Белки rsv в предшествующей слиянию конформации и их применение - заявка 2015142981 на патент на изобретение в РФ

1. Иммуноген, содержащий рекомбинантный белок F RSV, содержащий замены S155C и S290C по сравнению с нативным белком F RSV, которые образуют неприродную дисульфидную связь, где рекомбинантный белок F RSV специфически связывается с антителом, специфичным к предшествующей слиянию конформации F RSV.
2. Иммуноген по п.1, где рекомбинантный белок F RSV содержит или состоит из полипептида F2 и полипептида F1, содержащих аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 80% идентичные аминокислотам 26-103 и 145-310, соответственно, SEQ ID NO: 124.
3. Иммуноген по п.1, где рекомбинантный белок F RSV содержит или состоит из полипептида F2 и полипептида F1, содержащих аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 80% идентичные аминокислотам 26-103 и 145-513, соответственно, SEQ ID NO: 124.
4. Иммуноген по п.1, где рекомбинантный белок F RSV содержит или состоит из полипептида F2 и полипептида F1, содержащих аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 80% идентичные аминокислотам 26-103 и 145-529, соответственно, SEQ ID NO: 124.
5. Иммуноген по п.1, где рекомбинантный белок F RSV содержит или состоит из полипептида F2 и полипептида F1, содержащих аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 80% идентичные аминокислотам 26-103 и 145-551, соответственно, SEQ ID NO: 124.
6. Иммуноген по любому из пп.1-5, где рекомбинантный белок F RSV дополнительно содержит замену на F, L, W, Y, H или M в положении 190, в положении 207 или в положениях 190 и 207.
7. Иммуноген по п.6, где рекомбинантный белок F RSV содержит замены S155C, S290C и S190F или замены S155C, S290C, S190F и V207L.
8. Иммуноген по любому из пп.4-7, где рекомбинантный белок F RSV дополнительно содержит пару замен на цистеин в одном или нескольких из положений 512 и 513, положений 519 и 520 или положений 526 и 527, которые образуют одну или несколько неприродных дисульфидных связей.
9. Иммуноген по любому из пп.1-8, где рекомбинантный белок F RSV представляет собой одноцепочечный белок F RSV.
10. Иммуноген по любому из пп.1-9, где иммуноген специфически связывается с антителом D25 или AM22, специфичным к предшествующей слиянию конформации.
11. Иммуноген по любому из пп.1-10, где полипептид F2 и полипептид F1 связаны через гетерологичный пептидный линкер или связаны прямо, и где рекомбинантный белок F RSV не содержит полипептида pep27.
12. Иммуноген по любому из пп.1-11, где рекомбинантный белок F RSV связан с доменом тримеризации.
13. Иммуноген по любому из пп.1-12, где рекомбинантный белок F RSV связан с субъединицей белковой наночастицы.
14. Выделенный иммуноген, содержащий:
рекомбинантный белок F RSV или его фрагмент, содержащие по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с нативным белком F RSV, которая стабилизирует рекомбинантный белок F RSV в предшествующей слиянию конформации, который специфически связывается с антителом, специфичным к предшествующей слиянию конформации F RSV, где:
иммуноген специфически связывается с антителом после инкубации при 20°C в фосфатно-солевом буфере при физиологических значениях pH в течение по меньшей мере 24 часов в отсутствие антитела, и где антитело не связывается с белком F RSV в образующейся после слияния конформации.
15. Иммуноген по п.14, где предшествующая слиянию конформация рекомбинантного белка F RSV или его фрагмента содержит антигенный участок ∅, который специфически связывается с антителом, специфичным к предшествующей слиянию конформации, и где антигенный участок ∅ содержит остатки 62-69 и 196-209 нативной последовательности белка F RSV, указанной в качестве одной из SEQ ID NO: 1-184.
16. Иммуноген по п.14 или 15, где иммуноген специфически связывается с антителом D25, AM22, 5C4 или MPE8, специфичным к предшествующей слиянию конформации.
17. Иммуноген по любому из пп.14-16, где нативный белок F RSV представляет собой белок F RSV A, B или белок F бычьего RSV.
18. Иммуноген по любому из пп.14-17, где рекомбинантный белок F RSV или его фрагмент содержат полипептид F1 и полипептид F2, и необязательно не содержат полипептида pep27 или его части.
19. Иммуноген по п.18, где полипептиды F2 и F1 содержат положения 62-69 и 196-209 F RSV, соответственно, и где:
полипептид F2 содержит или состоит из 8-84 остатков в положениях 26-109 F RSV; и
полипептид F1 содержит или состоит из 14-393 остатков в положениях 137-529 F RSV,
где положения F RSV соответствуют аминокислотной последовательности эталонного полипептида F0, указанной в качестве SEQ ID NO: 124.
20. Иммуноген по п.19, где C-концевой остаток полипептида F2 и N-концевой остаток полипептида F1, соответственно, содержат положения 97 и 137; 97 и 145; 97 и 150; 102 и 144; 102 и 145; 102 и 146; 102 и 147; 103 и 144; 103 и 145; 103 и 146; 103 и 147; 104 и 144; 104 и 145; 104 и 146; 104 и 147; 105 и 144; 105 и 145; 105 и 146; 105 и 147; или 105 и 150 F RSV.
21. Иммуноген по п.19, где полипептиды F2 и F1, соответственно, содержат или состоят из положений: 26-109 и 137-513; 26-107 и 137-513; 26-107 и 145-513; 26-105 и 137-513; 26-105 и 145-513; 26-103 и 145-513; 26-109 и 137-529; 26-107 и 137-529; 26-107 и 145-529; 26-105 и 137-529; 26-105 и 145-529; 26-103 и 145-529; 46-103 и 147-310; 46-104 и 146-310; 50-96 и 149-306; 51-103 и 146-307; 51-103 и 139-307; 50-105 и 146-306; или 53-97 и от 148 до одного из 305-320 F RSV.
22. Иммуноген по любому из пп.18-21, где полипептиды F1 и F2 по меньшей мере на 80% идентичны соответствующим последовательностям нативной последовательности белка F RSV, указанной в качестве любой из SEQ ID NO: 1-184.
23. Иммуноген по любому из пп.18-22, где рекомбинантный белок F RSV представляет собой одноцепочечный белок F RSV и полипептиды F2 и F1 связаны через гетерологичный пептидный линкер или связаны прямо.
24. Иммуноген по п.23, где
положение 105 полипептида F2 связано с положением 145 полипептида F1 через линкер Gly-Ser; или
положение 103 полипептида F2 прямо связано с положением 145 полипептида F1.
25. Иммуноген по п.23 или24, где гетерологичный пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность, указанную в качестве одной из SEQ ID NO: 356-365 или 1443-1453, или представляет собой линкер G, S, GG, GS, SG, GGG или GSG.
26. Иммуноген по любому из пп.14-25, где рекомбинантный белок F RSV стабилизирован в предшествующей слиянию конформации белка F RSV посредством:
(a) неприродной дисульфидной связи между парой остатков цистеина;
(b) заполняющей полость замены;
(c) переупаковывающей аминокислотной замены;
(d) участка N-связанного гликозилирования; или
(e) комбинации двух или более из (a)-(d).
27. Иммуноген по п.26, где пара остатков цистеина включает первый остаток цистеина и второй остаток цистеина, и первый остаток цистеина внесен посредством аминокислотной замены в одном из положений 137-216 F RSV, и второй остаток цистеина внесен посредством аминокислотной замены в одном из положений 271-460 F RSV.
28. Иммуноген по п.26, где пара остатков цистеина включает первый остаток цистеина и второй остаток цистеина, причем каждый из них содержит углерод Cα и углерод Cβ, и где:
(a) первый остаток цистеина внесен посредством аминокислотной замены в одном из положений 137-216 или 461-513 F RSV, и второй остаток цистеина внесен посредством аминокислотной замены в одном из положений 26-61, 77-97 или 271-460 F RSV; и
(b) углерод Cα в положении первого остатка цистеина находится на расстоянии 2,0-8,0 ангстрем от углерода Cα в положении второго остатка цистеина, и/или углерод Cβ в положении первого остатка цистеина находится на расстоянии 2,0-5,5 ангстрем от углерода Cβ в положении второго остатка цистеина при использовании оптимального ротомера для каждого углерода Cβ в трехмерной структуре, определяемой структурными координатами, представленными в таблице 1.
29. Иммуноген по п.26, где пара остатков цистеина включает первый остаток цистеина и второй остаток цистеина, причем каждый из них содержит углерод Cα и углерод Cβ, и где:
(a) первый остаток цистеина и второй остаток цистеина внесены посредством аминокислотной замены в положениях 137-216 F RSV или в положениях 461-513 F RSV; или первый остаток цистеина внесен посредством аминокислотной замены в положениях 137-216 F RSV, и второй остаток цистеина внесен посредством аминокислотной замены в положениях 461-513 F RSV; и
(b) углерод Cα положения первого остатка цистеина находится на расстоянии 2,0-8,0 ангстрем от углерода Cα положения второго остатка цистеина, и/или углерод Cβ положения первого остатка цистеина находится на расстоянии 2,0-5,5 ангстрем от углерода Cβ положения второго остатка цистеина при использовании оптимального ротомера для каждого углерода Cβ в трехмерной структуре, определяемой структурными координатами, представленными в таблице 1.
30. Иммуноген по п.26, где неприродная дисульфидная связь включает дисульфидную связь внутри протомера между положениями 155 и 290 F RSV.
31. Иммуноген по п.30, где рекомбинантный белок F RSV содержит замены S155C и S290C.
32. Иммуноген по п.31, где рекомбинантный белок F RSV содержит или состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью с остатками 26-109 и 137-513, остатками 26-103 и 145-513 или остатками 26-105 и 145-513 SEQ ID NO: 185.
33. Иммуноген по любому из пп.26-32, содержащий заполняющую полость замену, включающую замену на F, L, W, Y, H или M в положении 190, в положении 207 или в положениях 190 и 207.
34. Иммуноген по п.33, содержащий заполняющую полость замену, включающую одну из: 190F; 190L; 190W; 190Y; 190H; 190M; 190F и 207L; 190F и 207F; 190F и 207W; 190L и 207L; 190L и 207F; 190L и 207W; 190W и 207L; 190W и 207F; 190W и 207W; 190Y и 207L; 190Y и 207F; 190Y и 207W; 190H и 207L; 190H и 207F; 190H и 207W; 190M и 207L; или 190M и 207F; 190M и 207W.
35. Иммуноген по п.34, где рекомбинантный белок F RSV содержит или состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью с остатками 26-109 и 137-513, остатками 26-103 и 145-513 или остатками 26-105 и 145-513 SEQ ID NO: 191.
36. Иммуноген по п.26, где рекомбинантный белок F RSV содержит неприродную дисульфидную связь между заменами на цистеин в положениях 155 и 290 и заполняющую полость замену на F, L, W, Y, H или M в положении 190, в положении 207 или в положениях 190 и 207.
37. Иммуноген по п.36, где рекомбинантный белок F RSV содержит замены S155C, S290C и S190F или замены S155C, S290C, S190F и V207L.
38. Иммуноген по п.26, где рекомбинантный белок F RSV содержит или состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью с остатками 26-109 и 137-513, соответственно, или 26-103 и 145-513, соответственно, или 26-105 и 145-513, соответственно, одной из SEQ ID NO: 185 (DS, подтип A), 1479 (DS, подтип B), 371 (DS-Cav1, подтип A), 372 (DSCav1, подтип B), 373 (DSCav1, бычий), 374 (DS S190F, подтип A), 375 (DS, S190F, подтип B) или 376 (DS, S190F, бычий).
39. Иммуноген по п.26, где рекомбинантный белок F RSV содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную
остаткам 26-476 SEQ ID NO: 669 (BZGJ9 DS-Cav1)
остаткам 26-472 SEQ ID NO: 706 (BZGJ9-9 DS-Cav1)
остаткам 26-474 SEQ ID NO: 707 (BZGJ9-10 DS-Cav1).
40. Иммуноген по любому из пп.26-39, где полипептид F1 содержит спираль α10 RSV, содержащую от положения 492 до одного из положений 510-529 RSV, и где полипептид F1 содержит по меньшей мере две замены на цистеин, которые образуют неприродную дисульфидную связь между протомерами.
41. Иммуноген по п.40 или 41, где положения 512-524 полипептида F1 содержат аминокислотную последовательность, указываемую как CCHNVNAGKSTTN (остатки 512-524 SEQ ID NO: 844) или CCHNVNACCSTTN (остатки 512-524Y SEQ ID NO: 849); или где положения 512-529 полипептида F1 содержат аминокислотную последовательность, указываемую как CCHNVNACCSTTNICCTT (остатки 512-529 SEQ ID NO: 853).
42. Иммуноген по п.19, где рекомбинантный белок F RSV или его фрагмент содержит или состоит из аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной следующим положениям F2 и F1 RSV, как указано в любой из SEQ ID NO: 1-184:
(a) 56-97 и 189-211, соответственно;
(b) 58-97 и 192-242, соответственно;
(c) 59-97 и 194-240, соответственно;
(d) 60-75 и 193-218, соответственно;
(e) 60-94 и 192-229, соответственно;
(f) 60-94 и 192-232, соответственно;
(g) 60-94 и 193-237, соответственно;
(h) 60-95 и 192-240, соответственно;
(i) 60-96 и 192-239, соответственно;
(j) 60-97 и 192-242, соответственно;
(k) 60-97 и 194-239, соответственно;
(l) 61-96 и 192-235, соответственно;
(m) 61-96 и 192-240, соответственно;
(n) 62-69 и 196-209, соответственно; или
(o) круговая перестановка положений F2 и F1, приведенных в любой из (a)-(m),
где положения F2 и F1 RSV связаны гетерологичным линкером.
43. Иммуноген по п.19, где рекомбинантный белок F RSV или его фрагмент содержат или состоят из аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной следующим положениям F2 и F1 RSV, как указано в любой из SEQ ID NO: 1-184:
(a) 46-103 и 147-310, соответственно;
(b) 46-104 и 146-310, соответственно;
(c) 50-96 и 149-306, соответственно;
(d) 51-103 и 146-307, соответственно;
(e) 51-103 и 139-307, соответственно;
(f) 50-105 и 146-306, соответственно;
(g) 53-97 и от 148 до одного из 305-320; или
(h) круговая перестановка положений F2 и F1, приведенных в любой из (a)-(g),
где положения F2 и F1 RSV связаны гетерологичным линкером или связаны прямо.
44. Иммуноген по п.43, где рекомбинантный белок F RSV содержит замены на цистеин в положениях 155 и 290, и замены на F, L, W, Y, H или M в положении 190, в положении 207 или в положениях 190 и 207.
45. Иммуноген по п.44, где рекомбинантный белок F RSV содержит замены S155C и S290C; замены S155C, S290C и S190F, или замены S155C, S290C, S190F и V207L.
46. Иммуноген по любому из пп.42-44, где гетерологичный линкер содержит или состоит из аминокислотной последовательности, указанной в качестве любой из SEQ ID NO: 1443-1455, или линкер G, S, GG, GS, SG, GGG или GSG.
47. Иммуноген по любому из предшествующих пунктов, где рекомбинантный белок F RSV связан с каркасным белком.
48. Иммуноген, содержащий белок эпитоп-каркас, содержащий гетерологичный каркасный белок, ковалентно связанный с полипептидом, содержащим эпитоп F RSV в предшествующей слиянию конформации, где антитело, специфичное к предшествующей слиянию конформации F RSV, специфически связывается с белком эпитоп-каркас.
49. Иммуноген по п.48, где эпитоп белка F RSV в предшествующей слиянию конформации содержит или состоит из положений 62-69 и 196-209 F RSV, связанных гетерологичным пептидным линкером, или их круговой перестановки, где положения соответствуют аминокислотной последовательности эталонного полипептида F0, указанной в качестве SEQ ID NO: 124.
50. Иммуноген по п.48 или 49, где гетерологичный каркасный белок представляет собой один из каркасных белков 2KNO, 2A90, 2W59, 3U2E, 2VJ1, 1CHD, 1PQZ или 2MOE.
51. Иммуноген по п.50, где белок эпитоп-каркас содержит или состоит из аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной последовательности белка F RSV и каркасного белка, указанной в любой из SEQ ID NO: 1053.
52. Иммуноген по п.42 или 43, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную:
остаткам 1-128 SEQ ID NO: 1040 (TZ-13);
остаткам 1-126 SEQ ID NO: 1053 (JG_2KN0);
остаткам 1-187 SEQ ID NO: 1106 (TZ-19);
остаткам 27-247 SEQ ID NO: 1156 (E-CP_RBD51-307_14mutDS-Cav1_THS);
остаткам 26-282 SEQ ID NO: 1170 (RSVF(+)THS_s_to_hp2_foldon9);
остаткам 21-283 SEQ ID NO: 1188 (MS_08);
остаткам 27-553 SEQ ID NO: 1194 (GSJnh4-TWIN); или
остаткам 26 - 580 SEQ ID NO: 1212 (GSJnh4Fd-TWIN).
53. Иммуноген по любому из предшествующих пп., содержащий мультимер рекомбинантного белка F RSV или его фрагмента.
54. Иммуноген по любому из предшествующих пп., где рекомбинантный белок F RSV, или его фрагмент, или белок эпитоп-каркас, связаны с доменом тримеризации.
55. Иммуноген по п.54, где C-конец полипептида F1 в рекомбинантном белке F RSV связан с доменом тримеризации.
56. Иммуноген по п.54 или55, где домен тримеризации представляет собой домен Foldon.
57. Иммуноген по любому из пп.54-56, дополнительно содержащий участок расщепления протеазой между полипептидом F1 и доменом тримеризации.
58. Иммуноген по п.57, дополнительно содержащий трансмембранный домен между участком расщеплений протеазой и доменом тримеризации.
59. Иммуноген по п.54, где рекомбинантный белок F RSV, связанный с доменом тримеризации, содержит или состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью с остатками 26-109 и 137-544 или 26-103 и 145-544 одной из SEQ ID NO: 185 (DS, подтип A), 1479 (DS, подтип B), 371 (DS-Cav1, подтип A), 372 (DSCav1, подтип B), 373 (DSCav1, бычий), 374 (DS S190F, подтип A), 375 (DS, S190F, подтип B) или 376 (DS, S190F, бычий).
60. Иммуноген по п.54, где рекомбинантный белок F RSV, связанный с доменом тримеризации, содержит или состоит из аминокислотной последовательности, обладающей по меньшей мере 80% идентичностью с остатками:
остатки 26-476 SEQ ID NO: 669 (BZGJ9 DSCav1)
остатки 26-472 SEQ ID NO: 706 (BZGJ9-9 DSCav1)
остатки 26-474 SEQ ID NO: 707 (BZGJ9-10 DSCav1).
61. Иммуноген по любому из предшествующих пунктов, где рекомбинантный белок F RSV, или его фрагмент, или белок эпитоп-каркас связаны с субъединицей белковой наночастицы.
62. Иммуноген по любому из предшествующих пунктов, где C-конец рекомбинантного белка F RSV, или его фрагмента, или белка эпитоп-каркас связан с субъединицей белковой наночастицы.
63. Иммуноген по п.61 или 62, где субъединица белковой наночастицы представляет собой субъединицу наночастицы ферритина, инкапсулина, оксигеназы/редуктазы серы (SOR), синтазы лумазина или пируватдегидрогеназы.
64. Иммуноген по п.63, где:
субъединица наночастицы ферритина содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с остатками 517-679 SEQ ID NO: 350, и необязательно включает замену C31S, C31A или C31V в полипептиде ферритина;
субъединица SOR содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с остатками 516-825 SEQ ID NO: 344 или SEQ ID NO: 345;
субъединица синтазы лумазина содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с остатками 517-670 SEQ ID NO: 346, или SEQ ID NO: 348, или остатками 517-669 SEQ ID NO: 347; или
субъединица пируватдегидрогеназы содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с остатками 516-757 SEQ ID NO: 349.
65. Иммуноген по п.63, где рекомбинантный белок F RSV, связанный с ферритином, содержит или состоит из аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной остаткам 26-105 и 137-679 любой из SEQ ID NO: 377-382 (DSCav1 A, B, бычий, и частицы ферритина DS S190F), где рекомбинантный белок F RSV, связанный с ферритином, образует наночастицу ферритина, которая специфически связывается с антителом, специфичным к предшествующей слиянию конформации.
66. Иммуноген по п.63, где рекомбинантный белок F RSV, связанный с ферритином, содержит или состоит из аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной
остаткам 28-664 SEQ ID NO: 1429 (BZGJ9 DS-Cav1 Longlink Ferritin);
остаткам 28-663 SEQ ID NO: 1430 (BZGJ9-9 DS-Cav1 Longlink Ferritin); или
остаткам 28-665 SEQ ID NO: 1431 (BZGJ9-10 DS-Cav1 Longlink Ferritin).
67. Иммуноген по п.63, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную:
остаткам 56-500 SEQ ID NO: 1220 (GSJnh2F);
остаткам 48-429 SEQ ID NO: 1263 (MP11);
остаткам 56-536 SEQ ID NO: 1266 (GSJnh2Fd-F);
остаткам 56-526 SEQ ID NO: 1268 (GSJnh4Fd-F);
остаткам 53-256 SEQ ID NO: 1275 (m0e-resurf1-Ferritin); или
остаткам 52-437 SEQ ID NO: 1281 (LS1-E-CP_RBD51-307_11mutDS-Cav1_THS).
68. Иммуноген по любому из предшествующих пунктов, где рекомбинантный белок F RSV связан с меткой для очистки.
69. Иммуноген по любому из предшествующих пунктов, где рекомбинантный белок F RSV образует тример в фосфатно-солевом буфере при физиологических значениях pH.
70. Иммуноген по любому из предшествующих пунктов, где иммуноген образует гомогенную популяцию иммуногенов при инкубации в водном растворе, где по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90 и/или по меньшей мере 95% иммуногенов, инкубированных в растворе, специфически связываются с антителом, специфичным к предшествующей слиянию конформации, после:
(a) инкубации в течение одного часа в 350 мМ NaCl, pH 7,0, при 50°C;
(b) инкубации в течение одного часа в 350 мМ NaCl, pH 3,5, при 25°C;
(c) инкубации в течение одного часа в 350 мМ NaCl, pH 10, при 25°C;
(d) инкубации в течение одного часа при осмолярности 10 мМ, pH 7,0, при 25°C;
(e) инкубации в течение одного часа при осмолярности 3000 мМ, pH 7,0, при 25°C; или
(f) десяти циклов замораживания-размораживания в 350 мМ NaCl, pH 7,0; или
(g) комбинации двух или более из (a)-(f); где
иммуноген инкубируют в растворе в отсутствие антитела, специфичного к предшествующей слиянию конформации.
71. Иммуноген по любому из предшествующих пунктов, где:
(a) рекомбинантный белок F RSV или его фрагмент не включают дисульфидную связь между положениями 481 и 489 F RSV, или между положениями 509 и 510 F RSV;
(b) рекомбинантный белок F RSV или его фрагмент не включают остаток цистеина в положениях 481, 489, 509, 510 F RSV или их комбинации;
(c) комбинация (a) и (b).
72. Вирусоподобная частица, содержащая иммуноген по любому из пп.1-61.
73. Белковая наночастица, содержащая иммуноген по любому из пп.1-67.
74. Белковая наночастица по п.73, где белковая наночастица представляет собой наночастицу ферритина, наночастицу инкапсулина, наночастицу оксигеназы/редуктазы серы (SOR), наночастицу синтазы лумазина или наночастицу пируватдегидрогеназы.
75. Иммуноген, вирусоподобная частица или белковая наночастица по любому из пп.1-74, где Fab моноклонального антитела D25 или AM22 специфически связывается с иммуногеном, вирусоподобной частицей или белковой наночастицей с Kd 1 мкМ или менее.
76. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая иммуноген или белковую наночастицу по любому из пп.1-75.
77. Молекула нуклеиновой кислоты по п.76, где молекула нуклеиновой кислоты кодирует белок-предшественник иммуногена или белковой наночастицы.
78. Молекула нуклеиновой кислоты по п.77, где белок-предшественник содержит, от N-конца к C-концу, сигнальный пептид, полипептид F2, полипептид Pep27 и полипептид F1.
79. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.76-78, кодон-оптимизированная для экспрессии в клетке человека или животного семейства бычьих.
80. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.76-79, функционально связанная с промотором.
81. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.80.
82. Вектор по п.81, где вектор представляет собой вирусный вектор.
83. Вирусный вектор по п.82, где вирусный вектор представляет собой вектор на основе парагриппа крупного рогатого скота, вектор на основе вируса парагриппа человека, вектор на основе вируса болезни Ньюкасла, вектор на основе вируса Сендай, вектор на основе вируса кори, ослабленный вектор RSV, вектор на основе парамиксовируса, вектор на основе аденовируса, вектор на основе альфавируса, вектор на основе вируса венесуэльского энцифалита лошадей, вектор на основе вируса леса Семлики, вектор на основе вируса Синдбис, вектор на основе аденоассоциированного вируса, вектор на основе поксвируса, вектор на основе рабдовируса, вектор на основе вируса везикулярного стоматита, вектор на основе пикорнавируса или вектор на основе вируса герпеса.
84. Молекула нуклеиновой кислоты или вектор по любому из пп.76-83, содержащие нуклеотидную последовательность, указанную в качестве SEQ ID NO: 383, SEQ ID NO: 384, SEQ ID NO: 385 или SEQ ID NO: 386.
85. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп.81-82.
86. Иммуногенная композиция, содержащая эффективное количество иммуногена, вирусоподобной частицы, белковой наночастицы, молекулы нуклеиновой кислоты или вектора по любому из пп.1-84; и фармацевтически приемлемый носитель.
87. Иммуногенная композиция по п.86, дополнительно содержащая адъювант.
88. Иммуногенная композиция по п.87, где адъювант представляет собой квасцы, композицию типа "масло в воде", MF59, AS01, AS03, AS04, MPL, QS21, CpG-олигонуклеотид, агонист TLR7, агонист TLR4, агонист TLR3 или комбинацию двух или более из них.
89. Иммуногенная композиция по п.87, где адъювант стимулирует иммунный ответ Th1.
90. Иммуногенная композиция по любому из пп.86-89, где по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% и/или по меньшей мере 98% иммуногенов, вирусоподобных частиц или белковых наночастиц в композиции специфически связывают антитело, специфичное к предшествующей слиянию конформации, после инкубации в фосфатно-солевом буфере при физиологических значениях pH и 4°C в течение по меньшей мере 24 часов и/или по меньшей мере одной недели.
91. Иммуногенная композиция по любому из пп.86-90, где по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, или по меньшей мере 95% иммуногенов, белков эпитоп-каркас или белковых наночастиц в композиции специфически связываются с антителом, специфичным к предшествующей слиянию конформации, после:
(a) инкубации в течение одного часа в 350 мМ NaCl, pH 7,0, при 50°C;
(b) инкубации в течение одного часа в 350 мМ NaCl, pH 3,5, при 25°C;
(c) инкубации в течение одного часа в 350 мМ NaCl, pH 10, при 25°C;
(d) инкубации в течение одного часа при осмолярности 10 мМ, pH 7,0, при 25°C;
(e) инкубации в течение одного часа при осмолярности 3000 мМ, pH 7,0, при 25°C; или
(f) десяти циклов замораживания-размораживания в 350 мМ NaCl, pH 7,0; или
(g) комбинации двух или более из (a)-(f).
92. Иммуногенная композиция по любому из пп.86-91, содержащая смесь рекомбинантных белков F RSV или их фрагментов на основе белка F RSV подтипа A и B.
93. Иммуногенная композиция по любому из пп.86-92, дополнительно содержащая антитело, специфичное к предшествующей слиянию конформации F RSV, которое специфически связывает иммуноген.
94. Способ индукции иммунного ответа на F RSV у индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества иммуногенной композиции по любому из пп.86-93 для индукции иммунного ответа.
95. Способ по п.94, где иммунный ответ включает иммунный ответ Th1.
96. Способ лечения или предупреждения инфекции RSV у индивидуума, включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества иммуногенной композиции по любому из пп.86-93, тем самым осуществляя лечение или предупреждение инфекции RSV у индивидуума.
97. Способ по любому из пп.94-96, включающий введение иммуногенной композиции по принципу первичной иммунизации - усиливающей иммунизации.
98. Способ по любому из пп.94-97, дополнительно включающий введение индивидууму терапевтически эффективного количества средства против RSV.
99. Способ обнаружения или выделения антитела, связывающего F RSV, у индивидуума, включающий:
предоставление эффективного количества иммуногена, вирусоподобной частицы или белковой наночастицы по любому из пп.1-75;
контактирование биологического образца от индивидуума с рекомбинантным белком F RSV или белковой наночастицей в условиях, достаточных для образования иммунного комплекса между рекомбинантным белком F RSV или белковой наночастицей и антителом, связывающим F RSV; и
обнаружение иммунного комплекса, тем самым, обнаруживая или выделяя антитело, связывающее F RSV, у индивидуума.
100. Способ по любому из пп.94-99, где индивидуум имеет риск инфекции RSV или имеет инфекцию RSV.
101. Способ по п.100, где инфекция RSV представляет собой инфекцию RSV подтипа A человека, RSV подтипа B человека или бычьим RSV.
102. Способ по любому из пп.94-101, где индивидуум представляет собой человека или ветеринарного индивидуума.
103. Способ по любому из пп.94-101, где индивидуумом является индивидуум в возрасте менее одного года, более 65 лет или беременная женщина.
104. Способ по любому из пп.94-101, где индивидуумом является женщина детородного возраста, ребенок школьного возраста, ребенок в возрасте 2-5 лет, ребенок в возрасте 6-12 месяцев или ребенок в возрасте менее шести месяцев.
105. Набор, содержащий иммуноген, вирусоподобную частицу, белковую наночастицу, молекулу нуклеиновой кислоты, вектор, клетку-хозяина или иммуногенную композицию по любому из пп.1-93; и инструкции по применению набора.
106. Применение иммуногена, вирусоподобной частицы, белковой наночастицы, молекулы нуклеиновой кислоты, вектора или иммуногенной композиции по любому из пп.1-93 для ингибирования или предупреждения инфекции RSV у индивидуума.
107. Применение иммуногена, вирусоподобной частицы, белковой наночастицы, молекулы нуклеиновой кислоты, вектора или иммуногенной композиции по любому из пп.1-93 для индукции иммунного ответа на белок F RSV у индивидуума.
Наверх