Новые медицинские агенты и их применение - заявка 2016142370 на патент на изобретение в РФ

1. Нуклеотидная последовательность, кодирующая - от 5' к 3' - трансмембранный белок
OD - (L) -TD - ED
в котором
OD представляет собой домен олигомеризации,
L представляет собой линкер, который присутствует, если требуется,
TD представляет собой трансмембранный домен, происходящий из CD154 или из какого-либо трансмембранного белка типа II, и
ED представляет собой внеклеточный домен CD154
при том условии, что нуклеотидная последовательность не содержит последовательность, способную кодировать ни внутриклеточный участок CD154, ни внутриклеточный участок CD40.
2. Нуклеотид по п. 1, в котором ED, нуклеотидная последовательность по п. 1, кодирующая внеклеточный домен CD154, выбрана из:
i) SEQ ID NO: 11, т.е. остатков 199-846 SEQ ID NO: 1,
ii) SEQ ID NO: 11, т.е. остатков 199-846 SEQ ID NO: 1, но в которой один или более остатков 397-420 нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1 делетированы или заменены на другую нуклеиновую кислоту, чтобы устранить расщепление молекулы,
iii) SEQ ID NO 12, т.е. остатков 127-846 SEQ ID NO: 3,
iv) SEQ ID NO: 13, т.е. остатков 127-844 SEQ ID NO: 4,
v) SEQ ID NO: 14, т.е. остатков 127-844 SEQ ID NO: 5,
vi) нуклеотидной последовательности, имеющей по меньшей мере 95%, 98% или 99% идентичности последовательностей с последовательностью, определенной в каком-либо из пп. i)-v), или
vii) соответствующего внеклеточного домена CD154 млекопитающих.
3. Нуклеотидная последовательность по п. 1 или 2, в которой нуклеотидная последовательность, способная кодировать внутриклеточный участок CD154, представляет собой нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 16.
4. Нуклеотидная последовательность по п. 1 или 2, в котором TD, часть нуклеотидной последовательности, способная кодировать трансмембранный домен, происходит из каких-либо нуклеотидных последовательностей, способных кодировать CD154, лиганд OX40 человека или CD70 человека.
5. Нуклеотидная последовательность по п. 4, в которой, нуклеотидная последовательность, способная кодировать трансмембранный домен, имеет по меньшей мере 90% идентичности последовательностей с:
i) SEQ ID NO: 17, т.е. остатками 127-198 SEQ ID NO 1,
ii) SEQ ID NO: 20, т.е. трансмембранным доменом лиганда OX40 человека или
iii) SEQ ID NO: 22, т.е. трансмембранным доменом CD70 человека.
6. Нуклеотидная последовательность по п. 5, в которой TD, нуклеотидная последовательность, способная кодировать трансмембранный домен, имеет, по меньшей мере, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательностей с SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 20 или SEQ ID NO: 22.
7. Нуклеотидная последовательность по п. 6, в которой TD, нуклеотидная последовательность, способная кодировать трансмембранный домен, имеет SEQ ID NO: 17.
8. Нуклеотидная последовательность по п.1, в которой OD, нуклеотидная последовательность, способная кодировать домен олигомеризации, представляет собой изолейциновую «молнию» или тримеризованный домен T4-фибрина.
9. Нуклеотидная последовательность по п. 8, в которой OD, нуклеотидная последовательность, способная кодировать домен олигомеризации, представляет собой изолейциновую «молнию», имеющую SEQ ID NO: 23, т.е. остатки 10-108 SEQ ID NO: 1.
10. Нуклеотидная последовательность по п.1, также содержащая последовательность Козака.
11. Нуклеотидная последовательность по п. 10, в которой последовательность Козака соответствует остаткам 1-9 SEQ ID NO: 1.
12. Нуклеотидная последовательность по любому из пп.1, 2, 5-11, имеющая, по меньшей мере, 90% идентичности последовательностей с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5.
13. Нуклеотидная последовательность по любому из пп.1, 2, 5-11, имеющая, по меньшей мере, 95% или 98%, или 100% идентичности последовательностей с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5.
14. Комбинация нуклеотидных последовательностей по предшествующим пп. и нуклеотидной последовательности, способной кодировать иммуномодулятор.
15. Комбинация по п. 14, в которой нуклеотидная последовательность, способная кодировать иммуномодулятор, представляет собой ген лиганда 4-1BB или одноцепочечный вариабельный фрагмент гена анти-IL6R (scFv).
16. Комбинация нуклеотидных последовательностей по пп. 1-13 и модулятора сигнального пути или блокатора сигнального пути.
17. Комбинация по п. 15, имеющая, по меньшей мере, 95%, 98% или 100% идентичности последовательностей с SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 8.
18. Белок, кодируемый нуклеотидной последовательностью, как определено в каком-либо из пп. 1-13.
19. Белок, содержащий структуру
OD-(L)-TD-ED,
в которой
OD представляет собой аминокислотную последовательность, соответствующую домену олигомеризации,
L представляет собой линкер, который присутствует, если требуется,
TD представляет собой аминокислотную последовательность, соответствующую a трансмембранному домену, и
ED представляет собой аминокислотную последовательность, соответствующую внеклеточному домену CD154,
при том условии, что аминокислотная последовательность не содержит ни внутриклеточного участка CD154, ни внутриклеточного участка CD40.
20. Белок по п. 19, в котором внеклеточный домен CD154 выбран из:
i) SEQ ID NO: 24,
ii) SEQ ID NO: 24, но в которой одна или более аминокислота аминокислотной последовательности MQKGDQNP, соответствующей нуклеотидным остаткам 397-420 в SEQ ID NO: 1, делетированы или заменены другой аминокислотой, чтобы устранить расщепление молекулы,
iii) аминокислотных остатков, соответствующих нуклеотидам SEQ ID NO 12, т.е. остаткам 127-846 SEQ ID NO: 3,
iv) аминокислотных остатков, соответствующих нуклеотидам SEQ ID NO: 13, т.е. остаткам 127-844 SEQ ID NO: 4,
v) аминокислотных остатков, соответствующих нуклеотидам SEQ ID NO: 14, т.е. остаткам 127-844 SEQ ID NO: 5,
vi) аминокислотной последовательности, имеющей, по меньшей мере, 95%, 98% или 99% идентичности последовательностей с последовательностью, определенной в пп. i)-v), или
vii) соответствующего внеклеточного домена CD154 млекопитающих.
21. Белок по п. 19 или 20, в котором внутриклеточный участок CD154 соответствует аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 15.
22. Белок по п. 19 или 20, в котором ED имеет, по меньшей мере, 90% или, по меньшей мере, 95% идентичности последовательностей с SEQ ID NO: 24.
23. Белок по п. 19 или 20, в котором OD, домен олигомеризации, представляет собой домен изолейциновой «молнии» или домен тримеризации T4-фибрина.
24. Белок по п. 19 или 20, в котором TD, трансмембранный домен, происходит из трансмембранного домена CD154 или какого-либо трансмембранного белка типа II.
25. Белок по п. 24, в котором аминокислотная последовательность, соответствующая трансмембранному домену, имеет, по меньшей мере, 90%, 95%, 98% или 100% идентичности последовательностей с SEQ ID NO: 18.
26. Белок по п. 25, в котором остатки 14 и (или) 16 SEQ ID NO: 18 делетированы или замещены другой аминокислотой.
27. Белок по п. 24, имеющий, по меньшей мере, 90%, 95%, 98% или 100% идентичности последовательностей с SEQ ID NO: 2.
28. Носитель, содержащий нуклеотид по какому-либо из пп. 1-13.
29. Носитель по п. 28, выбранный из плазмид, вирусных векторов, транспозонов, клеток, искусственных клеток и искусственных носителей.
30. Носитель по п. 28 или 29 в форме вируса.

31. Носитель по п. 30, в котором вирус представляет собой вирус аденовирусного серотипа 5/35.
32. Носитель по п. 31, в котором аденовирусный вирус 5/35 имеет, по меньшей мере, один промоторный участок/сайт связывания E2F, расположенный против хода транскрипции от гена E1A, если требуется - сайт Sp1, расположенный против хода транскрипции от гена E1A, делецию E1AΔ24, E3 Δ6,7K и (или) делеции Δgp19K и набор трансгенов с трансгеном/трансгенами, включающими в себя pCMV, встроенный после участка гена L5.
33. Носитель по любому из пп. 28, 29, 31 или 32, содержащий нуклеотидную последовательность TMZ-CD154, как определено в SEQ ID NO: 1.
34. Носитель по любому из пп. 28, 29, 31 или 32, также содержащий ген лиганда 4-1BB или ген одноцепочечного вариабельного фрагмента анти-IL6R (scFv).
35. Комбинация двух или более носителей, как определено в каком-либо из пп. 28-34.
36. Комбинация двух носителей, из которых первый носитель, определен в каком-либо одном из пп. 28-33, а второй носитель содержит иммуномодулятор, такой как ген лиганда 4-1BB или ген одноцепочечного вариабельного фрагмента анти-IL6R (scFv).
37. Модифицированный аденовирус серотипа 5/35, содержащий управляемый промотором CMV набор трансгенов с трансгенами человека мембранного-связанного лиганда CD40, как определено в SEQ ID NO: 1 и полноразмерным 4-1BBL.
38. Аденовирус серотипа 5/35 по п. 37:
i) имеющий сайт промотора E2F против хода транскрипции от гена E1A,
ii) содержащий сайт Sp-1 против хода транскрипции от гена E1A,
iii) делецию E1A Δ24,
iii) E3 Δ6,7K/gp19K, и
iv) набор трансгенов, включающий в себя pCMV и трансгены, встроенные после участка гена L5.
39. Применение нуклеотидной последовательности или комбинации нуклеотидных последовательностей по любому из пп. 1-17, или белка по любому из пп. 18-27, или носителя или комбинации носителей по любому из пп. 27-36, или трансгенного аденовируса по любому из пп. 37- 38 в медицине.
40. Применение нуклеотидной последовательности или комбинации нуклеотидных последовательностей по любому из пп. 1-17, или белка по любому из пп. 18-27, или носителя или комбинации носителей по любому из пп. 27-36, или трансгенного аденовируса по любому из пп. 37-38 для лечения заболеваний, выбранных из заболеваний, связанных с иммунитетом, рака, инфекционных болезней, лимфопролиферативного заболевания, воспаления, хронического воспаления, аутоиммунитета и аллергии.
41. Применение нуклеотидной последовательности или комбинации нуклеотидных последовательностей по любому из пп. 1-17, или белка по любому из пп. 18-27, или носителя или комбинации носителей по любому из пп. 27-36, или трансгенного аденовируса по любому из пп. 37-38 в комбинации с лекарственным веществом, выбранным из противораковых агентов, иммуномодуляторов, противовирусных [препаратов], химиотерапий, цитокинов, рецепторов цитокинов, интерлейкинов, факторов роста, рецепторов факторов роста или антител, в медицине.
Наверх