Способ получения напина и круциферина или их смеси из рапса - заявка 2016143077 на патент на изобретение в РФ

1. Способ получения смеси рапсовых белков напина и/или круциферина из растения, причем указанный способ включает следующие стадии:
(а) обработка растения с получением неочищенного экстракта с помощью водной экстракции;
(б) получение целевых белков из супернатанта, полученного на стадии (а), и приведение значения рН супернатанта к диапазону от 5,0 до 6,0;
(в) разделение смеси, полученной на стадии (б), на катионообменнике с элюирующим буфером с высоким содержанием соли, где значение рН буфера находится в диапазоне от 5,0 до 6,0; и
(г) получение элюата.
2. Способ получения рапсовых белков напина и/или круциферина в чистом виде из растения, причем указанный способ включает следующие стадии:
(а) обработка растения с получением неочищенного экстракта с помощью водной экстракции;
(б) получение целевых белков из супернатанта, полученного на стадии (а), и приведение значения рН супернатанта к диапазону от 3,5 до 4,5;
(в) центрифугирование и получение осадка, содержащего круциферин;
(г) приведение значения рН супернатанта, полученного на стадии (в), к диапазону от 7,0 до 8,0;
(д) разделение смеси, полученной на стадии (г), на катионообменнике с элюирующим буфером с высоким содержанием соли, имеющим значение рН в диапазоне от 7,0 до 8,0; и
(е) получение элюата, содержащего напин.
3. Способ по п. 1, где значение рН на стадиях (б) и (в) находится в диапазоне от 5,5 до 6,0.
4. Способ по п. 2, где значение рН на стадии (б) находится в диапазоне от 3,8 до 4,2, а на стадиях (г) и (д) - в диапазоне от 7,2 до 7,8.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где экстрагент представляет собой фосфатный буфер, ТРИС (трис(гидроксиметил)аминометан)-буфер, МОПС (3-[N-морфолино]пропансульфоновая кислота)-буфер, ХЕППС (3-[4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинил]пропансульфоновая кислота)- буфер, барбитал-ацетатный буфер, буфер уксусная кислота-ацетат, PBS (натрий-фосфатный) буфер, MES (2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота)-буфер или этаноловый экстрагент.
6. Способ по любому из пп. 1-4, где элюирующий буфер представляет собой фосфатный буфер.
7. Способ по п. 6, где молярность фосфатного буфера находится в диапазоне от 5 мМ до 80 мМ.
8. Способ по п. 6, где элюирующий буфер дополнительно содержит NaCl с молярностью в диапазоне от 0,2 до 0,6 М.
9. Способ по любому из пп. 1-4, где целевой белок получают из семян.
10. Способ по любому из пп. 1-4, где катионообменная хроматография осуществляется с помощью метода "адсорбции во взвешенном слое" (ЕВА).
11. Способ по любому из пп. 1-4, где материал для катионообменной хроматографии представляет собой Streamline SP XL™ или сорбент Amberlite, сорбент Antibodix, сорбент Proteomix, DEAE Sepharose, SP Sepharose, катионный сорбент Whatman или сорбент ZirChrom-PEZ.
12. Смесь рапсовых белков, имеющая состав: около 55-60% напина и около 40-45% круциферина, полученная способом по любому из пп. 1-11.
Наверх