Способ определения концентрации гаптоглобина в биологических жидкостях - заявка 2016140978 на патент на изобретение в РФ

1. Способ определения концентрации гаптоглобина в биологических жидкостях путем добавления растворенного гемоглобина, отличающийся тем, что в биологической жидкости, содержащей гаптоглобин предварительно измеряют оптическую плотность при 490 нм, обозначая значение как V1, затем к ней добавляют водную композицию взвеси нерастворимого модифицированного тетрамера гемоглобина человека, предварительно полученного из отмытых эритроцитов гемолизом, с последующей модификацией молекул гемоглобина альдегид-аммиаком для образования нерастворимого тетрамера гемоглобина, инкубируют смесь в течение 1 часа для образования комплекса гаптоглобина с а-цепью гемоглобина, с которой избирательно связывается гаптоглобин биологической жидкости, с одновременной диссоциацией части тетрамера нерастворимого полимерно-сшитого гемоглобина, который самостоятельно отделяется от него в виде комплекса вместе с а-цепью гемоглобина в раствор, который после экспозиции в течение 1 часа отделяют центрифугированием от взвеси нерастворимого тетрамера гемоглобина, в растворе повторно измеряют оптическую плотность при длине волны 490 нм, обозначая значение как V2, и по разности значений V2-V1 определяют концентрацию гемоглобина в комплексе с гаптоглобином, на основании которой определяют концентрацию гаптоглобина, выражая ее в относительных единицах, например, в процентах или в других значениях, например, мг %, или мг/дл.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определяют пероксидазную активность гемоглобина в комплексе с гаптоглобином, любым, пригодным для этого реактивом или комбинацией реактивов, например, пирогаллоловым реактивом, бензидиновым реактивом.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для определения гаптоглобина используют нерастворимый носитель - бумажные полоски, пропитанные нативным гемоглобином с последующей модификацией альдегид-аммиаком нативного гемоглобина в нерастворимый тетрамер гемоглобина, который остается фиксированным на нерастворимом носителе и используется для определения гаптоглобина.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для определения гаптоглобина используют нерастворимый носитель - полоски из ацетат целлюлозной мембраны, пропитанные нативным гемоглобином с последующей модификацией альдегид-аммиаком нативного гемоглобина в нерастворимый тетрамер гемоглобина, который остается фиксированным на нерастворимом носителе и используется для определения гаптоглобина.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для определения гаптоглобина используют предварительно подготовленный нерастворимый носитель, имеющий модифицированную химическим путем реакционноспособную группу для взаимодействия с альдегид-аммиаком и нативным гемоглобином, получают фиксированный нерастворимый полимерно-сшитый тетрамер гемоглобина, который инкубируют с биологической жидкостью, содержащей гаптоглобин в течение 1 часа при 37С, нерастворимый носитель удаляют, после чего в ней определяют пероксидазную активность образовавшегося комплекса а-субъединиц гемоглобина с гаптоглобином, например, бензидиновым реактивом, фотометрируют при длине волны 490 нм, обозначая как значение V2, полученный результат сравнивают с фотометрическим результатом, определенным в порции той же биологической жидкости без добавления модифицированного нерастворимого тетрамера гемоглобина, обозначая как V1 и по разности этих двух значений V2-V1 определяют концентрацию гемоглобина в комплексе с гаптоглобином, на основании которой определяют концентрацию гаптоглобина, выражая ее в относительных единицах, например, в процентах или в других значениях, например, мг %, или мг/дл.
Наверх