Библиотеки tcr - заявка 2016140189 на патент на изобретение в РФ

1. Библиотека частиц, при этом библиотека характеризуется дисплеем множества различных рецепторов Т-клеток (TCR), причем множество TCR по существу состоит из TCR, содержащих альфа-цепь, содержащую вариабельный домен альфа-цепи из естественного репертуара, и бета-цепь, содержащую вариабельный домен бета-цепи из естественного репертуара, причем вариабельный домен альфа-цепи включает генный продукт TRAV12-2 или TRAV21, а вариабельный домен бета-цепи включает генный продукт TRBV6.
2. Библиотека частиц, при этом библиотека характеризуется дисплеем множества различных рецепторов Т-клеток (TCR), причем множество TCR по существу состоит из TCR, содержащих альфа-цепь, содержащую вариабельный домен альфа-цепи из естественного репертуара, и бета-цепь, содержащую вариабельный домен бета-цепи из естественного репертуара, причем вариабельный домен альфа-цепи включает генный продукт TRAV12-2 или TRAV21, а вариабельный домен бета-цепи включает генный продукт TRBV6, и причем по меньшей мере часть TCR содержит вариабельный домен альфа-цепи и/или вариабельный домен бета-цепи, содержащий искусственную мутацию.
3. Библиотека по п. 1 или 2, причем генный продукт TRBV6 представляет собой генный продукт TRBV6-1, TRBV6-2, TRBV6-3, TRBV6-5 или TRBV6-6.
4. Библиотека по п. 1 или 2, причем вариабельный домен альфа-цепи TCR включает генный продукт TRAV12-2.
5. Библиотека по п. 1 или 2, причем вариабельный домен альфа-цепи TCR включает генный продукт TRAV21.
6. Библиотека по п. 1 или 2, причем дисплей вариабельного домена альфа-цепи и вариабельного домена бета-цепи представлен одной полипептидной цепью.
7. Библиотека по п. 1 или 2, причем TCR включают неестественную дисульфидную связь между константным участком альфа-цепи и константным участком бета-цепи.
8. Библиотека по п. 1 или 2, причем TCR включают естественную дисульфидную связь между константным участком альфа-цепи и константным участком бета-цепи.
9. Библиотека по п. 1 или 2, причем каждая альфа-цепь и каждая бета-цепь включает домен димеризации.
10. Библиотека по п. 9, причем домен димеризации является гетерологичным.
11. Библиотека по п. 1 или 2, причем частицы являются фаговыми частицами.
12. Библиотека по п. 1 или 2, причем частицы являются рибосомами.
13. Библиотека по п. 1 или 2, причем частицы являются дрожжевыми клетками.
14. Библиотека по п. 1 или 2, причем частицы являются клетками млекопитающего.
15. Искусственный выделенный рецептор Т-клеток (TCR), содержащий вариабельный домен альфа-цепи TCR, включающий генный продукт TRAV12-2 или генный продукт TRAV21, и вариабельный домен бета-цепи TCR, включающий генный продукт TRBV6, полученный из библиотеки по любому из пп. 1-14.
16. TCR по п. 15, причем генный продукт TRBV6 представляет собой генный продукт TRBV6-1, TRBV6-2, TRBV6-3, TRBV6-5 или TRBV6-6.
17. TCR по любому из п. 15 или 16, причем TCR является растворимым.
18. Применение библиотеки по любому из пп. 1-14 для выявления TCR, который специфично связывается с пептидным антигеном.
19. Способ получения рецептора Т-клеток, который специфично связывает пептидный антиген, предусматривающий скрининг библиотеки по первому аспекту настоящего изобретения при помощи пептидного антигена, при этом способ предусматривает:
a) пэннинг библиотеки с применением в качестве мишени пептидного антигена;
b) повторение стадии а) один или несколько раз;
c) скрининг фаговых клонов, выявленных на стадии а) или b); и
d) выявление TCR, который специфично связывается с пептидным антигеном.
20. Нуклеиновая кислота, кодирующая вариабельный домен альфа-цепи и/или вариабельный домен бета-цепи TCR у TCR по любому из пп. 15-17.
21. Способ получения библиотеки частиц, причем библиотека характеризуется дисплеем множества различных TCR, при этом способ предусматривает:
i) получение множества нуклеиновых кислот, которые кодируют различные вариабельные домены альфа-цепи TRAV12-2 или TRAV21;
ii) получение множества нуклеиновых кислот, которые кодируют различные вариабельные домены бета-цепи TRBV6;
iii) клонирование нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельный домен альфа-цепи TRAV12-2 или TRAV21, в векторы экспрессии;
iv) клонирование нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельный домен бета-цепи TRBV6, в те же или в различные векторы; и
v) экспрессирование векторов в частицах с получением, таким образом, библиотеки, по существу состоящей из TCR, содержащих вариабельный домен альфа-цепи и вариабельный домен бета-цепи, кодируемых такими нуклеиновыми кислотами.
22. Способ получения библиотеки частиц, причем библиотека характеризуется дисплеем множества различных TCR, при этом способ предусматривает:
i) получение множества нуклеиновых кислот, которые кодируют различные вариабельные домены альфа-цепи TRAV12-2 или TRAV21, с помощью праймеров, которые гибридизируются с нуклеиновыми кислотами, кодирующими вариабельные домены альфа-цепи TRA12-2 или TRAV21;
ii) получение множества нуклеиновых кислот, которые кодируют различные вариабельные домены бета-цепи TRBV6, с помощью праймеров, которые гибридизируются с нуклеиновыми кислотами, кодирующими вариабельные домены бета-цепи TRAV6;
iii) клонирование нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельный домен альфа-цепи TRAV12-2 или TRAV21, в векторы экспрессии;
iv) клонирование нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельный домен бета-цепи TRBV6, в те же или в различные векторы; и
v) экспрессирование векторов в частицах с получением, таким образом, библиотеки, по существу состоящей из TCR, содержащих вариабельный домен альфа-цепи и вариабельный домен бета-цепи, кодируемых такими нуклеиновыми кислотами, с которыми гибридизируются указанные праймеры.
23. Способ по п. 21 или 22, предусматривающий, что нуклеиновые кислоты стадии (i) и стадии (ii) получают из естественного репертуара.
24. Способ по п. 21 или 22, предусматривающий дополнительную стадию введения в нуклеиновые кислоты искусственных мутаций.
25. Способ по п. 21 или 22, предусматривающий, что искусственные мутации вносят в нуклеиновые кислоты до стадии iii).
26. Способ по п. 21 или 22, предусматривающий, что последовательностью нуклеиновой кислоты TRBV6 является генный продукт TRBV6-1, TRBV6-2, TRBV6-3, TRBV6-5 или TRBV6-6.
27. Способ по п. 21 или 22, предусматривающий, что вариабельный домен альфа-цепи TCR и вариабельный домен бета-цепи TCR экспрессируются в виде одной полипептидной цепи.
28. Способ получения рецептора Т-клеток, который специфично связывает пептидный антиген, предусматривающий скрининг библиотеки по любому из пп. 1-14 при помощи пептидного антигена.
29. Частица, характеризующаяся дисплеем на своей поверхности TCR по любому из пп. 15-17.
30. Частица по п. 29, причем частица представляет собой фаговую частицу, рибосому, дрожжевую клетку или клетку млекопитающего.
Наверх