Слитые белки, содержащие связывающие части pdgf и vegf, и способы их применения - заявка 2015142999 на патент на изобретение в РФ

1. Слитый белок, содержащий (a) внеклеточную часть PDGF-рецептора, (b) внеклеточную часть VEGF-рецептора и (c) домен, способный к мультимеризации, где слитый белок связывается с PDGF и VEGF, и слитый белок упорядочен от N-конца к C-концу в следующем порядке: (a), (b) и (c).
2. Слитый белок по п. 1, где PDGF-рецептором является PDGFRβ.
3. Слитый белок по п. 1 или 2, где внеклеточная часть PDGFR содержит:
(a) Ig-подобные домены D1-D3 PDGFR;
(b) Ig-подобные домены D1-D4 PDGFR;
(c) Ig-подобные домены D1-D5 PDGFR;
(d) аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 85% SEQ ID NO: 1, 2 или 3; или
(e) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, 2 или 3.
4. Слитый белок по п. 1 или 2, где внеклеточная часть VEGF-рецептора содержит:
(a) Ig-подобный домен D2 VEGF-рецептора;
(b) Ig-подобный домен D2 VEGFR1 (FLT-1);
(c) Ig-подобный домен D2 VEGFR1 (FLT-1) и Ig-подобный домен D3 VEGFR2;
(d) Ig-подобные домены D1-D3 VEGFR1 (FLT-1);
(e) аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 85% SEQ ID NO: 4 или 5; или
(f) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или 5.
5. Слитый белок по п. 1 или 2, где слитый белок дополнительно содержит линкерный пептид между внеклеточной частью PDGF-рецептора и внеклеточной частью VEGF-рецептора и/или пептидный линкер между внеклеточной частью VEGF-рецептора и доменом, способным к мультимеризации.
6. Слитый белок по п. 5, где пептидный линкер содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из Gly9 (SEQ ID NO: 47), Glu9 (SEQ ID NO: 48), Ser9
(SEQ ID NO: 49), Gly5-Cys-Pro2-Cys (SEQ ID NO: 50), (Gly4-Ser)3 (SEQ ID NO: 51), Ser-Cys-Val-Pro-Leu-Met-Arg-Cys-Gly-Gly-Cys-Cys-Asn (SEQ ID NO: 52), Pro-Ser-Cys-Val-Pro-Leu-Met-Arg-Cys-Gly-Gly-Cys-Cys-Asn (SEQ ID NO: 53), Gly-Asp-Leu-Ile-Tyr-Arg-Asn-Gln-Lys (SEQ ID NO: 54) и Gly9-Pro-Ser-Cys-Val-Pro-Leu-Met-Arg-Cys-Gly-Gly-Cys-Cys-Asn (SEQ ID NO: 55).
7. Слитый белок по п. 1 или 2, где доменом, способным к мультимеризации, является:
(a) Fc-область антитела;
(b) CH3-область IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4;
(c) CH2-область и CH3-область IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4;
(d) Fc-область антитела, содержащая аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 85% SEQ ID NO: 6; или
(e) Fc-область антитела содержащая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
8. Слитый белок по п. 1 или 2, где слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, 15, 43 или 45 или аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 85% SEQ ID NO: 13, 15, 43 или 45.
9. Слитый белок по п. 1 или 2, где слитый белок находится в димерной или мультимерной форме.
10. Композиция, содержащая слитый белок по любому из пп. 1-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
11. Нуклеиновая кислота, кодирующая слитый белок по любому из пп. 1-8.
12. Клетка-хозяин, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок по любому из пп. 1-8.
13. Способ получения слитого белка, включающий культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок по любому из пп. 1-8, при условии, при котором продуцируется слитый белок, и извлечение слитого белка, продуцируемого клеткой-хозяином.
14. Способ доставки слитого белка субъекту, включающий введение субъекту эффективного количества слитого белка по
любому из пп. 1-9.
15. Способ по п. 14, где у субъекта имеется макулодистрофия, влажная возрастная макулодистрофия, сухая возрастная макулодистрофия, пролиферативная диабетическая ретинопатия, рак, ревматоидный артрит, остеоартрит, астма, увеит или неоваскуляризация роговицы, и где слитый белок необязательно вводят субъекту с помощью интравитреальной инъекции.
16. Вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок по любому из пп. 1-8.
17. Частица rAAV, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок по любому из пп. 1-8.
18. Способ получения частицы rAAV, включающий:
(a) культивирование клетки-хозяина при условии, при котором получают частицы rAAV, где клетка-хозяин содержит (i) один или несколько генов для упаковки AAV, где каждый упомянутый ген упаковки AAV кодирует белок, необходимый для репликации или капсидирования AAV; (ii) провектор rAAV, содержащий нуклеотид, кодирующий слитый белок по любому из пп. 1-8, фланкированный по меньшей мере с помощью одного ITR AAV, и (iii) вспомогательный функциональный элемент AAV; и
(b) извлечение частиц rAAV, продуцируемых клеткой-хозяином.
19. Способ доставки вирусного вектора субъекту, включающий введение субъекту частицы rAAV по п. 17, где слитый белок, кодируемый частицой rAAV, экспрессируется в субъекте.
20. Способ по п. 19, где у субъекта имеется макулодистрофия, влажная возрастная макулодистрофия, сухая возрастная макулодистрофия, пролиферативная диабетическая ретинопатия, рак, ревматоидный артрит, остеоартрит, астма, увеит или неоваскуляризация роговицы, и где частицу rAAV необязательно вводят субъекту с помощью интравитреальной инъекции.
Наверх