Коньюгаты "антитело - лекарственное средство" с высокой лекарственной нагрузкой - заявка 2016139340 на патент на изобретение в РФ

1. Конъюгат «антитело - лекарственное средство», содержащий формулу антитело-(Т-(Х-Y-Za)b)с, где
Т представляет собой (1) конструированную в определенном сайте содержащую глутамин метку, (2) эндогенный глутамин и/или (3) эндогенный глутамин, сделанный реакционноспособным посредством конструирования антитела или конструированной трансглутаминазы;
X представляет собой единицу-донор амина; Y представляет собой линкер; и Z представляет собой группировку-агент;
X-Y-Z представляет собой агент-донор амина, конъюгированный сайт-специфичным образом с содержащей глутамин меткой, эндогенным глутамином и/или реакционноспособным эндогенным глутамином;
а представляет собой целое число от 1 до 6;
b представляет собой целое число от 1 до 6;
с представляет собой целое число от 1 до 20; и
где произведение a, b и с (соотношение лекарственного средства к антителу) составляет по меньшей мере приблизительно 5.
2. Конъюгат по п. 1, где антитело представляет собой моноклональное антитело, поликлональное антитело, человеческое антитело, гуманизированное антитело, химерное антитело, биспецифичное антитело, минитело, диатело или фрагмент антитела.
3. Конъюгат по п. 1 или 2, где Т содержит по меньшей мере 1 эндогенный глутамин или реакционноспособный эндогенный глутамин.
4. Конъюгат по любому из пп. 1-3, где реакционноспособный эндогенный глутамин сделан реакционноспособным посредством дегликозилирования или посредством аминокислотной модификации другой аминокислоты антитела.
5. Конъюгат по п. 4, где модификация другой аминокислоты представляет собой замену в положении 297 (схема нумерации EU).
6. Конъюгат по п. 5, где замена представляет собой замену аспарагина (N) на глутамин (Q) или N на аланин (А) в положении 297.
7. Конъюгат по п. 5, где антитело дополнительно содержит вторую аминокислотную модификацию в положениях К222, К340 и/или К370.
8. Конъюгат по п. 7, где вторая аминокислотная модификация представляет собой замену лизина на аргинин.
9. Конъюгат по любому из пп. 1-8, где агент-донор амина конъюгирован сайт-специфичным образом с содержащей глутамин меткой в по меньшей мере одном или более чем одном положении антитела, выбранном из группы, состоящей из: (1) карбоксильного конца любой из легкой цепи, тяжелой цепи или как легкой цепи, так и тяжелой цепи; (2) амино-конца любой из легкой цепи, тяжелой цепи или как легкой цепи, так и тяжелой цепи; и (3) положения(ий) S60-R61, R108, Т135, S160, S168, S190-S192, P189-S192, G200-S202, К222-Т225, К222-Т223, Т223, L251-S254, M252-I253, E294-N297, E293-N297, N297 и/или G385; где содержащая глутамин метка введена в антитело или заменяет одну или более чем одну эндогенную аминокислоту антитела.
10. Конъюгат по п. 8, содержащий:
(а) аминокислотные замены в положениях N297Q и K222R, где агент-донор амина конъюгирован сайт-специфичным образом с эндогенным глутамином в положении 295 и замещенным глутамином в положении 297; и
(б) одну или более чем одну содержащую глутамин метку, где агент-донор амина конъюгирован сайт-специфичным образом с содержащей(ими) глутамин меткой(ами) на карбоксильном конце легкой цепи антитела;
где соотношение лекарственного средства к антителу составляет приблизительно 5-7.
11. Конъюгат по п. 10, где агент-донор амина дополнительно конъюгирован сайт-специфичным образом с содержащей глутамин меткой в одном или более чем одном положении, выбранном из группы, состоящей из S60-R61, R108, Т135, S160, S168, S190-S192, P189-S192, G200-S202, К222-Т225, К222-Т223, Т223, L251-S254, M252-I253, E294-N297, E293-N297, N297 и G385, где содержащая глутамин метка введена в антитело или заменяет одну или более чем одну эндогенную аминокислоту антитела, и где соотношение лекарственного средства к антителу составляет по меньшей мере приблизительно 6.
12. Конъюгат по п. 10, где агент-донор амина дополнительно конъюгирован сайт-специфичным образом с содержащей глутамин меткой на
карбоксильном конце тяжелой цепи антитела, и где соотношение лекарственного средства к антителу составляет приблизительно 6-9.
13. Конъюгат по п. 10, где агент-донор амина дополнительно конъюгирован сайт-специфичным образом с содержащей глутамин меткой, введенной после аминокислотного положения Т135 тяжелой цепи антитела, и где соотношение лекарственного средства к антителу составляет приблизительно 6-9.
14. Конъюгат по п. 10 или 13, где агент-донор амина дополнительно конъюгирован сайт-специфичным образом с содержащей глутамин меткой в аминокислотных положениях G200-S202 легкой цепи антитела, где эндогенные аминокислотные остатки заменены содержащей глутамин меткой, и где соотношение лекарственного средства к антителу составляет приблизительно 6-11.
15. Конъюгат по п. 8, содержащий агент-донор амина, конъюгированный сайт-специфичным образом с содержащей глутамин меткой
(а) на карбоксильном конце легкой цепи антитела,
(б) после аминокислотного положения Т135 тяжелой цепи антитела, и
(в) в аминокислотных положениях G200-S202 легкой цепи антитела, где эндогенные аминокислотные остатки заменены содержащей глутамин меткой,
где соотношение лекарственного средства к антителу составляет приблизительно 5-7.
16. Конъюгат по любому из пп. 1-15, где содержащая глутамин метка содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из Q, LQG, LLQGG (SEQ ID NO: 1), LLQG (SEQ ID NO: 2), LSLSQG (SEQ ID NO: 3), GGGLLQGG (SEQ ID NO: 4), GLLQG (SEQ ID NO: 5), LLQ, GSPLAQSHGG (SEQ ID NO: 6), GLLQGGG (SEQ ID NO: 7), GLLQGG (SEQ ID NO: 8), GLLQ (SEQ ID NO: 9), LLQLLQGA (SEQ ID NO: 10), LLQGA (SEQ ID NO: 11), LLQYQGA (SEQ ID NO: 12), LLQGSG (SEQ ID NO: 13), LLQYQG (SEQ ID NO: 14), LLQLLQG (SEQ ID NO: 15), SLLQG (SEQ ID NO: 16), LLQLQ (SEQ ID NO: 17), LLQLLQ (SEQ ID NO: 18), LLQGR (SEQ ID NO: 19), LLQGPP (SEQ ID NO: 20), LLQGPA (SEQ ID NO: 21), GGLLQGPP (SEQ ID NO: 22), GGLLQGA (SEQ ID NO: 23), LLQGPGK (SEQ ID NO: 25), LLQGPG (SEQ ID NO: 26), LLQGP (SEQ ID NO: 27), LLQP (SEQ ID NO: 28), LLQPGK (SEQ ID NO: 29),
LLQAPGK (SEQ ID NO: 30), LLQGAPG (SEQ ID NO: 31), LLQGAP (SEQ ID NO: 32) и LLQLQG (SEQ ID NO: 36).
17. Конъюгат по п. 16, где содержащая глутамин метка представляет собой LLQGA (SEQ ID NO: 11), LQG, GGLLQGA (SEQ ID NO: 23), LLQGPA (SEQ ID NO: 21), LLQGPP (SEQ ID NO: 20), GGLLQGPP (SEQ ID NO: 22), LLQGSG (SEQ ID NO: 13), LLQG (SEQ ID NO: 2), LLQYQG (SEQ ID NO: 14), LLQLLQG (SEQ ID NO: 15), LLQLQG (SEQ ID NO: 36), LLQLLQ (SEQ ID NO: 18), LLQLQ (SEQ ID NO: 17), LLQGR (SEQ ID NO: 19), LLQYQGA (SEQ ID NO: 12), SLLQG (SEQ ID NO: 16) или LLQLLQGA (SEQ ID NO: 10).
18. Конъюгат по п. 1, где структура «единица-донор амина - линкер» (X-Y) является линейной или разветвленной.
19. Конъюгат по п. 18, где структура «единица-донор амина - линкер» (X-Y) выбрана из группы, состоящей из Ac-Lys-Gly (ацетил-лизин-глицин), аминокапроновой кислоты, Ac-Lys-β-Ala (ацетил-лизин-β-аланин), амино-PEG2(полиэтиленгликоль)-С2, амино-PEG3-С2, амино-PEG6-С2, Ac-Lys-Val-Cit-РАВС (ацетил-лизин-валин-цитруллин-п-аминобензилоксикарбонил), амино-PEG6-C2-Val-Cit-PABC, амино-PEG3-C2-Val-Cit-PABC, аминокапроил-Val-Cit-РАВС, [(3R,5R)-1-{3-[2-(2-аминоэтокси)этокси]пропаноил}пиперидин-3,5-диил]бис-Val-Cit-РАВС, [(3S,5S)-1-{3-[2-(2-аминоэтокси)этокси]пропаноил}пиперидин-3,5-диил]бис-Val-Cit-РАВС, путресцина и Ac-Lys-путресцин.
20. Конъюгат по п. 1, где группировка-агент представляет собой цитотоксический агент.
21. Конъюгат по п. 20, где цитотоксический агент выбран из группы, состоящей из антрациклина, ауристатина, камптотецина, комбретастатина, доластатина, дуокармицина, энедиина, гелданамицина, индолинобензодиазепинового димера, майтансина, пуромицина, пирролобензодиазепинового димера, таксана, алкалоида барвинка, тубулизина, гемиастерлина, сплайсостатина, пладиенолида и их стереоизомеров, изостеров, аналогов или производных.
22. Конъюгат по любому из пп 1-18, где агент-донор амина выбран из группы, состоящей из Alexa 488 кадаверина, 5-FITC (флуоресцеин изотиоцианат) кадаверина, Alexa 647 кадаверина, Alexa 350 кадаверина,
5-TAMRA (карбокситетраметилродамин) кадаверина, 5-FAM кадаверина, SR101 (сульфородамин 101) кадаверина, 5,6-TAMRA кадаверина, 5-FAM (5-карбоксифлуоресцеин) лизина, Ac-Lys-Gly-MMAD (монометилауристатин D), амино-PEG3-C2-MMAD, амино-PEG6-C2-MMAD, амино-PEG3-C2-аминононаноил-MMAD, аминокапроил-Val-Cit-PABC-MMAD, амино-PEG3-C2-Val-Cit-PABC-MMAD, амино-PEG6-C2-Val-Cit-PABC-MMAD, Ac-Lys-Val-Cit-PABC-MMAD, аминокапроил-MMAD, Ac-Lys-β-Ala-MMAD, амино-PEG2-C2-ММАЕ(монометилауристатин E), аминокапроил-ММАЕ, амино-PEG3-C2-MMAE, аминокапроил-MMAF(монометилауристатин F), аминокапроил-Val-Cit-PABC-MMAE, амино-PEG-6-C2-Val-Cit-PABC-MMAE, Ac-Lys-Val-Cit-PABC-MMAE, аминокапроил-Val-Cit-PABC-MMAF, амино-PEG-6-C2-Val-Cit-PABC-MMAF, Ac-Lys-Val-Cit-PABC-MMAF, амино-PEG6-C2-Val-Cit-PABC-0101, Ac-Lys-Val-Cit-PABC-0101, путресцинилгелданамицина, Ac-Lys-путресцинилгелданамицина, аминокапроил-3377, амино-PEG6-С2-3377, аминокапроил-0131, амино-PEG6-C2-0131, аминокапроил-0121, амино-PEG6-C2-0121, [(3R,5R)-1-{3-[2-(2-аминоэтокси)этокси]пропаноил}пиперидин-3,5-диил]бис-Val-Cit-РАВС-MMAD, [(3R,5R)-1-{3-[2-(2-аминоэтокси)этокси]пропаноил}пиперидин-3,5-диил]бис-Val-Cit-PABC-MMAE, 2-аминоэтокси-PEG6-NODAGA и N-2-ацетил-L-лизил-L-валил-N~5~-карбамоил-N-[4-({[(2-{[(3R,5S,7R,8R)-8-гидрокси-7-{(1E,3E)-5-[(2S,3S,5R,6R)-5-{[(2Z,4S)-4-гидроксипент-2-еноил]амино}-3,6-диметилтетрагидро-2Н-пиран-2-ил]-3-метилпента-1,3-диен-1-ил}-1,6-диоксаспиро[2.5]окт-5-ил]ацетил}гидразинил)карбонил]окси}метил)фенил]-L-орнитинамида.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат по любому из пп. 1-22 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
24. Фармацевтическая композиция, содержащая совокупность конъюгатов по любому из пп. 1-22, где среднее соотношение лекарственного средства к антителу составляет по меньшей мере приблизительно 5,0.
25. Фармацевтическая композиция, содержащая совокупность конъюгатов «антитело - лекарственное средство», по меньшей мере один из которых представляет собой конъюгат по любому из пп. 1-22, и где среднее соотношение лекарственного средства к антителу составляет по меньшей мере приблизительно 4,1.
26. Способ лечения рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 23-25.
27. Способ ингибирования роста или прогрессирования опухоли у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 23-25.
28. Способ диагностики рака у субъекта, у которого подозревают рак, включающий (а) приведение образца от субъекта в контакт с конъюгатом по п. 1 в условиях, приводящих к связыванию конъюгата с раковым белком, и (б) определение наличия связывания конъюгата с раковым белком.
29. Способ получения конъюгата по п. 1, включающий стадии, на которых:
(а) берут молекулу антитело-Т, которая содержит антитело и содержащую глутамин метку и/или антитело с эндогенным и/или реакционноспособным эндогенным глутамином;
(б) приводят агент-донор амина в контакт с молекулой антитело-Т в присутствии трансглутаминазы; и
(в) обеспечивают возможность молекуле антитело-Т ковалентно связываться с агентом-донором амина с образованием конъюгата «антитело - лекарственное средство».
30. Способ по п. 29, где конъюгат имеет эффективность конъюгирования по меньшей мере приблизительно 51%.
31. Способ по п. 29, где трансглутаминаза представляет собой микробную, очищенную или конструированную трансглутаминазу.
32. Способ по п. 29, дополнительно включающий стадию очистки, где конъюгат очищают посредством хроматографии.
Наверх