Способ получения частично очищенных внеклеточных продуктов метаболизма bacillus coagulans и их биологические применения - заявка 2015143406 на патент на изобретение в РФ

1. Способ очистки для получения частично очищенного препарата внеклеточного метаболита пробиотического бактериального штамма Bacillus coagulans SBC37-01 (депонированного в Коллекцию типовых культур микроорганизмов и Генетический банк, и которому присвоен номер штамма МТСС 5856), демонстрирующего 99% генетической гомологии с известными бактериальными штаммами Bacillus coagulans АТСС 31284, Bacillus coagulans NBRC 3887 и Bacillus coagulans АТСС 7050, причем указанный способ очистки включает следующие стадии:
a) инокуляция культуры Bacillus coagulans МТСС 5856, демонстрирующей 99% генетической гомологии с известными бактериальными штаммами Bacillus coagulans АТСС 31284, Bacillus coagulans NBRC 3887 и Bacillus coagulans АТСС 7050, в 1,0 литр бульонной питательной среды дрожжевого экстракта с глюкозой и ацетатом или бульонной питательной среды MRS, содержащей 0,5% твин-80 или среды на основе порошка кукурузного экстракта;
b) проведение ферментации в инокулированной на стадии 1 среде в течение 24-48 ч при 37°C и 120 об/мин;
c) центрифугирование ферментативного бульона, полученного на стадии 2, при 4000-7000 об/мин;
d) концентрирование супернатантов, полученных на стадии 3, в 10 раз с использованием роторного испарителя при 50°C;
e) добавление по каплям 150 мл охлажденного ацетона к 100 мл сконцентрированных в десять раз супернатантов, полученных на стадии 4, с последующим перемешиванием;
f) инкубирование смеси, полученной на стадии 5, при 0°C в течение 30 мин с последующим центрифугированием при 7000-8000 об/мин;
g) удаление осадка, полученного на стадии 6, и сбор насыщенного ацетоном 60% супернатанта (приблизительно 200 мл);
h) концентрирование насыщенного ацетоном супернатанта, полученного на стадии 7, до 50 мл при помощи роторного испарителя;
i) доведение pH до 5,0 при использовании 4 н HCl, фильтрование (фильтр с размером пор 0,22 мкм; Millex, Millipore, Индия) и хранение при -20°C до дальнейшего применения;
j) лиофилизация/сушка распылением/сушка на поддоне супернатанта, полученного на стадии 8.
2. Способ микробиологического контроля, включающий стадию приведения в контакт эффективных концентраций частично очищенного препарата внеклеточного метаболита пробиотического бактериального штамма Bacillus coagulans SBC37-01 (депонированного в Коллекцию типовых культур микроорганизмов и Генетический банк, и которому присвоен номер штамма МТСС 5856), демонстрирующего 99% генетической гомологии с известными бактериальными штаммами Bacillus coagulans АТСС 31284, Bacillus coagulans NBRC 3887 и Bacillus coagulans АТСС 7050, и микробной клетки-мишени.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что микробная клетка представляет собой клетку, выбранную из группы, содержащей Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus mutans, Propionibacterium acnes, Bacillus cereus и Salmonella abony.
4. Способ микробиологического контроля, включающий стадию приведения в контакт микробной клетки с эффективными концентрациями препарата, состоящего, по существу, из частично очищенного препарата внеклеточного метаболита пробиотического бактериального штамма Bacillus coagulans SBC37-01 (депонированного в Коллекцию типовых культур микроорганизмов и Генетический банк, и которому присвоен номер штамма МТСС 5856), демонстрирующего 99% генетической гомологии с известными бактериальными штаммами Bacillus coagulans АТСС 31284, Bacillus coagulans NBRC 3887 и Bacillus coagulans АТСС 7050, и синергической смеси консервантов, содержащей приблизительно 61 мас./мас.% тимола, приблизительно 38% монолаурина и приблизительно 1 мас./мас.%.
магнолола, полученного из сверхкритических жидких экстрактов Magnolia officinalis.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что микробная клетка представляет собой клетку, выбранную из группы, содержащей Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus mutans, Propionibacterium acnes, Bacillus cereus и Salmonella abony.
6. Способ ингибирования образования микробной биопленки, включающий стадию приведения в контакт продуцирующих биопленку микробных клеток и препарата, состоящего по существу из частично очищенного препарата внеклеточного метаболита пробиотического бактериального штамма Bacillus coagulans SBC37-01 (депонированного в Коллекции типовых культур микроорганизмов и Генетический банк, и которому присвоен номер штамма МТСС 5856), демонстрирующего 99% генетической гомологии с известными бактериальными штаммами Bacillus coagulans АТСС 31284, Bacillus coagulans NBRC 3887 и Bacillus coagulans АТСС 7050, отдельно или в комбинации с синергической смесью консервантов, содержащей приблизительно 61 мас./мас.% тимола, приблизительно 38% монолаурина и приблизительно 1 мас./мас.% магнолола, полученного из сверхкритических жидких экстрактов Magnolia officinalis.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что продуцирующая биопленку микробная клетка представляет собой клетку, выбранную из группы, содержащей Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus mutans.
8. Способ предупреждения снижения pH и дальнейшего накопления биопленки Streptococcus mutans в присутствии сахарозы, включающий стадию приведения в контакт продуцирующего биопленку/бляшки Streptococcus mutans и препарата, состоящего по существу из частично очищенного препарата внеклеточного метаболита пробиотического бактериального штамма Bacillus
coagulans SBC37-01 (депонированного в Коллекцию типовых культур микроорганизмов и Генетический банк, и которому присвоен номер штамма МТСС 5856), демонстрирующего 99% генетической гомологии с известными бактериальными штаммами Bacillus coagulans АТСС 31284, Bacillus coagulans NBRC 3887 и Bacillus coagulans АТСС 7050, отдельно или в комбинации с синергической смесью консервантов, содержащей приблизительно 61 мас./мас.% тимола, приблизительно 38% монолаурина и приблизительно 1 мас./мас.% магнолола, полученного из сверхкритических жидких экстрактов Magnolia officinalis.
Наверх