Смешанный состав порошка среды и способ получения жидкой среды для культуры клеток - заявка 2016144057 на патент на изобретение в РФ

1. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток, который включает порошок основной среды и добавку к среде для культуры клеток, где добавка к среде для культуры клеток включает:
i) одну или более солей;
ii) один или более факторов роста;
iii) один или более неорганических ионов;
iv) добавки аминокислот, которые включают одну или более из аспарагина, глутамина, гистидина и серина;
v) одного или более буферов; и
vi) одного или антивспенивающих агентов.
2. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.1, где порошок основной среды включает модифицированную Дюльбекко среду Игла, среду Хэма F12, минимальную эссенциальную среду Игла, среду RPMI 1640 и модифицированную Дюльбекко среду Игла/Хэма F12 (DMEM/F-12; соотношение 1:1).
3. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.1, где порошок основной среды включает один или более из следующих компонентов или их комбинацию: биотин, хлорид кальция, холинхлорид, цианокобаламин (В12), D+ манноза, D-пантотенат кальция, декстроза (безводная), DL-альфа-липоевая кислота, нитрат трехвалентного железа 9Н2О, сульфат закисного железа 7Н2О, фолиевая кислота, глицин, гипоксантин, I-инозитол, L-аланин, L-аргинин, L-аспарагин, L-аспарагиновая кислота, L-цистеин HCl Н2О, L-цистин 2HCl, L-глутаминовая кислота (безводная), L-глутамин, L-глутатион, L-гистидин в виде свободного основания, L-гистидин HCl, L-изолейцин, L-лейцин, L-лизин, L-метионин, L-фенилаланин, L-пролин, L-серин, L-треонин, L-триптофан, L-тирозин, L-валин, хлорид магния, сульфат магния безводный, никотинамид, О-фосфорилэтаноламин, хлорид калия, путресцин 2HCl, пиридоксаль HCl, пиридоксин HCl, рибофлавин, сульфат натрия, одноосновный фосфат натрия Н2О, двухосновный фосфат натрия безводный, пируват натрия, тиамин HCl, тимидин, сульфат цинка 7Н2О, сульфат меди, диоксид селена, линолевая кислота, бета-меркаптоэтанол и этаноламин, свободное основание.
4. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.3, где порошок основной среды имеет концентрацию 8-30 г/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
5. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.4, где порошок основной среды имеет концентрацию приблизительно 13 г/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
6. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-5, который дополнительно включает индикатор pH.
7. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.6, где индикатор pH представляет собой феноловый красный Na, где феноловый красный Na присутствует при концентрации от приблизительно 0,001 до приблизительно 0,02 г/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
8. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.7, где феноловый красный Na присутствует при концентрации приблизительно 0,0069 г/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
9. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.3, где компоненты порошка основной среды имеют следующие заключительные концентрации при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
i) 0,0003-0,003 г/л биотина;
ii) 0,035-0,33 г/л хлорида кальция;
iii) 0,003-0,03 г/л холинхлорида;
iv) 0,0002-0,002 г/л цианокобаламина (В12);
v) 1-10 г/л D+ маннозы;
vi) 0,001-0,01 г/л D-пантотената кальция;
vii) 0.3-3,0 г/л декстрозы (безводной);
viii) 0,00003-0,0003 г/л DL-альфа-липоевой кислоты;
ix) 0,00001-0,00015 г/л нитрата трехвалентного железа;
x) 0,00005-0,0015 г/л сульфата железа;
xi) 0,001-0,01 г/л фолиевой кислоты;
xii) 0,007-0,20 г/л глицина;
xiii) 0,001-0,01 г/л гипоксантина 2Na;
xiv) 0,005-0,05 г/л I-инозитола;
xv) 0,003-0,03 г/л L-аланина;
xvi) 0,08-1,4 г/л L-аргинина;
xvii) 0,006-0,16 г/л L-аспарагина;
xviii) 0,005-0,10 г/л L-аспарагиновой кислоты;
xix) 0,005-0,05 г/л L-цистеина HCl;
xx) 0,02-0,2 г/л L-цистина 2HCl;
xxi) 0,005-0,15 г/л L-глутаминовой кислоты (безводной);
xxii) 0,02-1,5 г/л L-глутамина;
xxiii) 0,0003-0,003 г/л L-глутатиона;
xxiv) 0,02-0,2 г/л L-гистидина HCl;
xxv) 0,03-0,9 г/л L-изолейцина;
xxvi) 0,03-0,9 г/л L-лейцина;
xxvii) 0,05-1,5 г/л L-лизина;
xxviii) 0,01-0,3 г/л L-метионина;
xxix) 0,02-0,6 г/л L-фенилаланина;
xxx) 0,008-0,25 г/л L-пролина;
xxxi) 0,009-0,25 г/л L-серина;
xxxii) 0,03-0,9 г/л L-треонина;
xxxiii) 0,006-0,16 г/л L-триптофана;
xxxiv) 0,02-0,9 г/л L-тирозина 2Na;
xxxv) 0,03-0,9 г/л L-валина;
xxxvi) 0,01-0,18 г/л хлорида магния;
xxxvii) 0,02-0,12 г/л сульфата магния безводного;
xxxviii) 0,001-0,01 г/л никотинамида;
xxxix) 0,0005-0,005 г/л О-фосфорилэтаноламина;
xl) 0,1-1,0 г/л хлорида калия;
xli) 0,00002-0,0002 г/л путресцина 2HCl;
xlii) 0,001-0,01 г/л пиридоксаля HCl;
xliii) 0,00001-0,0001 г/л пиридоксина HCl,
xliv) 0,0001-0,001 г/л рибофлавина,
xlv) 2,0-15 г/л сульфата натрия,
xlvi) 0,01-0,2 г/л фосфата натрия моноосновного,
xlvii) 0,02-0,2 г/л двухосновного фосфата натрия безводного,
xlviii) 0,015-0,15 г/л пирувата натрия,
xlix) 0,001 -0,01 г/л тиамина HCl,
l) 0,0001-0,001 г/л тимидина,
li) 0,00006-0,0015 г/л сульфата цинка,
lii) 0,0000003-0,000006 г/л сульфата меди,
liii) 0,0000005-0,000008 г/л диоксида селена,
liv) 0,00001-0,0001 г/л линолевой кислоты,
lv) 0,0001-0,001 г/л бета-меркаптоэтанола; и
lvi) 0,0003-0,005 г/л этаноламина.
10. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.9, где компоненты порошка основной среды имеют следующие заключительные концентрации при гидратации с образованием среды для культуры клеток:
i) приблизительно 0,001 г/л биотина;
ii) приблизительно 0,11665 г/л хлорида кальция;
iii) приблизительно 0,00998 г/л холинхлорида;
iv) приблизительно 0,00068 г/л цианокобаламина (В12);
v) приблизительно 3 г/л D+ маннозы;
vi) приблизительно 0,00312 г/л D-пантотената кальция;
vii) приблизительно 1 г/л декстрозы (безводной);
viii) приблизительно 0,000103 г/л DL-альфа-липоевой кислоты;
ix) приблизительно 0,00005 г/л нитрата трехвалентного железа 9Н2О;
x) приблизительно 0,000417 г/л сульфата закисного железа 7Н2О;
xi) приблизительно 0,00366 г/л фолиевой кислоты;
xii) приблизительно 0,02626 г/л глицина;
xiii) приблизительно 0,0027 г/л гипоксантина 2Na;
xiv) приблизительно 0,01451 г/л I-инозитола;
xv) приблизительно 0,01336 г/л L-аланина;
xvi) приблизительно 0,27435 г/л L-аргинина;
xvii) приблизительно 0,0225 г/л L-аспарагина;
xviii) приблизительно 0,01995 г/л L-аспарагиновой кислоты;
xix) приблизительно 0,01756 г/л L-цистеина HCl Н2О;
xx) приблизительно 0,06256 г/л L-цистина 2HCl;
xxi) приблизительно 0,02206 г/л L-глутаминовой кислоты (безводной);
xxii) приблизительно 0,73 г/л L-глутамина;
xxiii) приблизительно 0,001 г/л L-глутатиона;
xxiv) приблизительно 0,07348 г/л L-гистидина HCl;
xxv) приблизительно 0,1057 г/л L-изолейцина;
xxvi) приблизительно 0,11096 г/л L-лейцина;
xxvii) приблизительно 0,16385 г/л L-лизина;
xxviii) приблизительно 0,03224 г/л L-метионина;
xxix) приблизительно 0,06748 г/л L-фенилаланина;
xxx) приблизительно 0,02875 г/л L-пролина;
xxxi) приблизительно 0,03676 г/л L-серина;
xxxii) приблизительно 0,10156 г/л L-треонина;
xxxiii) приблизительно 0,01902 г/л L-триптофана;
xxxiv) приблизительно 0,10771 г/л L-тирозина 2Na 2Н2О;
xxxv) приблизительно 0,09866 г/л L-валина;
xxxvi) приблизительно 0,028 г/л хлорида магния;
xxxvii) приблизительно 0,04884 г/л сульфата магния безводного;
xxxviii) приблизительно 0,00302 г/л никотинамида;
xxxix) приблизительно 0,0014 г/л О-фосфорилэтаноламина;
xl) приблизительно 0,31182 г/л хлорида калия;
xli) приблизительно 0,000081 г/л путресцина 2HCl;
xlii) приблизительно 0,003 г/л пиридоксаля HCl;
xliii) приблизительно 0,000031 г/л пиридоксина HCl,
xliv) приблизительно 0,000319 г/л рибофлавина,
xlv) приблизительно 6,1234 г/л сульфата натрия,
xlvi) приблизительно 0,0625 г/л одноосновного фосфата натрия Н2О,
xlvii) приблизительно 0,07099 r/л двухосновного фосфата натрия безводного,
xlviii) приблизительно 0,055 пирувата натрия,
xlix) приблизительно 0,00317 г/л тиамина HCl,
l) приблизительно 0,000364 г/л тимидина,
li) приблизительно 0,000432 г/л сульфата цинка 7Н2О,
lii) приблизительно 0,00000125 г/л сульфата меди 5Н2О,
liii) приблизительно 0,00000222 г/л диоксида селена,
liv) приблизительно 0,000042 г/л линолевой кислоты,
lv) приблизительно 0,00039065 г/л бета-меркаптоэтанола; и
lvi) приблизительно 0,0012 г/л этаноламина в виде свободного основания.
11. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-10, где одна или более солей подпункта i) в соответствии с пунктом 1 включает хлорид магния в концентрации 0,5-5 г/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
12. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.11, где хлорид магния имеет концентрацию приблизительно 1,428 г/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
13. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-12, где фактор роста включает рекомбинантный инсулин.
14. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.13, где инсулин имеет концентрацию 0,5-15 мг/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
15. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.14, где инсулин имеет концентрацию приблизительно 3 мг/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
16. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-15, где один или более неорганических ионов включают микроэлементы, выбранные из молибдата аммония, хромокалиевых квасцов, сульфата меди, хлорида лития, сульфата марганца, метасиликата натрия и их комбинаций.
17. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.16, где молибдат аммония представляет собой молибдат аммония 4Н2О; хромокалиевые квасцы представляют собой хромокалиевые квасцы 12Н2О, сульфат меди представляет собой сульфат меди 5Н2О, хлорид лития является хлоридом лития (безводным), сульфат марганца представляет собой сульфат марганца Н2О и метасиликат натрия является метасиликатом натрия 9Н2О.
18. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.17, где микроэлементы имеют следующие заключительные концентрации при гидратации с образованием среды для культуры клеток:
i) 0,0005-0,01 мг/л молибдата аммония 4Н2О;
ii) 0,0001-0,01 мг/л хромокалиевых квасцов 12Н2О;
iii) 0,001-0,125 мг/л сульфата меди 5Н2О;
iv) 0,001-0,1 мг/л хлорида лития (безводного);
v) 0,00004-0,004 мг/л сульфата марганца Н2О; и
vi) 0,04-4,2 мг/л метасиликата натрия 9Н2О.
19. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-18, где смешанный состав порошка среды для культуры клеток включает комбинацию молибдата аммония 4Н2О, хромокалиевых квасцов 12Н2О, сульфата меди 5Н2О, хлорида лития (безводного), сульфата марганца Н2О и метасиликата натрия 9Н2О.
20. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.19, где микроэлементы имеют следующие заключительные концентрации при гидратации с образованием среды для культуры клеток:
i) приблизительно 0,0037 мг/л молибдата аммония 4Н2О;
ii) приблизительно 0,001 мг/л хромокалиевых квасцов 12H2O;
iii) приблизительно 0,0125 мг/л сульфата меди 5Н2О;
iv) приблизительно 0,01 мг/л хлорида лития (безводного);
v) приблизительно 0,000452 мг/л сульфата марганца Н2О; и
vi) приблизительно 0,4263 мг/л метасиликата натрия 9Н2О.
21. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-20, где аминокислотная добавка включает комбинацию аспарагина Н2О, глутамина, гистидина и серина.
22. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-21, где аминокислотная добавка имеет следующую заключительную концентрацию при гидратации с образованием среды для культуры клеток:
i) 0,007-0,07 г/л аспарагина Н2О;
ii) 0,25-2,5 г/л глутамина;
iii) 0,5-5,0 г/л гистидина, свободного основания; и
iv) 0,01-0,1 г/л серина.
23. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-22, где аминокислотная добавка имеет следующую заключительную концентрацию при гидратации с образованием среды для культуры клеток:
i) приблизительно 0,0225 г/л аспарагина Н2О;
ii) приблизительно 0,73 г/л глутамина;
iii) приблизительно 1,552 г/л гистидина; и
iv) приблизительно 0,03676 г/л серина.
24. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-23, где один или более буферов является выбранным из группы, которая состоит из 3-(N-морфолино)пропансульфоновой кислоты (MOPS) в форме свободной кислоты, 3-(N-морфолино)пропансульфоновой кислоты (MOPS) Na, гидроксиэтил пиперазинэтансульфоновой кислоты (HEPES) и бикарбоната натрия.
25. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-24, где композиция включает комбинацию MOPS в форме свободной кислоты и MOPS Na.
26. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-25, где буферы имеют следующие заключительные концентрации при гидратации с образованием среды для культуры клеток:
i) 0,3-3 г/л MOPS в форме свободной кислоты; и
ii) l,0-10 г/л MOPS Na.
27. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-26, где антивспенивающий агент включает сополимер полиола на основе этиленоксида и пропиленоксида.
28. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-27, где антивспенивающий агент представляет собой Плюроник F68.
29. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по пп.1-28, где Плюроник F68 имеет концентрацию 0,1-10 г/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
30. Смешанный состав порошка среды для культуры клеток по п.29, где Плюроник F68 имеет концентрацию приблизительно 1 г/л при гидратации с образованием среды для культуры клеток.
31. Способ получения смешанного состава порошка среды для культуры клеток по пп.1-30, который включает соединение порошка основной среды; хлорида магния; инсулина; одного или более микроэлементов; аминокислотной добавки, которая включает один или более из аспарагина; глутамина; гистидина и серина; одного или более буферов; и одного или более антивспенивающих агентов.
32. Способ получения среды для культуры клеток для выращивания клеток млекопитающих, который включает соединение смешанного состава порошка среды для культуры клеток по пп.1-30 с водой с получением, таким образом, среды для культуры клеток для выращивания клеток млекопитающих.
33. Способ по п.32, где способ дополнительно включает соединение раствора, который включает FeSO42О, и хелатирующего агента.
34. Способ по п.33, где хелатирующий агент представляет собой этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА).
35. Способ по п.34, где FeSO42О и ЭДТА имеют следующие заключительные концентрации в среде для культуры клеток:
i) 0,004-0,04 г/л FeSO4 7H2O; и
ii) 0,006-0,06 г/л ЭДТА.
36. Способ по п.35, где FeSO42О и ЭДТА имеют следующие заключительные концентрации в среде для культуры клеток:
i) приблизительно 0,0138 г/л FeSO42О; и
ii) приблизительно 0,018625 г/л ЭДТА.
37. Способ по пп.32-36, который дополнительно включает приведение в контакт среды для культуры клеток с клетками млекопитающих.
38. Способ по п.37, где клетки млекопитающих являются выбранными из группы, которая состоит из клеток яичника китайского хомяка (СНО), клеток СНО DP12, клеток СНО DG44, клеток почки эмбриона человека (HEK), клеток HEK 293, и клеток почки новорожденного хомяка (BHK).
39. Способ по п.38, где клетки млекопитающих рекомбинантно экспрессируют белок, который представляет интерес.
40. Способ по п.39, где белок, который представляет интерес, является выбранным из группы, которая состоит из фактора свертывания крови VIII (FVIII), его вариантов и фрагментов.
41. Способ по п.40, где FVIII является выбранным из FVIII дикого типа, FVIII с делетированным В-доменом и FVIII, конъюгированного с биосовместимым полимером.
42. Способ по п.41, где биосовместимый полимер представляет собой полиэтиленгликоль (ПЭГ).
43. Способ по п.42, где ПЭГ является ковалентно присоединенным к полипептиду в одном или более положений аминокислот фактора VIII 81, 129, 377, 378, 468, 487, 491, 504, 556, 570, 711, 1648, 1795, 1796, 1803, 1804, 1808, 1810, 1864, 1903, 1911, 2091, 2118 и 2284.
44. Способ по пп.38-43, где клетки млекопитающих представляют собой клетки BHK.
Наверх