Способ получения нерастворимого полимерно-сшитого тетрамера гемоглобина - заявка 2016136456 на патент на изобретение в РФ

1. Способ получения полимерного тетрамера гемоглобина, отличающийся тем, что растворимый тетрамер нативного гемоглобина человека получают из взвеси отмытых 2%-ным раствором хлорида натрия эритроцитов гемолизом после добавления дихлорэтана, с последующей модификацией молекул растворимого нативного тетрамера гемоглобина альдегидаммиаком для образования нерастворимого поперечно-сшитого тетрамера гемоглобина, для чего раствор нативного растворимого тетрамера гемоглобина смешивают ex tempore в соотношении 1:1 с композицией, состоящей из 10%-ного водного раствора аммиака и 40% формальдегида в соотношении 4:1, инкубируют смесь в течение 30 минут при температуре 37°С в темноте, образовавшийся гель отделяют от реакционной жидкости, измельчают путем поэтапного продавливания вначале через крупносетчатые сита с размером пор 500 микрон, затем через среднесетчатые сита с размером пор 200 микрон, к полученной взвеси добавляют водный раствор бисульфита натрия для стабилизации поперечных сшивок, полученную взвесь геля нерастворимого поперечно-сшитого тетрамера гемоглобина отмывают 1%-ным раствором NaCl в соотношении 1:10 до исчезновения пероксидазной активности в промывочном растворе, позволяющую судить об отсутствии растворимых форм гемоглобина, после чего переносят и сохраняют в таре, из которой, по мере необходимости используют для поставленных целей.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что гемолиз взвеси эритроцитов проводится с добавлением тетрахлорэтилена в соотношении 4:1.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что водная композиция альдегидаммиака по п. 1 составлена из 10%-ного водного раствора аммиака и 15% глутаральдегида в соотношении 1:1,5.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для образования нерастворимого поперечно-сшитого тетрамера гемоглобина, раствор нативного растворимого тетрамера гемоглобина поэтапно смешивают с 10%-ным водным раствором аммиака в соотношении 1:0,5, смесь перемешивают, после чего к ней добавляют 40% формальдегид в соотношении 1:3,5, смесь повторно перемешивают, инкубируют в течение 30 минут при 37°С и далее выполняют последовательность по п. 1.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для образования нерастворимого поперечно-сшитого тетрамера гемоглобина, раствор нативного растворимого тетрамера гемоглобина поэтапно смешивают с 10%-ным водным раствором аммиака в соотношении 1:0,5, смесь перемешивают, после чего к ней добавляют 15% глутаральдегид в соотношении 1:1,5, повторно перемешивают, инкубируют в течение 30 минут при 37°С и далее выполняют последовательность по п. 1.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полученный нерастворимый поперечно-сшитый тетрамер гемоглобина сохраняет свойства комплексообразования с нативным гаптоглобином с образованием растворимого комплекса, состоящего из гаптоглобина и альфа-цепи гемоглобина, свободного от нерастворимого полимерно-сшитого тетрамера гемоглобина и используется для биотехнологических исследований и производства, а также для диагностики.
Наверх