Дифференцировка in vitro плюрипотентных стволовых клеток в панкреатические эндодермальные клетки (пэк) и эндокринные клетки - заявка 2015137400 на патент на изобретение в РФ

1. Унипотентная человеческая незрелая бета-клетка in vitro, экспрессирующая INS и NKX6.1, и по существу не экспрессирующая NGN3.
2. Унипотентная человеческая незрелая бета-клетка по п. 1, способная к созреванию в зрелую бета-клетку.
3. Унипотентная человеческая незрелая бета-клетка по п. 1, дополнительно экспрессирующая MAFB.
4. Способ получения унипотентной человеческой незрелой бета-клетки, включающий обеспечение контакта клеток человеческой дефинитивной эндодермальной линии in vitro с членом суперсемейства TGFβ и членом семейства Wnt, с получением, таким образом, унипотентной человеческой незрелой бета-клетки.
5. Способ по п. 4, где указанная унипотентная человеческая незрелая бета-клетка экспрессирует INS, NKX6.1 и по существу не экспрессирует NGN3.
6. Способ по п. 4, дополнительно включающий обеспечение контакта клеток человеческой дефинитивной эндодермальной линии in vitro с агентом, активирующим киназу рецептора ERBB.
7. Способ по п. 4, где фактором роста суперсемейства TGFβ является активин А.
8. Способ по п. 4, где членом семейства Wnt является Wnt3a.
9. Способ по п. 6, где агентом, активирующим киназу рецептора ERBB, является херегулин.
10. Способ получения зрелых бета-клеток in vivo, включающий:
(a) обеспечение контакта клеток человеческой дефинитивной эндодермальной линии in vitro с членом суперсемейства TGFβ и членом семейства Wnt, с получением, таким образом, незрелых бета-клеток;
(b) трансплантацию незрелых бета-клеток с этапа (а) млекопитающему субъекту; и
(c) обеспечение созревания незрелых бета-клеток in vivo с получением популяции клеток, включающих инсулин-секретирующие бета-клетки.
11. Способ по п. 10, дополнительно включающий обеспечение контакта клеток человеческой дефинитивной эндодермальной линии in vitro с агентом, активирующим киназу рецептора ERBB.
12. Способ по п. 10, где фактором роста суперсемейства TGFβ является активин А.
13. Способ по п. 10, где членом семейства Wnt является Wnt3a.
14. Способ по п. 11, где агентом, активирующим киназу рецептора ERBB, является херегулин.
15. Способ по п. 10, где клетки человеческой дефинитивной эндодермальной линии контактируют по меньшей мере с 50 нг/мл фактора роста суперсемейства TGFβ.
16. Способ по п. 10, где клетки человеческой дефинитивной эндодермальной линии контактируют по меньшей мере с 25 нг/мл члена семейства Wnt.
17. Способ по п. 11, где клетки человеческой дефинитивной эндодермальной линии контактируют с количеством агента, активирующим киназу рецептора ERBB, в 5-15 раз меньшим, чем количество фактора роста суперсемейства TGFβ и члена семейства Wnt.
18. Способ по п. 10, где незрелые бета-клетки экспрессируют INS и NKX6.1, и по существу не экспрессируют NGN3.
19. Способ по п. 10, где незрелые бета-клетки экспрессируют INS, NKX6.1 и MAFB, и по существу, не экспрессируют NGN3.
Наверх