Анализ на гликированные белки - заявка 2016141232 на патент на изобретение в РФ

1. Способ определения фракции гликированного белка в образце, включающий
контактирование (i) меченого элемента специфического связывания, специфического для тотального белка или пептида, соответствующего тотальному белку, или для негликированного белка или пептида, и (ii) меченого элемента специфического связывания, специфического для гликированного белка или пептида, с
a) образцом, содержащим указанный белок или пептид указанного белка, чувствительный к гликированию; и
b) гликированным вариантом указанного белка или пептида не из образца; или
c) негликированным вариантом указанного белка или пептида не из образца;
детекцию множества сигналов, где по меньшей мере первый сигнал показывает уровень гликированного белка, и по меньшей мере второй сигнал показывает уровень тотального белка или негликированного белка; и
определение соотношения между гликированным белком и негликированным белком или между гликированным белком и тотальным белком как показателя фракции указанного белка, который в указанном образце является гликированным,
где указанное контактирование осуществляют в условиях конкурентного связывания, и при этом указанный первый сигнал и указанный второй сигнал являются различимыми.
2. Способ по п. 1, где указанный белок представляет собой человеческий гемоглобин.
3. Способ по п. 2, где указанный гликированный пептид представляет собой N-концевой пептид HbA1C.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где гликированный вариант указанного белка, полученного не из образца, или пептида представляет собой биотинилированный HbA1c, и указанную детекцию выполняют в устройстве с латеральным потоком, и биотинилированный HbA1c захватывается в сайте иммобилизации, включающем стрептавидин.
5. Способ по п. 3, где указанный пептид отщепляется пепсином или эндопептидозой GluC.
6. Способ по п. 1, где указанный белок представляет собой человеческий сывороточный альбумин.
7. Способ по п. 6, где указанный пептид включает, по меньшей мере, один из Lys525, Lys199, Lys439 и Lys281.
8. Способ по п. 1, где указанный пептид представляет собой внутренний пептид.
9. Способ по п. 8, где указанный пептид имеет длину в 5-20 аминокислот.
10. Способ по п. 1, где указанный пептид расщеплен трипсином, эндопептидозой GluC, пепсином или пролилэндопептидазой.
11. Способ по любому из пп. 1-10, где указанные первый и второй сигналы являются флуоресцентными сигналами или сигналами TRF.
12. Способ по любому из пп. 1-11, где указанную детекцию выполняют в устройстве с латеральным потоком, при этом указанное устройство включает зону детекции, включающую сайт иммобилизации для гликированного белка или пептида и сайт иммобилизации для указанного тотального белка или пептида, соответствующего тотальному белку, где сигнал, соответствующий гликированному белку или пептиду, и сигнал, соответствующий тотальному белку или пептиду, соответствующему тотальному белку, детектируют раздельно.
13. Способ по п. 12, где указанный сайт иммобилизации для гликированного белка или пептида и указанный сайт иммобилизации для тотального белка или пептида, соответствующего тотальному белку, физически разделены.
14. Способ по п. 12, где указанный сайт иммобилизации для гликированного белка или пептида и указанный сайт иммобилизации для указанного тотального белка или пептида, соответствующего тотальному белку, являются одинаковыми, и указанные первый и второй сигналы мультиплексированы.
15. Способ по любому из пп. 12-14, где образец вводят в контакт с контрольным меченым элементом связывания, который специфически связывает мишень не в образце, и указанный контрольный меченый элемент связывания иммобилизован в сайте иммобилизации, содержащем иммобилизованные варианты мишени не в образце, и количество контрольного меченого элемента связывания, локализованного связью с указанным сайтом иммобилизации, используют для нормализации сигналов для уровня гликированного белка или тотального белка или того и другого.
16. Способ по п. 15, где указанная мишень не в образце представляет собой белок от вида, не относящегося к человеку.
17. Способ по п. 15 или 16, где указанный контрольный меченый элемент связывания, который специфически связывает мишень не в образце, представляет собой меченое антитело.
18. Способ по любому из пп. 1-17, где указанную детекцию выполняют в устройстве для анализа в латеральном потоке, где указанное устройство включает зону детекции, включающую сайт иммобилизации для гликированного белка или пептида и сайт иммобилизации для негликированного белка или пептида, при этом сигнал, соответствующий гликированному белку или пептиду, и сигнал, соответствующий негликированному белку или пептиду, детектируют раздельно.
19. Способ по п. 18, где указанный сайт иммобилизации для гликированного белка или пептида и указанный сайт иммобилизации для негликированного белка или пептида, физически разделены.
20. Способ по п. 18, где указанный сайт иммобилизации для гликированного белка или пептида и указанный сайт иммобилизации для негликированного белка или пептида, являются одинаковыми, и указанные первый и второй сигналы мультиплексированы.
21. Способ по п. 1, где указанное множество изоформ детектируют в одной зоне.
22. Способ по п. 1, где указанные изоформы детектируют в отдельных зонах.
23. Способ по п. 1, где указанный белок представляет собой бета-цепь гемоглобина, и указанные изоформы включают, по меньшей мере, две из HbA, HbC, HbD Punjab, HbE и HbS.
24. Способ по п. 1, где указанный белок представляет собой бета-цепь гемоглобина, и указанные изоформы включают HbC, HbD Punjab, HbE и HbS.
25. Способ по п. 1, где указанный белок представляет собой бета-цепь гемоглобина, и указанные изоформы включают HbE и HbS.
Наверх