорубицина с темда (lV-В, 0,80 r, 3 ммоль) как в пературой плавления 172-173 С. К) 3. = примере 1 дает 2,3,б-тридезокси-4- +420О (с = 0,05 в хлороформе).

-С-метил"З-трифторацетамидо-d.-! - 13 ПМР-спектр (СДф ) показывает по-арабино-гексопиранозу (V-В, 0,700 r, глощение при 1,28 (д, ÑH3-С-5); 1,56

903) в виде твердого вещества с точ- (с, CH>-C-4); 2,48 (с, ЕЙ СО); 4,02 кой плавления 110-111 С, (е!) = (с, ОСНЗ); 5,21 (широкий синглет, -83О (с 1,0 в метаноле). С" 7-Н); 5,50 (широкий синглет, С- -Н);

ПМР-спектр (СДСР3+ДМСО -Q) no- 3D 13,11 и 13,92 о(два синглета, феказывает поглощение при: 1,10 (с, . нольная группа ОН).

СНз-С-4), 1 17 (д-, Сйв-.С-5) и 5,23 4 Раствор 0,8 г соединения, полу(широкий синглет, С-l Í). ченного выше, в 15 мл ацетона обраОбработка соединения Ч-8 (0,60 г, батывают 45 мл. 0,1 н. раствором вод2,33 ммоль) пара-нитро"бензоилхлори- и ной гидроокиси натрия и перемешидом как в примере 1 дает соответст- вают при комнатной температуре в ат вующее производное 1,4-ди-0-пара- мосфере азота. Через час рН реак-нитробензоила (Vl-8> 1,030 г 80 r) ционной смеси 1 н. водным хлористым с точкой плавления 151 С. (а!.) /- водородом доводят до 3 5 и затем -21 (с = 1,1 в хлороформе). 3D экстрагируют хлороформом для отдеРаствор 0,90 г (1,62 ммоль) соеди- ления примесей. рН водной фазы уснения Vl-В в 20 мл сухого двуххлорис- танавливают равным 8,0 и дважды того метилена насыщают при ООС без- экстрагируют хлороформом. Объедиводным хлористым водородом, После от- ненные органические экстракты сушат

Фильтровывания осадка и-нитробензой- 3 над сульфатом натрия, концентрируют

33 ной кислоты раствор выпаривают до- до небольшого обьема и подкисляют суха и получают 2,3,6-тридезокси"4- до рН 4,5 0,25 н. хлористым водо" С-метил-4-0-и-нитробензоил-3-три- родом в метаноле. Добавка избытка

Фторацетамидо-L-арабийо-гексопиран диэтилового эфира дает 4-С-метилозилхлорид (!1-В, 0,650 г) в виде 4D -даунорубицин (!-А) в форме хлор.белого твердого вещества, пригодного гидрата (0,515 г, 883) с температудля дальнейшего применения 6е3 допол рой плавления 162-163 С (с разложенительной очистки. нием). (d) > = +320 (с 0,05 в меПример 3. 4 -С-метил-дауно" танрле) ° рубиц„н (! А) (!М! 105)., П Р и м е Р 4. 4 -С-метил-доксоК раствору дауномицина (0,900 r, РУбицин (! В) (!"! 109) ,2,26 ммоль) в сухом двуххлористом РаствоР солЯнокислого 4-С-метилметилене (90 мл) добавляют 2,$,6- -даУноРУбицина (l-А, 0,45-0,78 ммоль)

:-тридезокси-4-С-метил-4-0-и-нитро- приготовленного как в примере 3, в

Йбензоил-3-трифторацетамидо-L-ликсо-, смеси с 6 мл безводного метанола, гексопиранозилхлорид(!1-д)(0,800 .r),. 17,5 мл диоксана и 0;45 мл этилового, приготовленный как в примере 1, в эфира. ортомуравьиной кислоты обра15 мл двуххлористого метилена и в батывают 1,8 мл раствора, содержащеприсутствии молекулярных .сит го 0 95 r брома в 10,мл хлороформа. (4 А Мегck, 6 r). Затем смесь обра- . Через 1,5 ч при 10 С реакционную батывают 0,58 г серебряной соли три- смесь переливают в смесь 90 мл диИ фторметансульфси<ислоты в безводном этилового и 45 мл петролейного эфира. диэтиловом эфире (15 мл) при силь- Полученный осадок красного цвета ном перемешивании. после фильтрования. и промывки диэти9. :99382 ловым эфиром растворяют в смеси 15мл ацетона и 15 мл О, 25 н. водного бромистого водорода. Через 20 .4 llpH

30 С реакционную смесь обрабатывают 0,68 r формиата натрия в 7,5 мл воды

1и перемешивают.при 30 С в течение. о

48 ч. Затеи реакционную смесь экстра-. гируют хлороформом для удаления некоторых лиофильных примесей. Водную фазу после установления рН 7,6.вод= te ным раствором бикарбоната натрия не.сколько раз экстрагируют хлороформом до тех пор, пока не получают бес-. цветных экстрактов. Объединенные хлороформные экстракты сушат над суль- . 1 фатом натрия и выпаривают до малого . объема (около 20 мл) в вакууме. К полученному раствору красного цвета, рН которого устанавливают равным

3,5 безводным хлористым водородом в щ метаноле, добавляют диэтиловый эфир с избытком и получают 4-С-метил-доксорубицин (1-В, 0,410 г) .в фор"ме хлоргидрата с точкой плавления

185-186 С (с разложением), (d) уу

= +227 (с = 0,05 в метаноле). о

° D

Пример 5. 4 -эпи-4 -С-Иетил-даунорубицин (I-С) (1И1-110).

Синтез указанного в названии примера соединения путем;взаимодействия дауномицинона и 2,3,6-тридеэокси-4-С-метил-4-0-и"нитробензоил-3-трифторацетамидо-L-арабино- гексо". пйранозилхлорида, полученного по йримеру 2, проводят согласно процессу, описанному в примере 3.

4 -эпи-4 -С-йетил-.дауномицин

f I (.t-С} получают в форме. хлоргидрата в виде кристаллов красного цвета с температурой плавления 187- 188 С о (с разложением), (е() +285 (с

0,05 в метаноле).

Пример 6. 4 -эпи:-4 -С-Иетил f 1

"доксррубицин. (1-О) .

Соединение 1-С, полученное как описано в примере 5, превращают -в соответствующее 14-оксипроизводное согласно процессу, описанному в при= мере 4. 4 -эпи-4 -.С-Иетил"доксорубиf цин (1-0)выделяют, как хлоргидрат в

SO виде кристаллов красного цвета с точкой плавления 169-170 С (с passe2 10 жением) (d) > = +250 (c 0,04 s ме-, D таноле).

Формула изобретения .Способ получения гликозидов антрациклина общей формулы

0 0Н

ОСНОВ:

0И

НЙ р, ЮНу где R - H или ОН; один из R< и Й 2 - метил а ДругОЙ »

ОН, отличающийся тем, что дауномицинон, растворенный в сухом хлористом метилене, конденсируют в присутствии эквимолярного количества серебряной соли трифторметансульфокислоты и молекулярного сита в качестве дегидратирующего. агента при комнатной температуре с 2,3,6-тридеэокси-4"С-метил-4-О-п-нитро- бенэоил-3-трифторацетамидо-1.-ликсо" гексо-пиранозилхлоридом или 2,3,6-тридезокси-4-С-метил"4-0-п-нитро-. бензоил-L-арабиногексопиранозилхлоридом с получением соответствующих защищенных гликозидных производных, удаляют все защитные группы с помощью мягкого щелочного гидролиза и выделяют целевой продукт, где RH, с помощью обработки метанольным хлористым водородом в виде хлоргидрата, который при необходимости подвергают взаимодействию с раствором брома в хлороформе, и полученное

14-бромпроиэводное гидролизуют водным раствором. формиата натрия при комнатной температуре в последующим выделением -целевого продукта, где

R - -0H, в виде хлоргидрата.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент СССР И 626956, кл. С 04 Н 15/24, 1977.

ВНИИПИ Заказ 522/79 Тираж 385 . Подписное

»

Филиал AllA "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,