Контрольный маркер для реализации способов анализа на пятнах - заявка 2016143732 на патент на изобретение в РФ

1. Способ обнаружения по меньшей мере одного анализируемого вещества по меньшей мере в одном образце, который включает следующие стадии:
a) размещение образца, подлежащего анализу, в присутствии пятна(пятен) компартмента твердого носителя, указанное пятно или по меньшей мере одно из указанных пятен содержит по меньшей мере один устойчивый контрольный маркер и по меньшей мере один захватывающий лиганд анализируемого вещества,
b) размещение по меньшей мере одного обнаруживающего лиганда анализируемого вещества в присутствии пятна(пятен) указанного компартмента, указанный обнаруживающий лиганд анализируемого вещества связывают с маркером прямого или непрямого обнаружения,
c) когда по меньшей мере один обнаруживающий лиганд анализируемого вещества связывают с маркером непрямого обнаружения, размещение репортера указанного маркера непрямого обнаружения в присутствии пятна(пятен) указанного компартмента,
d) когда репортер, используемый на стадии c) связывают с маркером непрямого обнаружения, размещение репортера маркера непрямого обнаружения, связанного с указанным репортером, используемым на стадии c), в присутствии пятна(пятен) указанного компартмента,
e) обнаружение по меньшей мере одного сигнала, продуцируемого по меньшей мере одним устойчивым контрольным маркером в указанном компартменте,
f) определение по меньшей мере одной сетки считывания по местоположению по меньшей мере одного сигнала, обнаруживаемого на стадии e),
g) необязательно, обнаружение сигнала, продуцируемого по меньшей мере одним маркером обнаружения обнаруживающего лиганда анализируемого вещества, и
h) необязательно, считывание сигнала, обнаруживаемого на стадии g), по сетке считывания, определяемой на стадии f).
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что сигнал, продуцируемый по меньшей мере одним маркером обнаружения обнаруживающего лиганда анализируемого вещества, представляет собой люминесцентный сигнал.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный или один из указанных устойчивых контрольных маркеров представляет собой флуорофор.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный или один из указанных устойчивых контрольных маркеров представляет собой флуорофор, у которого спектр возбуждения не перекрывается со спектром испускания сигнала, испускаемого или соответствующего маркеру обнаружения указанного обнаруживающего лиганда(лигандов) анализируемого вещества, и у которого спектр испускания не перекрывается или частично перекрывается со спектром испускания, соответствующим маркеру обнаружения указанного обнаруживающего лиганда(лигандов) анализируемого вещества.
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что:
- сигнал, продуцируемый по меньшей мере одним маркером обнаружения обнаруживающего лиганда анализируемого вещества, представляет собой свет, испускаемый хемилюминесцентным соединением, получаемым с помощью реакции пероксидазы с люминолом, аналогом люминола и/или производным люминола или аналога люминола, и
- сигнал, продуцируемый устойчивым контрольным маркером(маркерами), представляет собой свет, испускаемый за пределами длин волн от 375 до 550 нм.
6. Способ выбора устойчивого контрольного маркера, который включает следующие стадии:
a) осаждение маркера, подлежащего тестированию на поверхности твердого носителя, чтобы формировать по меньшей мере одно пятно,
b) необязательно, насыщение поверхности твердого носителя,
c) необязательно, сушка поверхности твердого носителя,
d) осуществление по меньшей мере одной из следующих стадий:
(i) выполнение одной или более стадий промывания,
(ii) размещение пятна(пятен) в присутствии по меньшей мере одного обнаруживающего лиганда,
(iii) размещение пятна(пятен) в присутствии по меньшей мере одного репортера,
(iv) размещение пятна(пятен) в присутствии по меньшей мере одного субстрата,
e) выбор маркера, который продуцирует сигнал в конце стадии d).
7. Твердый носитель для обнаружения по меньшей мере одного анализируемого вещества в образце, отличающийся тем, что указанный твердый носитель содержит по меньшей мере один компартмент, содержащий по меньшей мере одно пятно, указанное пятно содержит по меньшей мере один устойчивый контрольный маркер и по меньшей мере один захватывающий лиганд, указанный устойчивый контрольный маркер(маркеры) представляет собой маркер, который остается по меньшей мере частично прикрепленным к указанному пятну на поверхности твердого носителя во время реализации способа обнаружения по меньшей мере одного анализируемого вещества с тем, чтобы продуцировать поддающийся обнаружению сигнал в конце способа обнаружения.
8. Носитель по п. 7, отличающийся тем, что указанный или один из указанных устойчивых контрольных маркеров представляет собой устойчивый контрольный маркер(маркеры), выбранный с помощью способа по п. 6 и/или как определено по одному из пп. 3-5.
9. Способ получения твердого носителя для обнаружения по меньшей мере одного анализируемого вещества в образце, который включает следующие стадии:
a) осаждение, на поверхности по меньшей мере одного компартмента твердого носителя, смеси, которая содержит по меньшей мере один устойчивый контрольный маркер и по меньшей мере один захватывающий лиганд, чтобы получать пятно, указанный устойчивый контрольный маркер(маркеры) представляет собой маркер, который остается по меньшей мере частично прикрепленным к указанному пятну на поверхности твердого носителя во время реализации способа обнаружения по меньшей мере одного анализируемого вещества с тем, чтобы продуцировать поддающийся обнаружению сигнал в конце способа обнаружения,
b) повторение стадии a) n-1 раз, n представляет собой целое число больше чем или равное 1, чтобы получать n пятен, предназначенных для того, чтобы обнаруживать анализируемое вещество на поверхности указанного компартмента(компартментов),
c) необязательно, насыщение поверхности указанного компартмента(компартментов), и
d) необязательно, сушка поверхности указанного компартмента(компартментов).
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанный захватывающий лиганд(лиганды) выбирают из группы, состоящей из антитела, антигена, нуклеиновой кислоты и их сочетаний.
11. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что указанные устойчивые контрольные маркеры представляют собой флуорофоры.
12. Устройство для обнаружения по меньшей мере одного анализируемого вещества в образце, указанное устройство содержит:
- средство для обнаружения сигнала, продуцируемого по меньшей мере одним устойчивым контрольным маркером, и сигнала, продуцируемого по меньшей мере одним маркером обнаружения обнаруживающего лиганда анализируемого вещества на твердом носителе, указанное средство содержит осветительную систему, телецентрический объектив, диск с фильтрами и камеру, и
- средство для определения сетки считывания по местоположению сигнала, продуцируемого по меньшей мере одним устойчивым контрольным маркером, и для считывания сигнала, продуцируемого по меньшей мере одним маркером обнаружения обнаруживающего лиганда анализируемого вещества по указанной сетке считывания.
13. Применение по меньшей мере одного устойчивого контрольного маркера по меньшей мере в одном пятне, предназначенном для того, чтобы обнаруживать анализируемое вещество для того, чтобы обеспечивать надежность способа обнаружения по меньшей мере одного анализируемого вещества в образце, которое отличается тем, что оно включает:
- проверку качества указанного пятна после размещения указанного пятна в присутствии образца и по меньшей мере одного обнаруживающего лиганда анализируемого вещества, подлежащего обнаружению, и/или
- считывание сигнала, продуцируемого по меньшей мере одним маркером обнаружения обнаруживающего лиганда анализируемого вещества, подлежащего обнаружению, по сетке считывания, определяемой по местоположению сигнала, продуцируемого указанным устойчивым контрольным маркером(маркерами) и обнаруживаемого в конце способа анализа.
Наверх