Способы получения рекомбинантных гликопротеинов с модифицированным гликозилированием - заявка 2016140528 на патент на изобретение в РФ

1. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения, которая экспрессирует фукозидазу, эндогликозидазу или их обе, при этом модифицированная клетка-хозяин животного происхождения продуцирует гликопротеины с модифицированным гликозилированием.
2. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по п. 1, отличающаяся тем, что фукозидаза представляет собой фукозидазу млекопитающего или бактериальную фукозидазу.
3. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по п. 1 или п. 2, отличающаяся тем, что эндогликозидаза представляет собой фермент Эндо S.
4. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по любому из пп. 1-3, которая дополнительно экспрессирует гликопротеин.
5. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по п. 4, отличающаяся тем, что гликопротеин является экзогенным.
6. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по п. 4, отличающаяся тем, что гликопротеин представляет собой антитело, Fc-слитый белок, цитокин, гормон, фактор роста или фермент.
7. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по п. 6, отличающаяся тем, что гликопротеин представляет собой антитело.
8. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по любому из пп. 1-3, 5-7, отличающаяся тем, что клетка животного происхождения представляет собой клетку млекопитающего.
9. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по п. 8, отличающаяся тем, что клетка млекопитающего представляет собой клетку яичника китайского хомячка (СНО), клетку миеломы крысы, клетку почки детеныша хомяка (BHK), гибридомную клетку, клетку Namalwa, эмбриональную стволовую клетку или оплодотворенное яйцо.
10. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по любому из пп. 1-3, 5-7, 9, которая экспрессирует и фукозидазу, и эндогликозидазу.
11. Генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения по любому из пп. 1-3, 5-7, 9, которая экспрессирует (i) FUCA1 человека, FUCA2 человека, фукозидазу Cricetulus griseus, альфа-L-1 α1,6-фукозидазу Chryseobacterium meningosepticum или бактериальную фукозидазу BF3242, и (ii) Эндо S.
12. Способ получения дефукозилированного гликопротеина, включающий:
получение генетически модифицированной клетки-хозяина животного происхождения, экспрессирующей (а) гликопротеин и (b) фукозидазу, эндогликозидазу или их обе;
культивирование клетки-хозяина животного происхождения при условиях, обеспечивающих возможность получения гликопротеина и фукозидазы, эндогликозидазы или их обеих; и
сбор клетки-хозяина животного происхождения или культурального супернатанта для выделения гликопротеина.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что фукозидаза представляет собой фукозидазу млекопитающего или бактериальную фукозидазу.
14. Способ по п. 12 или 13, отличающийся тем, что эндогликозидаза представляет собой фермент Эндо S.
15. Способ по любому из пп. 12-13, отличающийся тем, что гликопротеин является экзогенным.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что гликопротеин представляет собой антитело, Fc-слитый белок, цитокин, гормон, фактор роста или фермент.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что гликопротеин представляет собой антитело.
18. Способ по любому из пп. 12-13, 16-17, отличающийся тем, что генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения представляет собой клетку млекопитающего.
19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что клетка млекопитающего представляет собой клетку яичника китайского хомячка (СНО), клетку миеломы крысы, клетку почки детеныша хомяка (BHK), гибридомную клетку, клетку Namalwa, эмбриональную стволовую клетку или оплодотворенное яйцо.
20. Способ по любому из пп. 12-13, 16-17, 19, отличающийся тем, что генетически модифицированная клетка-хозяин животного происхождения экспрессирует как фукозидазу, так и эндогликозидазу.
21. Способ по любому из пп. 12-13, 16-17, 19, дополнительно включающий выделение гликопротеина.
22. Способ по любому из пп. 12-13, 16-17, 19, дополнительно включающий анализ паттерна гликозилирования гликопротеина.
23. Способ получения генетически модифицированной клетки-хозяина животного происхождения по п. 1, включающий введение в клетку животного происхождения одного или нескольких векторов экспрессии, которые совместно кодируют фукозидазу, эндогликозидазу или их обе.
24. Способ по п. 23, дополнительно включающий введение в клетку животного происхождения вектора экспрессии, кодирующего гликопротеин.
Наверх