Мультимерные fc-белки - заявка 2016139022 на патент на изобретение в РФ

1. Мультимерный химерный белок, содержащий два или более полипептидных мономерных звеньев;
где каждое полипептидное мономерное звено содержит Fc-домен антитела, содержащий две Fc-области тяжелых цепей;
где каждая Fc-область тяжелой цепи содержит остаток цистеина в положении 309, и, по меньшей мере, одну дополнительную мутацию, которая изменяет связывание с FcR и/или связывание с комплементом, и ее С-концевая область сшита с хвостовой частью, которая вызывает сборку мономерных звеньев в мультимер; и
где каждое полипептидное мономерное звено не содержит вариабельную область антитела.
2. Мультимерный химерный белок по п.1, отличающийся тем, что Fc-домен антитела выделен из IgG.
3. Мультимерный химерный белок по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
4. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что Fc-область тяжелой цепи содержит домен CH3, выделенный из IgG1.
5. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий остаток аргинина в положении 355.
6. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий остаток цистеина в положении 355.
7. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домен CH3, выделенный из IgG4, в котором остаток глутамина в положении 355 заменен на остаток аргинина (Q355R) или остаток цистеина (Q355C).
8. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2., отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домен CH4, выделенный из IgM.
9. Мультимерный химерный белок по п.1, отличающийся тем, что хвостовая часть выделена из IgM или IgA.
10. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит шарнирную область на своем N-конце.
11. Мультимерный химерный белок по п.10, отличающийся тем, что шарнирная область содержит мутантную последовательность CPPC.
12. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий шесть или двенадцать полипептидных мономерных звеньев.
13. Мультимерный химерный белок по п.1 или 9, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG1, в которых остаток лейцина в положении 234 и/или остаток пролина в положении 331 заменены на другую аминокислоту.
14. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG1, в которых остаток лейцина в положении 234 заменен на остаток фенилаланина, и остаток пролина в положении 331 заменен на остаток серина (L234F/P331S).
15. Мультимерный химерный белок по п.1, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG4, в которых один или более аминокислотных остатков, выбранных из группы, состоящей из остатка фенилаланина в положении 234, остатка фенилаланина в положении 296, остатка глицина в положении 327, остатка серина в положении 330 и остатка серина в положении 331, заменены на другую аминокислоту.
16. Мультимерный химерный белок по любому из п.1 или 15, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG4, в которых остаток фенилаланина в положении 234 заменен на остаток лейцина (F234L).
17. Мультимерный химерный белок по п.1 или 15, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG4, в которых остаток фенилаланина в положении 234 заменен на остаток лейцина, и остаток фенилаланина в положении 296 заменен на остаток тирозина (F234L/F296Y).
18. Мультимерный химерный белок по п.1 или 15, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG4, в которых остаток глицина в положении 327 заменен на остаток аланина, и остаток серина в положении 330 заменен на остаток аланина (G327A/S330A).
19. Мультимерный химерный белок по п.1 или 15, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG4, в которых остаток глицина в положении 327 заменен на остаток аланина, и остаток серина в положении 331 заменен на остаток пролина (G327A/S331P).
20. Мультимерный химерный белок по п.1 или 15, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит домены CH2 и CH3, выделенные из IgG4, в которых остаток серина в положении 330 заменен на остаток аланина, и остаток серина в положении 331 заменен на остаток пролина (S330A/S331P).
21. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи представляет собой гибрид, содержащий домен CH2, выделенный из IgG4, и домен CH3, выделенный из IgG1.
22. Мультимерный химерный белок по п.21, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи, в которой один или более аминокислотных остатков, выбранных из группы, состоящей из остатка фенилаланина в положении 234, остатка фенилаланина в положении 296, остатка глицина в положении 327, остатка серина в положении 330 и остатка серина в положении 331, заменены на другую аминокислоту.
23. Мультимерный химерный белок по п.21, в котором остаток фенилаланина в положении 234 заменен на остаток лейцина, и остаток фенилаланина в положении 296 заменен на остаток тирозина (F234L/F296Y).
24. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые повышают эффективность ингибирования макрофагального фагоцитоза клеток-мишеней, покрытых антителами.
25. Мультимерный химерный белок по п.24, содержащий одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из F234L, F234L и F296Y, G327A, G327A и S331P, S330A и S331P, и, G327A и S330A.
26. Мультимерный химерный белок по п.25, отличающийся тем, что Fc-область тяжелой цепи содержит домен CH2, выделенный из IgG4, и домен CH3, выделенный из IgG1 или IgG4.
27. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые уменьшают высвобождение цитокинов.
28. Мультимерный химерный белок по п.27, содержащий одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из L234F, L234F и P331S, A327G, и, Y296F.
29. Мультимерный химерный белок по п.28, отличающийся тем, что Fc-область тяжелой цепи содержит домен CH2 и домен CH3, выделенные из IgG1.
30. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые уменьшают активацию тромбоцитов.
31. Мультимерный химерный белок по п.30, содержащий одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из L234F и L234F, и P331S.
32. Мультимерный химерный белок по п.31, отличающийся тем, что Fc-область тяжелой цепи содержит домен CH2 и домен CH3, выделенные из IgG1.
33. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые изменяют его профиль связывания с Fc-рецептором.
34. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, который связывается с FcRn.
35. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые увеличивают его связывание с FcRn.
36. Мультимерный химерный белок по п.35, содержащий одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из T250Q, M252Y, S254T, T256E, T307A, T307P, V308C, V308F, V308P, Q311A, Q311R, M428L, H433K, N434F, и N434Y.
37. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые увеличивают его связывание с FcγRIIb.
38. Мультимерный химерный белок по п.37, содержащий одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из E258A, S267A, S267E, и L328F.
39. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые уменьшают его связывание с FcγR.
40. Мультимерный химерный белок по п.39, содержащий одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из L234A, L235A, G236R, N297A, N297Q, S298A, и L328R.
41. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые уменьшают его связывание с C1q.
42. Мультимерный химерный белок по п.41, содержащий одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из K322A, P331A, P331S, и, L234F и P331S.
43. Мультимерный химерный белок по п.42, отличающийся тем, что Fc-область тяжелой цепи содержит домен CH2 и домен CH3, выделенные из IgG1.
44. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что Fc-домен выделен из IgG4 и дополнительно содержит одну или более мутаций, которые увеличивают его связывание с FcγR.
45. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что Fc-домен подвергнут мутации путем замены остатка валина в положении 308 на остаток цистеина (V308C).
46. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что две дисульфидные связи в шарнирной области удалены путем мутации коровой шарнирной последовательности CPPC на SPPS.
47. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что дисульфидная связь в хвостовой части удалена путем замены остатка цистеина в положении 575 на остаток серина, треонина или аланина (C575S, C575T, или C575A).
48. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что коровая шарнирная последовательность CPPC подвергнута мутации до SPPS, и остаток цистеина хвостовой части в положении 575 заменен на остаток серина, треонина или аланина (C575S, C575T или C575A).
49. Мультимерный химерный белок по п.48, содержащий по существу нековалентные междоменные взаимодействия.
50. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что сайт гликозилирования в домене CH2 удален путем замены остатка аспарагина в положении 297 на остаток аланина (N297A) или остаток глутамина (N297Q).
51. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что сайт гликозилирования в хвостовой части удален путем замены остатка аспарагина в положении 563 на остаток аланина (N563A) или остаток глутамина (N563Q).
52. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что сайт гликозилирования в домене CH2 и сайт гликозилирования в хвостовой части, оба удалены путем замены остатка аспарагина в положении 297 на остаток аланина или остаток глутамина, и путем замены остатка аспарагина в положении 563 на остаток аланина или остаток глутамина (N297A/N563A или N297A/N563Q или N297Q/N563A или N297Q/N563Q).
53. Мультимерный химерный белок по п.1, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит или состоит из последовательности, соответствующей аминокислотам 6-222 любой из SEQ ID NO 26-29 и 32, или аминокислотам 6-222 любой из SEQ ID NO 50-64, или последовательности, соответствующей аминокислотам 6-333 SEQ ID NO 30 и 31.
54. Мультимерный химерный белок по п.53, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи дополнительно содержит шарнирную область, имеющую последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 3-25.
55. Мультимерный химерный белок по п.1, отличающийся тем, что каждое полипептидное мономерное звено содержит или состоит из двух идентичных полипептидных цепей, причем каждая полипептидная цепь содержит или состоит из последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO 26-32 и 50-64.
56. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, который является гексамерным или преимущественно гексамерным.
57. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит остаток лейцина в положении 310.
58. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что каждая Fc-область тяжелой цепи содержит остаток гистидина в положении 310.
59. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, который представляет собой очищенный гексамер.
60. Смесь, содержащая мультимерный химерный белок по любому из пп.1-58 в более чем одной мультимерной форме, в которой смесь обогащена гексамерной формой мультимерного химерного белка.
61. Смесь по п.60, в которой более чем 80% составляет гексамер.
62. Выделенная последовательность ДНК, кодирующая полипептидную цепь полипептидного мономерного звена мультимерного химерного белка по любому из предыдущих пунктов или ее составная часть.
63. Клонирующий или экспрессирующий вектор, содержащий одну или более последовательностей ДНК по п.62.
64. Клетка-хозяин, содержащая один или более клонирующих или экспрессирующих векторов по п.63.
65. Способ получения мультимерного химерного белка по любому из пп.1-59, включающий культивирование клетки-хозяина по п.64 при условиях, подходящих для экспрессии белка и сборки в мультимеры, и выделение и необязательно очистку мультимерного химерного белка.
66. Фармацевтическая композиция, содержащая мультимерный химерный белок по любому из пп.1-59 в комбинации с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, разбавителем или носителем.
67. Фармацевтическая композиция по п.66, дополнительно содержащая другие активные ингредиенты.
68. Мультимерный химерный белок по п.1 или фармацевтическая композиция по п.66 для применения при терапии.
69. Мультимерный химерный белок по п.1 или фармацевтическая композиция по п.66 для применения при лечении иммунных расстройств.
70. Применение мультимерного химерного белка по любому из пп.1-59 для получения лекарственного средства для лечения иммунных расстройств.
71. Применение по п.70, отличающееся тем, что иммунное расстройство выбрано из иммунной тромбоцитопении, синдрома Гийена-Барре, болезни Кавасаки и хронической воспалительной демиелинизирующей полиневропатии.
72. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые модулируют высвобождение цитокинов.
73. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые модулируют связывание с C1q.
74. Мультимерный химерный белок по п.1 или 2, содержащий одну или более мутаций, которые модулируют активацию тромбоцитов.
Наверх