Продукты определенного состава, содержащие генетически модифицированные т-клетки - заявка 2016143385 на патент на изобретение в РФ

1. Способ получения генетически модифицированных Т-клеток, которые содержат химерный антигенный рецептор, включающий:
отделение или обогащение популяции Т-клеток, экспрессирующих CD8+, и/или популяции Т-клеток, экспрессирующих CD4+, таких как Т-клетки, которые получают из тимоцитов, или Т-клетки, которые получают из сконструированных предшественников, желательно иПС-клеток, из смешанной популяции Т-клеток для того, чтобы получить отделенную или обогащенную популяцию Т-клеток;
стимуляцию отделенной или обогащенной популяции Т-клеток для того, чтобы получить стимулированную популяцию CD8+ Т-клеток и/или CD4+ Т-клеток;
трансдукцию стимулированной популяции CD8+ Т-клеток и/или CD4+ Т-клеток вектором, при этом указанный вектор кодирует химерный антигенный рецептор и маркерную последовательность, где указанная маркерная последовательность кодирует селектируемый маркер на поверхности клетки, для того, чтобы получить трансдуцированную популяцию CD8+ Т-клеток и/или CD4+ Т-клеток;
приведение указанной трансдуцированной популяции CD8+ Т-клеток и/или CD4+ Т-клеток в контакт с по меньшей мере одним цитокином, который можно экзогенно добавить к Т-клеткам, например, дополнительно к любому цитокину, который может продуцироваться указанными клетками или присутствовать в среде, например, в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 дней, или в течение периода, который находится внутри диапазона, ограниченного любыми двумя из упомянутых выше периодов времени, для того, чтобы получить популяцию трансдуцированных, стимулированных цитокином CD8+ Т-клеток и/или CD4+ Т-клеток;
обогащение популяции трансдуцированных, стимулированных цитокином CD8+ Т-клеток и/или CD4+ Т-клеток путем селекции по указанной маркерной последовательности для того, чтобы получить обогащенную популяцию трансдуцированных и стимулированных цитокином CD8+ Т-клеток и/или CD4+ Т-клеток; и
размножение обогащенной популяции трансдуцированных, стимулированных цитокином CD8+ Т-клеток и/или CD4+ Т-клеток в течение по меньшей мере одного дня, например, в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 дней, или в течение периода, который находится внутри диапазона, ограниченного любыми двумя из упомянутых выше периодов времени, с получением указанных генетически модифицированных Т-клеток, которые содержат химерный антигенный рецептор.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что отделение или обогащение популяции CD8+ Т-клеток и/или популяции CD4+ Т-клеток из смешанной популяции Т-клеток осуществляют путем аффинной селекции Т-клеток, содержащих эпитоп, представленный на CD8 и/или CD4.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что отделение или обогащение популяции CD8+ Т-клеток и/или популяции CD4+ Т-клеток из смешанной популяции Т-клеток осуществляют с помощью проточной цитометрии.
4. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что отделение или обогащение популяции CD8+ Т-клеток и/или популяции CD4+ Т-клеток из смешанной популяции Т-клеток осуществляют с помощью иммуномагнитной селекции.
5. Способ по любому из пп. 1-2, отличающийся тем, что указанные генетически модифицированные CD8+ Т-клетки и/или CD4+ Т-клетки содержат по меньшей мере один рецептор, который вызывает, индуцирует, способствует или повышает способность к приживлению.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один рецептор представляет собой CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 и/или CD62L.
7. Способ по п. 5, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один рецептор представляет собой CD27, CD28 и/или CD62L.
8. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что стимуляцию выделенной популяции Т-клеток осуществляют путем приведения в контакт CD8+ и/или CD4+ Т-клеток с подложкой, с которой связаны антитела, такой как гранула или частица.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что подложка, с которой связаны антитела, содержит антитела к TCR, к CD2, к CD3, к CD4 и/или к CD28.
10. Способ по п. 8, отличающийся тем, что подложка, с которой связаны антитела, содержит антитела к CD3 и/или к CD28.
11. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что вектор дополнительно содержит первую последовательность, кодирующую лидерную последовательность, вторую последовательность, кодирующую лиганд-связывающий домен, третью последовательность, кодирующую сигнальный домен, и четвертую последовательность, кодирующую селектируемый маркер.
12. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что вектор дополнительно содержит последовательность, кодирующую спейсер.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что спейсер содержит шарнир IgG4.
14. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что вектор представляет собой вирусный вектор.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что вирусный вектор получают из вируса обезьян 40, аденовирусов, аденоассоциированного вируса (AAV), лентивируса или ретровирусов.
16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что вирусный вектор представляет собой рекомбинантный вектор на основе аденовируса, аденоассоциированного вируса, лентивируса или ретровируса.
17. Способ по п. 14, отличающийся тем, что вирусный вектор представляет собой вектор на основе лентивируса.
18. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что маркерная последовательность кодирует укороченный рецептор эпидермального фактора роста (EGFRt).
19. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что по меньшей мере один цитокин включает ГМ-КСФ, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-2 и/или IL-21.
20. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что по меньшей мере один цитокин включает IL-7, IL-15 и/или IL-21, в количестве 0,1 нг/мл, 0,2 нг/мл, 0,3 нг/мл, 0,4 нг/мл, 0,5 нг/мл, 0,6 нг/мл, 0,7 нг/мл, 0,8 нг/мл, 0,9 нг/мл или 1,0 нг/мл, или в количестве, которое находится внутри диапазона, ограниченного любыми двумя из упомянутых выше количеств, и/или в количестве 10 Ед/мл, 20 Ед/мл, 30 Ед/мл, 40 Ед/мл, 50 Ед/мл, 60 Ед/мл, 70 Ед/мл, 80 Ед/мл, 90 Ед/мл или 100 Ед/мл, или в количестве, которое находится внутри диапазона, ограниченного любыми двумя из упомянутых выше количеств.
21. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что по меньшей мере один цитокин включает IL-2, IL-15 и/или IL-21, при этом количество цитокина составляет 0,5 нг/мл и/или 50 Ед/мл.
22. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что контакт осуществляют в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 дней или в течение периода времени, который находится внутри диапазона, ограниченного любыми двумя из данных значений.
23. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что указанный способ осуществляют с выделенными, очищенными, обогащенными или отделенными CD4+ клетками в отсутствие CD8+ клеток, при существенном обеднении CD8+ клетками или при обогащении относительно CD8+ клеток.
24. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что указанный способ осуществляют с выделенными, очищенными, обогащенными или отделенными CD8+ клетками в отсутствие CD4+ клеток, при существенном обеднении CD4+ клетками или при обогащении относительно CD4+ клеток.
25. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что указанные Т-клетки, экспрессирующие CD4+, размножают в течение по меньшей мере 1 дня, например, в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 дней, или в течение периода, который находится внутри диапазона, ограниченного любыми двумя из упомянутых выше периодов времени.
26. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что CD8+ Т-клетки размножают в течение по меньшей мере 1 дня, например, в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 дней, или в течение периода, который находится внутри диапазона, ограниченного любыми двумя из упомянутых выше периодов времени.
27. Способ по п. 8, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает удаление подложки, с которой связаны антитела, такой как гранулы или частицы.
28. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что лиганд-связывающий домен химерного антигенного рецептора содержит антитело или его связывающую часть.
29. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что лиганд-связывающий домен химерного антигенного рецептора содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) или его связывающую часть.
30. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что лиганд-связывающий домен химерного антигенного рецептора содержит FMC63 или его связывающую часть.
31. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что лиганд-связывающий домен химерного антигенного рецептора специфичен к CD19.
32. Способ по любому из пп. 1-2, 6-7, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает криоконсервацию указанных генетически модифицированных CD8+ и/или CD4+ Т-клеток.
33. Популяция генетически модифицированных Т-клеток, содержащая:
множество подвергнутых аффинной селекции CD8+ и/или CD4+ Т-клеток при отсутствии CD8- и/или CD4- Т-клеток, при существенном обеднении CD8- и/или CD4- Т-клетками или при обогащении относительно CD8- и/или CD4- Т-клеток, при этом указанное множество подвергнутых аффинной селекции CD8+ и/или CD4+ Т-клеток содержит стимулированные рецепторы CD2, CD3, CD4 и/или CD28, и при этом указанное множество подвергнутых аффинной селекции CD8+ и/или CD4+ Т-клеток дополнительно содержит ген, кодирующий химерный антигенный рецептор, и селектируемый маркер на поверхности клетки, и при этом указанное множество подвергнутых аффинной селекции CD8+ и/или CD4+ Т-клеток повторно стимулируют по меньшей мере одним цитокином.
34. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 33, отличающаяся тем, что указанное множество подвергнутых аффинной селекции CD8+ и/или CD4+ Т-клеток дополнительно содержит по меньшей мере один рецептор, который вызывает, усиливает, улучшает или способствует приживлению.
35. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 33 или 34, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один рецептор, который вызывает, усиливает, улучшает или способствует приживлению, представляет собой CD45 RA, CD45 RO, CCR7, CD25, CD127, CD57, CD137, CD27, CD28 и/или CD62L.
36. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 34, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один рецептор, который вызывает, усиливает, улучшает или способствует приживлению, представляет собой CD27, CD28 и/или CD62L.
37. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по любому из пп. 33-34, 36, отличающаяся тем, что указанное множество подвергнутых аффинной селекции CD8+ и/или CD4+ Т-клеток дополнительно содержит вектор, содержащий первую последовательность, кодирующую лидерную последовательность, вторую последовательность, кодирующую лиганд-связывающий домен, третью последовательность, кодирующую сигнальный домен, и четвертую последовательность, кодирующую селектируемый маркер.
38. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 37, отличающаяся тем, что вектор дополнительно содержит последовательность, кодирующую спейсер.
39. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 38, отличающаяся тем, что спейсер содержит шарнир IgG4.
40. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по любому из пп. 33-34, 39, отличающаяся тем, что вектор представляет собой вирусный вектор.
41. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 40, отличающаяся тем, что вирусный вектор получают из вируса обезьян 40, аденовирусов, аденоассоциированного вируса (AAV), лентивируса или ретровирусов.
42. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 40, отличающаяся тем, что вирусный вектор представляет собой рекомбинантный вектор на основе аденовируса, аденоассоциированного вируса, лентивируса или ретровируса.
43. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 40, отличающаяся тем, что вирусный вектор представляет собой вектор на основе лентивируса.
44. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по любому из пп. 33-34, 43, отличающаяся тем, что селектируемый маркер клеточной поверхности кодирует укороченный рецептор эпидермального фактора роста (EGFRt).
45. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 37, отличающаяся тем, что лиганд-связывающий домен содержит антитело или его связывающую часть.
46. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 37, отличающаяся тем, что лиганд-связывающий домен содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) или его связывающую часть.
47. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 37, отличающаяся тем, что лиганд-связывающий домен содержит FMC63 или его связывающую часть.
48. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по п. 37, отличающаяся тем, что лиганд-связывающий домен специфичен к CD19.
49. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по любому из пп. 33-34, 48, отличающаяся тем, что указанная популяция содержит выделенные, очищенные, отделенные или обогащенные CD8+ Т-клетки в отсутствие CD4+ Т-клеток, при существенном обеднении CD4+ Т-клетками или при обогащении относительно CD4+ Т-клеток.
50. Популяция генетически модифицированных Т-клеток по любому из пп. 33-34, 48, отличающаяся тем, что указанная популяция содержит выделенные, очищенные, отделенные или обогащенные CD4+ Т-клетки в отсутствие CD8+ Т-клеток, при существенном обеднении CD8+ Т-клетками или при обогащении относительно CD8+ Т-клеток.
51. Композиция или комбинация продуктов для терапии человека, содержащая:
фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество; и
по меньшей мере одну популяцию генетически модифицированных Т-клеток согласно любому одному или более из пп. 33-50.
52. Композиция или комбинация продуктов по п. 51, отличающаяся тем, что указанная композиция или комбинация продуктов содержит популяцию генетически модифицированных Т-клеток по п. 49.
53. Композиция или комбинация продуктов по п. 51, отличающаяся тем, что указанная композиция или комбинация продуктов содержит популяцию генетически модифицированных Т-клеток по п. 50.
54. Композиция или комбинация продуктов по п. 51, отличающаяся тем, что указанная композиция или комбинация продуктов содержит популяцию генетически модифицированных Т-клеток по п. 49 и популяцию генетически модифицированных Т-клеток по п. 50, смешанных или совместно введенных при соотношении 1:1.
55. Способ лечения, ингибирования или облегчения заболевания у нуждающегося в этом субъекта включающий:
введение указанному субъекту по меньшей мере одной композиции или комбинации продуктов согласно любому одному или более из пп. 51-54.
56. Способ по п. 55, отличающийся тем, что указанный способ включает введение композиции или комбинации продуктов по п. 52.
57. Способ по п. 55, отличающийся тем, что указанный способ включает введение композиции или комбинации продуктов по п. 53.
58. Способ по п. 56, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает введение композиции или комбинации продуктов по п. 53.
59. Способ по п. 57, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает введение композиции или комбинации продуктов по п. 52.
60. Способ по п. 55, отличающийся тем, что указанный способ включает введение композиции или комбинации продуктов по п. 54, например, с помощью подхода, в котором указанные Т-клетки, экспрессирующие CD8+, вводят перед введением указанных Т-клеток, экспрессирующих CD4+, например, за 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50 или 60 минут до введения CD4+ Т-клеток или за период времени, который находится внутри диапазона, ограниченного любыми двумя из упомянутых выше моментов времени.
61. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что субъекта идентифицируют или выбирают для проведения ему противораковой терапии.
62. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, дополнительно включающий измерение или оценку ингибирования заболевания.
63. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, дополнительно включающий проведение указанному субъекту дополнительной противораковой терапии до, во время или после введения композиции или комбинации продуктов согласно любому одному или более из пп. 51-54.
64. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что указанную композицию или комбинацию продуктов согласно любому одному или более из пп. 51-54 вводят указанному субъекту путем адоптивного переноса клеток.
65. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что указанную композицию или комбинацию продуктов согласно любому одному или более из пп. 51-54 вводят указанному субъекту после того, как указанный субъект получил другой вид противораковой терапии.
66. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что указанную композицию или комбинацию продуктов согласно любому одному или более из пп. 51-54 вводят указанному субъекту после того, как указанный субъект получил другой вид противораковой терапии.
67. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что указанный субъект страдает от лейкоза.
68. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что субъект страдает от рецидивирующего и/или нечувствительного к химиотерапии CD19+ детского острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ).
69. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что субъект страдает от рецидивирующего и/или нечувствительного к химиотерапии CD19+ острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ).
70. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что указанный субъект страдает от аутоиммунного заболевания.
71. Способ согласно любому одному или более из пп. 55-60, отличающийся тем, что указанный субъект страдает от рецидива после ТГСК.
72. Способ по п. 1, отличающийся тем, что Т-клетка представляет собой предшественника Т-клетки.
73. Способ по п. 72, отличающийся тем, что предшественник Т-клетки представляет собой гематопоэтическую стволовую клетку (ГСК).
Наверх